莊燦展　金學(xué)迎　王乃龍

為探究傳統(tǒng)化妝品原料薄荷醇的功效及在擴(kuò)充其化妝品中的應(yīng)用范圍。首先對(duì)薄荷醇進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)確定在駐留產(chǎn)品最高可添加量為1.7%；再通過(guò)斑馬魚(yú)胚胎生物模型試驗(yàn)進(jìn)行了初步體外測(cè)試，測(cè)試了薄荷醇原料0.55%、0.65%、0.75%、0.85%及0.95%濃度的修護(hù)、滋養(yǎng)、保濕、抗敏舒緩4種功效，結(jié)果表明，0.65%的薄荷醇濃度具有較好的效果，均有顯著性差異（P<0.05）；隨后進(jìn)行了人體功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)，測(cè)試了添加0.55%、0.65%、0.75%、0.85%及0.90%濃度的薄荷醇唇霜的修護(hù)、滋養(yǎng)、保濕、舒緩功效。結(jié)果表明，0.75%、0.85%的薄荷醇唇霜效果較好，相關(guān)功效參數(shù)均有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)合以上試驗(yàn)表明，薄荷醇配比在設(shè)定質(zhì)量濃度下具有皮膚修護(hù)、滋養(yǎng)、保濕、舒緩功效。

關(guān)鍵詞：薄荷醇；功效評(píng)價(jià)；斑馬魚(yú)胚胎；修護(hù)；滋養(yǎng)；保濕；舒緩

薄荷醇是一種環(huán)狀單萜烯醇，天然存在于薄荷、辣薄荷或其他薄荷品種中。由于薄荷醇具有的獨(dú)特香氣和清涼特性，被廣泛應(yīng)用于各種日常消費(fèi)品中，包括藥品、化妝品、煙草、糖果、口香糖、利口酒、牙膏和肥皂。其中，薄荷醇在化妝品行業(yè)應(yīng)用已有較長(zhǎng)的歷史，廣泛應(yīng)用到乳液、爽身粉、足部護(hù)理、唇部護(hù)理、洗發(fā)香波、沐浴露等產(chǎn)品中，主要起到清涼止癢、收斂鎮(zhèn)靜、的作用。基于以上原因目前市售的化妝品也習(xí)慣將薄荷醇視為舒緩功效物，但是相關(guān)研究較少，而且諸如保濕、修護(hù)等其他功效暫未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。為了更全面地了解薄荷醇作為傳統(tǒng)化妝品原料的功效特性及其在唇部護(hù)理產(chǎn)品中的應(yīng)用，我們對(duì)此進(jìn)行了深入研究。本文將先確定薄荷醇在駐留產(chǎn)品中的安全添加量，再通過(guò)使用斑馬魚(yú)胚胎生物模型對(duì)薄荷醇原料進(jìn)行體外測(cè)試，對(duì)薄荷醇的功效進(jìn)行初步篩查；因斑馬魚(yú)試驗(yàn)無(wú)法完全替代人體功效測(cè)試，然后對(duì)添加薄荷醇的唇部化妝品進(jìn)行人體功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)，結(jié)合非創(chuàng)傷性儀器檢測(cè)人體皮膚的生理學(xué)參數(shù)，綜合系統(tǒng)地研究薄荷醇在皮膚修護(hù)、滋養(yǎng)、保濕和舒緩方面的功效。這將為薄荷醇在唇部護(hù)理產(chǎn)品中的應(yīng)用及功效提供參考依據(jù)。

一、實(shí)驗(yàn)部分

（一）主要材料及儀器

主要材料：薄荷醇（99.6%）；曼秀雷敦基質(zhì)唇霜樣品；0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.90% （w/w）薄荷醇的唇霜樣品；75%乙醇溶液；飽和KCl溶液；3M醫(yī)用膠帶；純化水。

儀器：皮膚角質(zhì)層水分含量探頭（Corneometer CM825），德國(guó)Courage+Khazaka （CK）公司；經(jīng)皮水分流失測(cè)量?jī)x（Vapometer SWL5201），芬蘭Delfin公司；皮膚pH探頭（Skin-pH-Meter PH905），德國(guó)Courage+Khazaka （CK）公司；皮膚亮度測(cè)量?jī)x

（SkinGlossMeter SG1201），芬蘭Delfin公司：多功能3D皮膚成像分析儀（Antera 3D）愛(ài)爾蘭Miravex公司；皮膚黑紅色素探頭（Mexameter MX18），德國(guó)Courage+Khazaka （CK）公司。

（二）實(shí)驗(yàn)方法

1.薄荷醇的制備

薄荷醇（薄荷腦）的制備按照薄荷油冷卻結(jié)晶法提取，工藝如圖1：薄荷原油先靜置24 h，一次凍析21h-27h得初腦和二部油，二部油進(jìn)行二次凍析46h-60 h得二部腦和毛素油。對(duì)初腦和二部腦分別進(jìn)行加熱熔化、脫水和過(guò)濾，與烘腦油、熔化油混合，經(jīng)結(jié)晶，烘腦，晾腦，即得成品薄荷腦。最終成品薄荷腦的含量測(cè)定可達(dá)95%～100%。原料及制備工藝由黃山天目薄荷藥業(yè)有限公司提供。

2.薄荷醇安全性評(píng)價(jià)

安全性評(píng)價(jià)-斑馬魚(yú)胚胎急性毒性測(cè)試：隨機(jī)挑選20尾4-128 hpf （hour post-fertilization，hpf）的斑馬魚(yú)胚胎暴露于6.7g/L、3.0g/L、1.4g/L、0.63g/L、0.28g/L、0.13g/L、0.059g/L和0.027g/L薄荷醇樣品溶液中，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組，暴露48h后于顯微鏡觀察記錄死亡魚(yú)胚胎數(shù)目，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線后計(jì)算半數(shù)致死濃度和10%致死濃度。實(shí)驗(yàn)測(cè)試方法與結(jié)果由水中銀（國(guó)際）生物科技有限公司提供。

3.薄荷醇體外功效研究

修護(hù)功效-斑馬魚(yú)胚胎尾鰭修護(hù)促進(jìn)測(cè)試；每組隨機(jī)挑選24尾發(fā)育正常的72 hpf斑馬魚(yú)胚胎，使用0.04%三卡因溶液麻醉后，于顯微鏡下用實(shí)驗(yàn)解剖刀切除斑馬魚(yú)胚胎尾鰭，使用體視顯微鏡下拍照記錄；隨后將斑馬魚(yú)胚胎轉(zhuǎn)移到96孔板中，每孔含一粒魚(yú)胚胎和0.2mL的樣品溶液，放置于28℃±1℃恒溫箱中培養(yǎng)48h±1h后，體視顯微鏡下拍照，計(jì)數(shù)每尾魚(yú)胚胎尾鰭長(zhǎng)度后計(jì)算尾鰭修護(hù)促進(jìn)率，通過(guò)評(píng)價(jià)受試物促進(jìn)尾鰭修護(hù)的能力來(lái)評(píng)定受試物具有修護(hù)功效。實(shí)驗(yàn)設(shè)置模型對(duì)照組和樣品組，樣品組分別為0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.95%等5種濃度的薄荷醇溶液（文中樣品組使用的濃度%均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。（注：薄荷醇體外功效研究實(shí)驗(yàn)測(cè)試方法與結(jié)果，均由水中銀（國(guó)際）生物科技有限公司提供）

滋養(yǎng)功效-斑馬魚(yú)胚胎血液循環(huán)促進(jìn)功效測(cè)試：每組隨機(jī)挑選20尾發(fā)育正常的72hpf斑馬魚(yú)胚胎；隨后將斑馬魚(yú)胚胎轉(zhuǎn)移至6cm培養(yǎng)皿中，加入8mL的樣品溶液，放置于28℃±1℃恒溫箱中培養(yǎng)2h±0.5h后，用0.04%三卡因溶液麻醉魚(yú)胚胎2min，于顯微鏡下對(duì)魚(yú)胚胎尾部主動(dòng)脈血管進(jìn)行20s拍攝，用DanioScope軟件對(duì)每尾魚(yú)胚胎尾部主動(dòng)脈血液流動(dòng)相對(duì)速度進(jìn)行測(cè)量取平均值并計(jì)算血液循環(huán)促進(jìn)率，通過(guò)評(píng)價(jià)受試物促進(jìn)血液循環(huán)的能力來(lái)評(píng)定受試物具有滋養(yǎng)功效。實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對(duì)照組和樣品組，樣品組分別為0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.95%等5種濃度的薄荷醇溶液。

保濕功效一斑馬魚(yú)胚胎失水抑制測(cè)試：每組隨機(jī)挑選24尾發(fā)育正常的72hpf斑馬魚(yú)胚胎；隨后將斑馬魚(yú)胚胎轉(zhuǎn)移至3cm培養(yǎng)皿中，加入5mL含樣品的失水模型誘導(dǎo)劑溶液，放置于28℃±1℃恒溫箱中培養(yǎng)3h±0.5h后，用0.04%三卡因溶液麻醉魚(yú)胚胎2min，于顯微鏡下對(duì)魚(yú)胚胎尾部進(jìn)行拍攝，用分析軟件Image J打開(kāi)照片，量度每尾魚(yú)胚胎從肛門(mén)到尾鰭末端區(qū)域魚(yú)胚胎尾巴面積并計(jì)算尾巴面積縮小抑制率，通過(guò)評(píng)價(jià)受試物抑制尾巴失水縮小的能力來(lái)評(píng)定受試物具有保濕功效。實(shí)驗(yàn)設(shè)置模型對(duì)照組（15g/L NaCl）、空白對(duì)照組（魚(yú)胚胎培養(yǎng)液）和樣品組，樣品組分別為0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.95%等5種濃度的薄荷醇溶液。

抗敏舒緩功效一化妝品抗過(guò)敏的測(cè)定斑馬魚(yú)胚法：每組隨機(jī)挑選30尾發(fā)育正常的72 hpf斑馬魚(yú)胚胎；將斑馬魚(yú)胚胎轉(zhuǎn)移至96孔板中，每孔10尾斑馬魚(yú)100μL樣品溶液，放置于28℃±1℃恒溫箱中培養(yǎng)2h后，樣品組每孔加入100μL C48/80工作液，繼續(xù)放置于28℃±1℃恒溫箱中培養(yǎng)90min，每孔取100μL上清液至新的96孔板中，加入100μL的1g/L BAPNA溶液混合，于37℃±1℃恒溫箱中避光反應(yīng)24h后于酶標(biāo)儀中讀取A405的吸光度（OD）并類胰蛋白酶抑制率，通過(guò)評(píng)價(jià)抑制類胰蛋白酶水平的能力來(lái)評(píng)定受試物具有抗敏舒緩功效。實(shí)驗(yàn)設(shè)置測(cè)試中同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組（魚(yú)胚胎培養(yǎng)液）、模型對(duì)照組（100μL魚(yú)胚胎培養(yǎng)液+100μL的10mg/LC48/80溶液）和樣品組，樣品組為0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.95%等5種濃度的薄荷醇與C48/80的溶液。

4.薄荷醇人體功效研究

（1）修護(hù)功效測(cè)試

本次實(shí)驗(yàn)共分為6組，每組至少30名受試者，性別不限，年齡為18至60歲符合相關(guān)測(cè)試要求的健康受試者。受試者在實(shí)驗(yàn)員監(jiān)督下遵循標(biāo)準(zhǔn)程序清潔唇部，并在恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)室（溫度：20℃～22℃、濕度：40%～60%）中靜坐30 min。通過(guò)Corneometer測(cè)定唇部的皮膚水分含量初始值（初始值不大于60 a.u.），通過(guò)Vapometer測(cè)定唇部的皮膚TEWL初始值（初始值不小于15 g/m2h），通過(guò)Skin-pH-Meter測(cè)定唇部的皮膚pH初始值。隨后，其中5組受試者分別使用含0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.90%薄荷醇的唇霜樣品，1組受試者使用基質(zhì)唇霜（不含薄荷醇）作為陰性對(duì)照組，受試者每天早晚各使用一次，均勻涂抹于嘴唇。并于連續(xù)使用試驗(yàn)產(chǎn)品了天后回訪研發(fā)中心測(cè)定皮膚水分含量、TEWL值及pH值。

參考團(tuán)標(biāo)T／GDCA 009-2022，皮膚TEWL值越小，表示皮膚鎖水能力越好，皮膚屏障越好；皮膚水分含量值越大，表示皮膚水分含量越高；皮膚表面的pH值一般維持在4.0～6.0，有利于皮膚表面正常菌群的生長(zhǎng)，當(dāng)pH值偏弱酸性，利于皮脂膜的修護(hù)。使用試驗(yàn)產(chǎn)品后，主要參數(shù)皮膚TEWL值降低，皮膚角質(zhì)層水分含量升高，且與使用試驗(yàn)產(chǎn)品前比較，差異有顯著性，皮膚pH值維持在4.0～6.0之間，表示試驗(yàn)產(chǎn)品具有修護(hù)功效。

（2）滋養(yǎng)功效測(cè)試

本次實(shí)驗(yàn)共分為6組，每組至少30名受試者，性別不限，年齡為18至60歲符合相關(guān)測(cè)試要求的健康受試者。受試者在實(shí)驗(yàn)員監(jiān)督下遵循標(biāo)準(zhǔn)程序清潔唇部，并在恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)室（溫度：20℃～22℃、濕度：40%～60%）中靜坐30 min。通過(guò)Corneometer測(cè)定唇部的皮膚水分含量初始值（初始值不大于60a.u.），通過(guò)SkinGlossMeter測(cè)定唇部的皮膚光澤度初始值，通過(guò)Antera 3D拍攝唇部，分析唇部照片粗糙度Ra及粗糙度Rq初始值。隨后，其中5組受試者分別使用含0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.90%薄荷醇的唇霜樣品，l組受試者使用基質(zhì)唇霜（不含薄荷醇）作為陰性對(duì)照組、受試者每天早晚各使用一次，均勻涂抹于嘴唇。并于連續(xù)使用試驗(yàn)產(chǎn)品了天后回訪研發(fā)中心測(cè)定皮膚水分含量、皮膚光澤度、粗糙度Ra值及粗糙度Rq值。

參考團(tuán)標(biāo)T-SH FCA 003-2022，皮膚水分含量值越大，表示皮膚水分含量越高；皮膚光澤度值越大，表示皮膚越有光澤；皮膚粗糙度Ra值、Rq值越小，表示皮膚越平滑；使用試驗(yàn)產(chǎn)品后，皮膚光澤度升高，皮膚角質(zhì)層水分含量升高，皮膚粗糙度Ra值、Rq值降低，且與使用試驗(yàn)產(chǎn)品前比較，其中任意兩個(gè)參數(shù)變化結(jié)果差異有顯著性，表示試驗(yàn)產(chǎn)品具有滋養(yǎng)功效。

（3）保濕功效測(cè)試

本次實(shí)驗(yàn)至少30名受試者，性別不限，年齡為18至60歲，手臂無(wú)皮膚疾病，皮膚表面形態(tài)正常且無(wú)影響結(jié)果判定者。受試者在實(shí)驗(yàn)員監(jiān)督下遵循標(biāo)準(zhǔn)程序清潔手臂，并在恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)室（溫度：20℃～22℃、濕度：40%～60%）中靜坐30 min。在左右2個(gè)前臂內(nèi)側(cè)選擇了個(gè)2 cm×3 cm的區(qū)域，通過(guò)Corneometer測(cè)定了個(gè)區(qū)域的皮膚角質(zhì)層水分含量初始值，隨后，按（2.0±0.1）mg/cm2用量根據(jù)隨機(jī)表涂抹含0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.90%薄荷醇的唇霜樣品，以涂抹唇霜基質(zhì)（不含薄荷醇）作為陰性對(duì)照、不涂抹任何樣品作為空白對(duì)照，并于涂抹后4h、8h測(cè)定皮膚角質(zhì)層水分含量。

參照行標(biāo)QB／T 4256-2011，皮膚角質(zhì)層水分含量越高，表示皮膚含水量越高；使用試驗(yàn)產(chǎn)品后，試驗(yàn)產(chǎn)品組的皮膚角質(zhì)層水分含量值升高，差異具有顯著性，且變化量高于空白對(duì)照，差異具有顯著性，表示試驗(yàn)產(chǎn)品具有保濕的功效。

（4）舒緩功效測(cè)試

本次實(shí)驗(yàn)至少30名受試者，性別不限，年齡為18至60歲，手臂無(wú)皮膚疾病，皮膚表面形態(tài)正常且無(wú)影響結(jié)果判定者。受試者在實(shí)驗(yàn)員監(jiān)督下遵循標(biāo)準(zhǔn)程序清潔手臂，并在恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)室（溫度：20℃～22℃、濕度：40%～60%）中靜坐30 min。在左右2個(gè)前臂內(nèi)側(cè)選擇了個(gè)2 cm×3 cm的區(qū)域，通過(guò)Vapometer測(cè)定兩個(gè)區(qū)域的TEWL初始值，通過(guò)Mexameter測(cè)定了個(gè)區(qū)域的紅斑指數(shù)（ El）初始值，通過(guò)Antera 3D拍攝了個(gè)測(cè)試區(qū)域，分析7個(gè)區(qū)域的a*初始值及泛紅初始值。隨后，使用3M醫(yī)用膠帶剝脫角質(zhì)層20次建立膠帶撕脫受損模型，分別測(cè)定TEWL值、EI值、a*值、泛紅值。了個(gè)測(cè)試區(qū)域膠帶撕脫前后各個(gè)指標(biāo)變差且均有差異性（P<0.05），及各個(gè)測(cè)試區(qū)域之間沒(méi)有差異性（P>0.05）即為建模成功。根據(jù)隨機(jī)表按（2.0±0.1） mg/cm2用量涂抹含0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.90%薄荷醇的唇霜樣品，以涂抹唇霜基質(zhì)（不合薄荷醇）作為陰性對(duì)照、不涂抹任何樣品作為空白對(duì)照，并于涂抹后10 min、1h分別測(cè)定TEWL值、EI值、a*值、泛紅值。

測(cè)試方法參考膠帶撕脫模型評(píng)價(jià)舒緩功效的相關(guān)文獻(xiàn)，皮膚a*值、泛紅值、EI值越小，表示皮膚泛紅程度越?。黄つwTEWL值越小，表示皮膚鎖水能力越好，皮膚屏障越好。與舒緩相關(guān)的皮膚a*值、泛紅值、EI值任意兩個(gè)參數(shù)變化結(jié)果與使用試驗(yàn)產(chǎn)品前比較存在顯著性差異，表示試驗(yàn)產(chǎn)品具有舒緩功效。

（三）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)算分析參數(shù)的初始值／其他測(cè)量時(shí)間點(diǎn)／其他組間的數(shù)值，采用IBM SPSS Statistics 28.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布，使用配對(duì)T檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)分別對(duì)測(cè)量參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果與分析

（一）薄荷醇安全性評(píng)價(jià)結(jié)果

斑馬魚(yú)胚胎急性毒性測(cè)試：由表1可知，通過(guò)對(duì)薄荷醇8個(gè)濃度的測(cè)試，采用常用統(tǒng)計(jì)方法（如概率單位法）對(duì)魚(yú)胚胎死亡率和樣本測(cè)試濃度之間進(jìn)行劑量反應(yīng)曲線擬合，擬合曲線后的計(jì)算得出樣品半數(shù)致死濃度為0.19g/L，10%致死濃度為0.11g/L。而急性毒測(cè)試駐留產(chǎn)品時(shí)，安全風(fēng)險(xiǎn)線所對(duì)應(yīng)的濃度是樣本的150倍稀釋濃度，因此建議最高可添加量為（LC10／10×150）%，即薄荷醇原料的最高可添加量為1.7%。

（二）薄荷醇體外功效研究結(jié)果

1.修護(hù)功效篩查

薄荷醇對(duì)斑馬魚(yú)胚胎尾鰭再生影響如圖2所示。由圖2可知，在0.55%、0.65%和0.75%等濃度下，與模型對(duì)照組相比，斑馬魚(yú)胚胎尾鰭修護(hù)促進(jìn)率分別為16.79%、5.44%和5.28%，存在顯著性差異。表明薄荷醇具有促進(jìn)修復(fù)的效果，具有修護(hù)功效。

2.滋養(yǎng)功效篩查

薄荷醇對(duì)斑馬魚(yú)胚胎尾部主動(dòng)脈血液循環(huán)影響如圖3所示。由圖3可知，在0.65%、0.75%、0.85%和0.95%濃度下，與空白對(duì)照組相比，斑馬魚(yú)胚胎尾部主動(dòng)脈血液循環(huán)促進(jìn)率分別為14.11%、12.63%、21.07%及21.18%，有顯著性差異。表明薄荷醇具有促進(jìn)血液循環(huán)效果，具有滋養(yǎng)功效。

3.保濕功效篩查

薄荷醇對(duì)斑馬魚(yú)胚胎失水收縮影響如圖4所示。由圖4可知，在0.55%和0.65%濃度下，與模型對(duì)照組相比，斑馬魚(yú)胚胎尾巴面積縮小抑制率分別為35.29%和31.18%，有顯著性差異。表明薄荷醇具有保濕功效。

4.抗敏舒緩功效篩查

薄荷醇對(duì)抑制C48/80誘導(dǎo)的斑馬魚(yú)胚胎類胰蛋白酶生成影響如圖5所示。由圖5可知，在0.65%、0.75%、0.85%和0.95%濃度下，與模型對(duì)照組相比，斑馬魚(yú)胚胎類胰蛋白酶抑制率分別為了1.63%、87.69%、93.09%和93.16%，有顯著性差異。表明薄荷醇具有抑制過(guò)敏效果，具有抗敏舒緩功效。

（三）薄荷醇人體功效研究結(jié)果

通過(guò)斑馬魚(yú)胚胎模型試驗(yàn)初步篩查了薄荷醇的部分常規(guī)功效，隨后繼續(xù)沿用5種濃度的薄荷醇添加入基質(zhì)唇霜，對(duì)其進(jìn)行人體皮膚斑貼試驗(yàn)，其中0.95%薄荷醇的唇霜沒(méi)通過(guò)人體皮膚斑貼試驗(yàn)，其余濃度的唇霜均通過(guò)人體皮膚斑貼測(cè)試；所以除了0.95%外，另外增加同樣通過(guò)人體皮膚斑貼測(cè)試的0.90%，最后確定濃度0.55%、0.65%、0.75%、0.85%、0.90%薄荷醇的唇霜樣品參與人體功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)。

1.修護(hù)及滋養(yǎng)功效

因?yàn)樾拮o(hù)與滋養(yǎng)功效測(cè)試的評(píng)價(jià)指標(biāo)有重疊，因此招募同一批志愿者同時(shí)測(cè)試，本實(shí)驗(yàn)按照自愿原則及納入條件共納入200名志愿者，分為6組，每組30人以上，其中9名因個(gè)人原因未能完成所有測(cè)試。最終191人完成項(xiàng)目，其中男64人、女127人，年齡21～58歲，平均年齡36.04±8.06歲。分組人數(shù)信息詳情如表2。

樣品使用前后受試者的皮膚TEWL值、水分含量、pH值、光澤度及粗糙度Ra、Rq值測(cè)試結(jié)果如圖了所示。從上述數(shù)據(jù)可知，經(jīng)過(guò)受試者連續(xù)使用了天的測(cè)試，我們發(fā)現(xiàn)樣品組中添加了0.75%和0.85%薄荷醇的唇霜測(cè)試的TEWL值顯著降低，分別降低了20.29%和36.27%（P<0.05）。此外，樣品組中添加了0.55%、0.75%、0.85%和0.90%薄荷醇的唇霜與使用前相比，能顯著增加皮膚的水分含量，分別增加了12.94%、10.03%、15.64%和8.82% （P<0.05）。同時(shí)，各組的皮膚的pH值與使用前后都能維持在4.0～6.0的范圍內(nèi)，具有維持皮膚pH值正常的效果。而添加了0.65%、0.75%和0.85%薄荷醇的唇霜分別提升了4.27%、11.23%和8.57%的皮膚光澤度 （P<0.05）。添加了0.55%和0.85%薄荷醇的唇霜與使用前相比，能顯著降低皮膚粗糙度Ra值及Rq值，皮膚粗糙度Ra值分別降低了5.48%和6，53% （P<0.05）。皮膚粗糙度Rq值分別降低了6.02%和6.35% （P<0.05）。

綜上所述，連續(xù)使用樣品7天后，樣品組中添加了0.75%和0.85%薄荷醇的唇霜能夠降低修護(hù)功效的主要參數(shù)皮膚TEWL值、同時(shí)次要參數(shù)皮膚水分含量提升，與使用前相比差異顯著（P<0.05）。此外，皮膚pH值也得到了良好地維持。因此，可以得出結(jié)論，添加0.75%和0.85%薄荷醇的唇霜具有修護(hù)功效。

滋養(yǎng)功效相關(guān)參數(shù)包括皮膚水分含量、皮膚光澤度和皮膚粗糙度Ra、Rq值。根據(jù)測(cè)試結(jié)果，當(dāng)使用0.55%和0.85%薄荷醇添加量的唇霜時(shí)，連續(xù)使用了天后皮膚水分含量升高、皮膚光澤度升高，皮膚粗糙度的Ra和Rq值降低。這些差異在統(tǒng)計(jì)上是顯著的，表明這兩種唇霜具有滋養(yǎng)功效。而使用0.75%薄荷醇添加量的唇霜，連續(xù)使用了天后僅有皮膚水分含量和皮膚光澤度升高的效果，但同樣具有滋養(yǎng)功效。

2.保濕功效

本實(shí)驗(yàn)按照自愿原則及納入條件共納入34名志愿者，其中4名因個(gè)人原因未能完成所有測(cè)試。最終30人完成項(xiàng)目，其中男6人、女24人，年齡21～48歲，平均年齡33.30±6.28歲。樣品使用前后受試者的皮膚角質(zhì)層水分含量變化測(cè)試結(jié)果如圖8所示。

從上述數(shù)據(jù)可知，使用樣品4h以及8h后，樣品組、NC組的皮膚角質(zhì)層水分含量與使用前相比均有顯著差異提升（P<0.05）。此外，樣品組、NC組的變化量與BC組比較，也存在顯著差異（P<0.05）。

綜上所述，雖然樣品組和NC組均具有保濕的功效，但是樣品組在使用唇霜8h后的保濕變化率均高于NC組，這說(shuō)明薄荷醇的添加在短效長(zhǎng)時(shí)間時(shí)存在一定提升保濕功效的作用，而NC組的保濕效果可能是因?yàn)榇剿|(zhì)本身蠟質(zhì)、油脂等原料的保濕作用造成的。

3.舒緩功效

本實(shí)驗(yàn)按照自愿原則及納入條件共納入34名志愿者，其中2名因個(gè)人原因未能完成所有測(cè)試。最終32人完成項(xiàng)目，其中男18人、女14人，年齡22～58歲，平均年齡37.72±8.26歲。樣品使用前后受試者的皮膚a*值、泛紅值、紅斑指數(shù)EI值及TEWL值測(cè)試結(jié)果如圖9所示。

從上述數(shù)據(jù)可知，NC組、樣品組在測(cè)試前（T-1）與BC組無(wú)顯著性差異，每位受試者各個(gè)測(cè)試區(qū)域在測(cè)試前保持平衡；且NC組、樣品組、BC組在膠帶撕脫后與測(cè)試前均有顯著性提升（P<0.05），NC組、樣品組與BC組無(wú)顯著性差異，表示膠帶撕脫模型建立成功。

涂抹唇霜10min后，各組的皮膚a*值、泛紅值、EI值及TEWL值都出現(xiàn)明顯的下降，而未涂抹唇霜的BC組也有小幅度的改善，這是由于皮膚自身的修復(fù)作用造成的，其中，添加了0.85%薄荷醇的唇霜的對(duì)于皮膚泛紅改善效果較未添加時(shí)更明顯，a*值、EI值、TEWL值分別降低了5.89%、35.22%、41.47% （P<0.05），說(shuō)明足量的薄荷醇的添加在短時(shí)間內(nèi)具有較好的舒緩功效。

涂抹唇霜1h后，各組的皮膚a*值、泛紅值、EI值及TEWL值均出現(xiàn)了更加明顯的改善，相較于基質(zhì)唇霜，添加了薄荷醇0.55%、0.65%的效果最佳，4個(gè)測(cè)試參數(shù)均有顯著性改善（P<0.05），0.75%、0.85%、0.90%也能有3個(gè)測(cè)試參數(shù)有顯著性改善（P<0.05），說(shuō)明添加薄荷醇的唇霜具有舒緩的功效。

三、結(jié)論

本文首先通過(guò)水中的斑馬魚(yú)胚胎急性毒性測(cè)試檢驗(yàn)薄荷醇的安全性，確定了薄荷醇原料在駐留化妝品中最高可添加量為1.7%。

再借由一系列斑馬魚(yú)胚胎模型生物試驗(yàn)驗(yàn)證了薄荷醇具有的修護(hù)、滋養(yǎng)、保濕、抗敏舒緩功效，其中0.65%濃度薄荷醇4個(gè)功效相關(guān)參數(shù)均具有顯著性的改善。

隨后通過(guò)現(xiàn)行行標(biāo)、團(tuán)標(biāo)及參考文獻(xiàn)為依據(jù)進(jìn)行人體功效評(píng)價(jià)試驗(yàn)，驗(yàn)證了添加薄荷醇的唇霜具有皮膚修護(hù)、滋養(yǎng)、保濕、舒緩功效，且添加0.75%、0.85%薄荷醇的唇霜4個(gè)功效主要相關(guān)參數(shù)均具有顯著性的改善。

目前國(guó)內(nèi)對(duì)薄荷醇這種經(jīng)典化妝品原料的功效研究的還不夠豐富，此研究可為薄荷醇作為唇部護(hù)理產(chǎn)品的部分功效添加物的提供數(shù)據(jù)支撐與依據(jù)，而薄荷醇其他更多的功效作用機(jī)理目前尚不明確，未來(lái)還需要更多的科研人員對(duì)其進(jìn)行深入的研究。

作者介紹

莊燦展，金學(xué)迎，王乃龍，均為曼秀雷敦（中國(guó)）藥業(yè)有限公司職員。