張興會,韓 迪,劉興偉,張慶治

(遼寧省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)基地建設(shè)工程中心,沈陽 110032)

采取人工授精時(shí),羊不能像牛、驢、馬那樣通過直腸檢查卵泡判斷發(fā)育狀態(tài)和排卵的具體時(shí)間,無法取得高受胎率。需通過觀察母羊的發(fā)情行為、生殖道黏膜變化等推斷輸精時(shí)機(jī)。為探索母羊排卵的具體時(shí)間、提高細(xì)管凍精的配種受胎率,試驗(yàn)將絨山羊母羊發(fā)情期分為4期,分別進(jìn)行細(xì)管凍精配種,并對受胎情況進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 時(shí)間、地點(diǎn)及試驗(yàn)動物

2022年9月25日—10月 25日,在遼寧絨山羊原種場有限公司科技示范場,選擇生殖機(jī)能正常、可自然發(fā)情的3～6周歲經(jīng)產(chǎn)空懷母羊146只。

1.2 公羊試情

所有母羊均在原飼養(yǎng)圈舍進(jìn)行試情,選擇性欲旺盛、體質(zhì)強(qiáng)健的試情公羊。試情時(shí)給試情公羊戴好試情布,以1∶40的比例放入母羊群,接受公羊爬跨的母羊即轉(zhuǎn)入待配母羊群。

1.3 發(fā)情期劃分

根據(jù)母羊生殖道的狀態(tài),將母羊發(fā)情期劃分為4個(gè)期,即第1,2,3,4期。

在發(fā)情初期,產(chǎn)道內(nèi)有少量透明而稀薄的液體,陰道黏膜和子宮頸口的黏膜呈淡粉紅色,大部分母羊子宮頸口開張不充分或未開張,母羊接受公羊爬跨,此期為“第1期”。

母羊的陰道和子宮頸口的黏膜呈粉紅色,黏液量逐漸增加,并有一部分黏液流出陰道口,風(fēng)干后黏附于尾根或陰道口周圍,形成淡黃色結(jié)痂,陰道黏液變得黏稠、呈雞蛋清樣,子宮頸口多開張,母羊接受公羊爬跨,此期為“第2期”,以此期為對照。

母羊子宮頸口和陰道黏膜略呈深紅色,陰道和子宮頸口的黏液由雞蛋清樣逐漸變成含有少量白色黏液的雞蛋清樣狀態(tài),子宮頸口往往開張良好[1],母羊接受公羊爬跨,此期為“第3期”。

母羊產(chǎn)道的黏液變成不流動的白色黏液狀,黏液將子宮頸口封堵,產(chǎn)道黏膜變得蒼白,只有用開膣器刺激一定時(shí)間后才出現(xiàn)一定程度的充血(粉紅色),母羊不愿接受公羊爬跨,此期為“第4期”。

1.4 細(xì)管凍精

取遼寧絨山羊原種場優(yōu)秀種公羊的庫存細(xì)管凍精,解凍后37 ℃條件下活力≥0.3,每劑有效精子數(shù)>1.5×107個(gè)/ mL[2]。

1.5 試驗(yàn)儀器及用品

雙孔恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋、200～600倍帶恒溫板的光學(xué)顯微鏡、羊用不銹鋼開膣器,羊用細(xì)管凍精輸精槍;10 L液氮罐、長鑷子、手電筒等。

1.6 細(xì)管凍精解凍

從液氮罐中取出細(xì)管凍精,迅速投入38～40 ℃的恒溫水浴鍋中,并使凍精細(xì)管浸沒于水下,不斷晃動凍精細(xì)管,待細(xì)管內(nèi)凍精融化至透明狀時(shí)取出,去掉棉塞端,鏡檢合格后裝入輸精器[3]。

1.7 輸 精

母羊用呈前低后高與地面呈30°的保定架保定,進(jìn)行常規(guī)的清洗、消毒,然后將細(xì)管凍精輸入母羊子宮頸口的隱窩內(nèi),倒控 1 min,放開母羊。所有待配母羊上午輸精1次,下午輸精1次,每次輸精1劑,兩次輸精間隔7 h。

1.8 妊娠母羊的鑒定方法

母羊輸精后的第20天沒有出現(xiàn)再次發(fā)情,并且在輸精后第30天B超直腸探查發(fā)現(xiàn)胚泡,即診斷為妊娠,統(tǒng)計(jì)受胎率。

1.9 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析

采用樣本百分?jǐn)?shù)差異顯著性t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析比較,P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

各期母羊配種受胎率見表1。

表1 不同發(fā)情階段的母羊細(xì)管凍精配種受胎率統(tǒng)計(jì)

從表1可以看出,第3期的受胎率最高,達(dá)到77.50%(31/40);第2期的受胎率次之,達(dá)44.00%(22/50);第1期的受胎率低于第3期和第2期,達(dá)8.33%(3/36);第4期的受胎率最低,為0(0/20)。與第2期相比,第1,4期受胎率顯著降低(P<0.05),第3期受胎率顯著提高(P<0.05)。說明在母羊發(fā)情的第3期進(jìn)行細(xì)管凍精配種較為適宜。

3 討 論

3.1 試驗(yàn)原理

從母羊各發(fā)情期產(chǎn)道變化來看,處于發(fā)情第3期的產(chǎn)道內(nèi),母羊子宮頸口和陰道黏膜略呈深紅色,表明母羊發(fā)情進(jìn)入旺盛階段,黏膜充血程度最高,陰道和子宮頸口的黏液由雞蛋清樣逐漸變成含有少量白色點(diǎn)狀黏液的雞蛋清樣狀態(tài),子宮頸口開張良好。雞蛋清狀黏液即母羊體內(nèi)電解質(zhì)和蛋白質(zhì)類物質(zhì)有利于精子的存活和運(yùn)行。黏液中含有的少量白色點(diǎn)狀分泌物,表明發(fā)情母羊出現(xiàn)由發(fā)情旺期向發(fā)情結(jié)束方向轉(zhuǎn)化的趨勢,少量的白色點(diǎn)狀分泌物并沒有影響精子的存活和運(yùn)動。而下一期生殖道內(nèi)的黏液由液態(tài)變?yōu)椴涣鲃拥墓虘B(tài),并且有大量固態(tài)白色黏堵塞子宮頸口,生殖道內(nèi)的黏膜變?yōu)樯n白色,無法輸入精液并且不利于精子的存活和運(yùn)行。據(jù)此推斷,當(dāng)發(fā)情母羊生殖道出現(xiàn)子宮頸口開張、黏膜變?yōu)樯罴t色的黏稠雞蛋清樣并有少量白色點(diǎn)狀分泌物時(shí),母羊可能已經(jīng)排卵,推測此時(shí)為凍精配種輸精的適宜時(shí)機(jī)。本研究中,母羊上述表現(xiàn)出現(xiàn)在發(fā)情第3期,此期的凍配受胎率均高于其他3個(gè)期,即驗(yàn)證了這一推論。

3.2 各期受胎率差異分析

本研究中,第1期母羊受胎率為8.33%(3/36),第2期為44.00%(22/50),第3期為77.50%(31/40),第4期為0(0/20)。說明越接近第3期,母羊的凍精配種受胎率越高,而第4期無配種母羊受胎,說明第4期的生殖道狀態(tài)不利于精子存活,不適于配種。第1期有少量母羊受孕,原因可能是母羊發(fā)情期較短,發(fā)情由第1期很快經(jīng)過第2期,轉(zhuǎn)入第3期;母羊發(fā)情四期中,第2期受胎率高于第1期,也與上述原因有關(guān)。

3.3 結(jié)果驗(yàn)證

據(jù)報(bào)道,牛細(xì)管凍精配種的受胎率平均達(dá)到了91.2%、情期受胎率71.3%的水平[4],而本研究中最高配種受胎率在第3期,為77.50%,與牛凍精配種的受胎率接近,但本試驗(yàn)的樣本數(shù)較小,有待于進(jìn)一步加大試驗(yàn)樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。簡澤鋒等[5]認(rèn)為,除發(fā)情初期和發(fā)情后期外,發(fā)情母?？梢婐ひ罕粻坷a(chǎn)生一條或多條黏液線,黏液呈灰白濃稠,可牽拉成多條縫紉線粗細(xì)的5～8 cm長黏液線時(shí),可進(jìn)行第一次輸精,說明牛的發(fā)情鑒定同樣可以根據(jù)產(chǎn)道黏液的變化精確判斷輸精時(shí)間。羊與牛均為反芻動物,其發(fā)情規(guī)律有較多的相似之處,從而在一定程度間接驗(yàn)證了本試驗(yàn)的推斷結(jié)論。

3.4 不足之處

對于遼寧絨山羊,在母羊發(fā)情第3期進(jìn)行凍精配種,取得了較高的受胎率,說明第3期是凍精配種的適宜期,但是否能找到更準(zhǔn)確的輸精時(shí)刻,還有待于進(jìn)一步開展相關(guān)試驗(yàn)。另外,根據(jù)觀察推斷的母羊排卵時(shí)間,還需結(jié)合母羊生殖道狀態(tài)并利用腹腔鏡觀測結(jié)果對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行校正。

4 結(jié) 論

當(dāng)母羊發(fā)情進(jìn)入第3期,即子宮頸口開張、生殖道黏膜呈深紅色、生殖道內(nèi)分泌大量黏液,并且黏液呈雞蛋清樣黏稠狀、有少量白色點(diǎn)狀分泌物時(shí)在子宮頸口輸入細(xì)管凍精,可取得較好的受胎效果。