呂玉蘭

（金安區(qū)農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊(duì) 237000）

豬大腸桿菌病是一種高致病性的腸道傳染病，多發(fā)于仔豬群體，以脫水、下痢、水樣稀糞為典型發(fā)病癥狀，但是以上發(fā)病癥狀與其他病毒性疾病和寄生蟲性疾病具有一定相似性。因此要想做最終確診，需要對病豬組織樣本或糞便進(jìn)行進(jìn)一步診斷與檢測，才能做出最終確診，進(jìn)而給出針對性防控措施，以此降低大腸桿菌病的蔓延與擴(kuò)散。

1 豬大腸桿菌病病原學(xué)

大腸桿菌屬于大腸埃希氏菌屬，該病菌首次發(fā)現(xiàn)于1885 年，屬革蘭氏陰性菌，病菌無苞芽，兩頭鈍圓，且大部分大腸桿菌有鞭毛，其中產(chǎn)腸毒素大腸桿菌是豬只腹瀉最常見的致病性菌株。該類菌株毒性主要由腸毒素和粘附素性菌毛而決定，在不同外在環(huán)境下，該類病菌致命程度有所不同，豬群一旦感染，將導(dǎo)致體細(xì)胞迅速增加，同時產(chǎn)生內(nèi)毒素，進(jìn)而引起豬只炎癥，引發(fā)病豬腹瀉、臟器衰竭或敗血癥等癥狀。同時，致病性大腸桿菌常規(guī)情況下為動物體共生細(xì)菌，可調(diào)節(jié)腸道內(nèi)菌群，但如果宿主免疫系統(tǒng)低下，將導(dǎo)致大腸桿菌毒力明顯增強(qiáng)，威脅豬群公共安全。

2 診斷

2.1 臨床癥狀診斷

從臨床癥狀上看，病豬一旦感染大腸桿菌病，其主要臨床癥狀可以分為三種類型，分別是仔豬黃痢、仔豬白痢和豬水腫，其中仔豬黃痢，主要臨床癥狀為排稀糞，大便失禁，且病豬肛門、陰門處為紅色或暗紅色，這一癥狀多發(fā)于出生3～10 d 左右的仔豬，常伴有精神頹廢，食欲不振，心率較快，呼吸急促等癥狀，在發(fā)病后期可能出現(xiàn)豬體消瘦、意志消沉、呼吸困難等病癥，最終死亡。

仔豬白痢主要發(fā)生在剛出生10 d 左右的豬群，病豬糞便呈白色或乳白色，臨床癥狀為突發(fā)性腹瀉，顏色為黃色、黃綠色，有特殊腥味或臭味，疾病初發(fā)時，腹瀉次數(shù)較少，之后隨著病程的逐漸增加，腹瀉次數(shù)最高可達(dá)到8～20 次/d，大便稀薄，有氣泡，部分糞便黏著在肛門處，發(fā)出腥臭味。如果是成年豬患病，皮毛粗糙，無光澤，身體消瘦，食欲不振，精神欠佳，畏寒，在發(fā)病后期，心音較弱，口鼻干燥且臥地不起，最終因身體極度虛弱而死。

如果是豬水腫，其主要臨床癥狀為病豬四肢不協(xié)調(diào)，精神萎靡，糞便顏色為青白色或青灰色，眼瞼增厚，身體水腫明顯，之后在發(fā)病中后期，病豬容易受到應(yīng)激，即使在外界微弱的刺激下也會嚇壞病豬，嚴(yán)重時豬除易受驚之外，面部也出現(xiàn)水腫，且站立不穩(wěn)，轉(zhuǎn)圈，或者出現(xiàn)結(jié)膜炎水腫，通常在幾天內(nèi)死亡。該類病癥多發(fā)于體格健壯、生長速度較快的斷乳仔豬，一般得過黃痢的仔豬不感染豬水腫[1]。

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

通常情況下，對于豬大腸桿菌病，其實(shí)驗(yàn)室診斷和鑒定方法分為兩種，分別是傳統(tǒng)表型鑒定法，比如血清學(xué)鑒定、菌體形態(tài)學(xué)觀察、菌落形態(tài)學(xué)觀察等，其次是新型分子生物學(xué)鑒定法，利用核酸擴(kuò)增技術(shù)和高通量測序技術(shù)，做出最后診斷。一般情況下，基層畜牧獸醫(yī)單位仍然選擇傳統(tǒng)表型鑒定法，先將在無菌環(huán)境下收集到的病料在麥康凱平板培養(yǎng)基中進(jìn)行分離培養(yǎng)，染色后完成鏡檢，該種方法操作簡單且不需要特殊檢測儀器，但是檢測時間較長，需要一周左右，故該種方法在大面積、大規(guī)模病料檢測中，使用效率較低，因此可以利用免疫血清學(xué)檢測方法，基于抗原抗體特異性反應(yīng)進(jìn)行定量和定性檢測。診斷步驟為：（1）無菌采集患病豬淋巴結(jié)、糞便等病料組織，37℃環(huán)境下培養(yǎng)10～15 h，對分離株進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，95℃預(yù)變性5 min，57℃退火1 min；（2）PCR 反應(yīng)條件為：72℃1 min 30 s，最后72℃延伸10 min，95℃預(yù)變性4 min，35 個循環(huán)，PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，其中，10 PCR 擴(kuò)增體系為：Premix Ex TaqTM DNA 聚合酶，25 μL，菌液2 μL，ddH2O 共21 μL，10 pmol/μL 上游引物F1 μL，10 pmol/μL 下游引物R1 μL，總計(jì)50 μL。（3）第一，單菌落挑?。喊袻B 培養(yǎng)基倒入排槍槽中，然后用排槍加400 μL LB 培養(yǎng)基到48 孔深孔板，用鑷子拿已滅菌的小白槍頭挑取平板上的單菌落并放到48 孔深孔板中，同時在48 孔深孔板和相應(yīng)的表單上做好記錄，注意對于藍(lán)白斑篩選的板子要挑的是白斑。挑好的48 孔深孔板用封口膜蓋好并做好相應(yīng)標(biāo)記（日期、板號等），用針頭在封口膜打孔，把它放在37℃搖床上搖一個小時。第二，菌落PCR 反應(yīng)：配置好PCR 反應(yīng)的反應(yīng)體系，把配好的反應(yīng)液加到96 孔反應(yīng)板中，用排槍加2.5 μL 的菌液到其中，注意在96 孔反應(yīng)板上做好標(biāo)記。把96 孔反應(yīng)板放在PCR 儀器上蓋好橡膠墊，按照PCR 反應(yīng)條件設(shè)置反應(yīng)程序，注意一定要把PCR 儀器的蓋子蓋緊。第三，瓊脂糖凝膠電泳：一般先配置1.0%～1.2%瓊脂糖凝膠（即稱1.2 g 的瓊脂糖加100 mL 的TAE），在96 孔反應(yīng)板每個管中加0.5 μL 的溴酚藍(lán)，震蕩均勻，然后點(diǎn)樣，電泳好的瓊脂糖凝膠拍照，命名保存。第四，判斷陽性克隆并測序：根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳圖條帶來判斷陽性克隆，把陽性克隆的菌液進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，進(jìn)行測序驗(yàn)證，看看是否有完全正確的序列[2]。

3 豬大腸桿菌病的防治

3.1 豬大腸桿菌病預(yù)防

3.1.1 仔豬方面

從上文研究中，發(fā)現(xiàn)如果大腸桿菌病宿主免疫系統(tǒng)低下，將導(dǎo)致大腸桿菌毒力明顯增強(qiáng)，最終導(dǎo)致疾病大規(guī)模暴發(fā)和流行，因此在今后工作中，養(yǎng)殖技術(shù)人員必須重視仔豬機(jī)體抗病性能的提高，不斷提升機(jī)體免疫力，主要預(yù)防措施可體現(xiàn)在以下幾個方面：（1）剛出生的仔豬必須在出生后2 h 內(nèi)哺足初乳，以此獲得被動免疫；（2）注重仔豬豬舍或保育舍的溫濕度控制，始終遵循“小豬怕冷，大豬怕熱，大豬小豬都怕濕”的原則，嚴(yán)格控制舍內(nèi)溫濕度，通常情況下，仔豬豬舍在寒冷季節(jié)，溫度不能低于18℃，如果是剛出生2～3 周齡的仔豬，對溫度要求更高，約維持在26℃即可，如果仔豬剛出生1 周齡以內(nèi)，豬舍內(nèi)部環(huán)境不能低于30℃，成年豬豬舍氣溫最高不能高于28℃，最低不能低于15℃，濕度始終維持在65%～80%左右即可。（3）強(qiáng)化仔豬營養(yǎng)補(bǔ)給，科學(xué)調(diào)配飼料配方，比如：對于斷奶后仔豬，飼料配方可設(shè)置為：7%豆粕，10%麥麩皮，55%玉米，15%高粱粉，5%進(jìn)口魚粉，4%維生素添加劑，2%微量元素添加劑，0.5%食鹽，1.5%骨粉，對于35 kg 以上的生長豬，可將配方設(shè)置為55%玉米，10%麥麩皮，5%進(jìn)口魚粉，6%豆粕，2%骨粉，0.7%食鹽，1.3%氫氧化鈉，5%高粱粉，5%維生素添加劑，10%進(jìn)口魚粉，以此補(bǔ)充仔豬和生長豬的蛋白質(zhì)、維生素以及礦物質(zhì)，從而提高機(jī)體抗病性。

3.1.2 母豬方面

大腸桿菌病的傳播方式與途徑多種多樣，其中最常見的傳播途徑為母豬與仔豬接觸傳染[3]。比如，仔豬在出生之后，通過吃母乳來獲得被動免疫，如果母豬在生產(chǎn)之前未能及時接種疫苗，可能導(dǎo)致仔豬機(jī)體能量低，抗病性差。其次，在母豬哺乳時，養(yǎng)殖技術(shù)人員不能對母豬乳房、乳頭進(jìn)行消毒，在仔豬吃母乳過程中，通過乳房、乳頭傳播病菌。因此，在今后工作中，要想最大化抑制仔豬感染大腸桿菌病，技術(shù)人員應(yīng)該在母豬產(chǎn)前及時接種疫苗，同時控制飼料中蛋白質(zhì)水平，適當(dāng)增加青飼料喂養(yǎng)量，嚴(yán)禁飼喂發(fā)霉變質(zhì)飼料，始終保持飼料營養(yǎng)供給的相對穩(wěn)定性。其次，在母豬產(chǎn)仔后，每次哺乳之前需要利用0.1%高錳酸鉀水溶液對母豬乳房和乳頭進(jìn)行消毒，通過擦洗，降低胸腹部病菌含量，之后逐個乳頭擠掉幾滴奶水，接著再讓仔豬吃乳，以此最大化降低仔豬與大腸桿菌的接觸幾率，抑制仔豬出現(xiàn)大腸桿菌病。

3.1.3 環(huán)境方面

大腸桿菌病可以通過食槽、水槽直接接觸傳播，或者通過其他呼吸道及消化道途徑感染致病菌，因此養(yǎng)殖技術(shù)人員要想最大化降低大腸桿菌病暴發(fā)率，必須把好環(huán)境關(guān)，對養(yǎng)殖場附近和豬舍內(nèi)部經(jīng)常消毒消殺，確保環(huán)境清潔。主要體現(xiàn)在以下幾個方面：（1）對產(chǎn)房進(jìn)行徹底沖洗與清掃，比如首先利用高壓水槍沖洗地面產(chǎn)床，之后利用2%燒堿水進(jìn)行地面消毒，同時將黏著在地面和欄桿上的糞便清除干凈，等到清理完畢之后，利用福爾馬林溶液和高錳酸鉀溶液進(jìn)行產(chǎn)房熏蒸，確保門窗環(huán)境密閉，保證產(chǎn)房封閉、不透氣，在熏蒸5～8 h 后開窗通風(fēng)，之后鋪上干凈墊草；（2）對保育舍和育肥豬舍，可將漂白粉配制成10%混懸液，對用具、地面和污水、糞便等進(jìn)行消毒，現(xiàn)配現(xiàn)用，但是應(yīng)該注意該種消毒方式具有較強(qiáng)腐蝕性，噴霧器使用后應(yīng)立即清洗干凈；也可以利用25%石灰乳，對欄舍、墻壁、頂棚進(jìn)行消毒，可有效清除病原體、細(xì)菌和病毒，以此及時消滅大腸桿菌傳染源。（3）人員進(jìn)場時，利用1∶1000 新潔爾滅溶液浸泡洗手，對工作服、工作靴、利用福爾馬林熏蒸20 min，利用3%氫氧化鈉溶液對金屬用具進(jìn)行消毒。（4）打造物理隔離空間。如果豬群中出現(xiàn)大腸桿菌病，為避免同群健康豬感染，應(yīng)該將脫水、腹瀉嚴(yán)重豬單獨(dú)隔離，一則可以切斷傳染源，二則避免脫水嚴(yán)重豬被同群豬踩踏。

3.1.4 免疫方面

養(yǎng)殖技術(shù)人員還應(yīng)該加強(qiáng)豬群免疫，在母豬產(chǎn)前15 d 和40 d 接種大腸桿菌疫苗[4]。比如：肌肉注射仔豬大腸桿菌病基因工程滅活疫苗（GE-3 株），由遼寧益康生物股份有限公司生產(chǎn)，獸藥字號060131112，或者注射仔豬大腸桿菌病K88+K99+987p 和產(chǎn)氣莢膜梭菌病C 型2 聯(lián)滅活疫苗，由國家集團(tuán)動物保健股份有限公司生產(chǎn)，獸藥字號170261126，嚴(yán)格按照疫苗使用說明書要求，控制注射時間、注射劑量以及注射方法，以此實(shí)現(xiàn)前置預(yù)防，降低后續(xù)豬群中出現(xiàn)大規(guī)模大腸桿菌病。

3.2 豬大腸桿菌病治療

當(dāng)仔豬或成年豬已經(jīng)出現(xiàn)大腸桿菌病，養(yǎng)殖技術(shù)人員首先應(yīng)該調(diào)整飼料配比，增加麥麩、麩糠等易消化飼料供給，降低蛋白質(zhì)飼料供給，降低飼喂量，約為日常飼喂量的3/4 左右即可，保證病豬少食多飲水，水中加電解質(zhì)，避免脫水。其次，利用中藥治療法和西藥治療法，給予針對性治療。

3.2.1 中藥治療法

利用烏梅10 g、黃芩15 g、黃連12 g、葛根15 g、霍香10 g、厚樸15 g、陳皮20 g、生姜15 g、黨參25 g、茯苓15 g、炒山藥10 g、炙甘草20 g、麥芽15 g、神曲15 g，按照1∶1000 比例加入純凈水煮沸，30 min 之后，畏火10 min，棄渣取湯給豬灌服，每頭豬灌服100 mL 左右，每日早晚2 次，連續(xù)服用7 d，可有效緩解病豬腹瀉、脫水等癥狀。也可以利用混合型飼料添加劑低聚殼聚糖，每500 g 藥劑拌料50 kg，保證每頭豬每天喂藥10 g 即可，據(jù)湖北農(nóng)夫旺生物科技有限公司試驗(yàn)研究顯示：將殼聚糖拌料之后5 d 可發(fā)現(xiàn)豬群采食量明顯增加10%左右，可補(bǔ)充普通蛋白飼料營養(yǎng)缺陷，調(diào)節(jié)腸道機(jī)能，保障整體豬群生長均勻，增重快，提高飼料吸收與消化率，并降低糞便中氨氣臭氣，在使用7 d 之后，豬群皮膚發(fā)亮，健康活潑，嘔吐、腹瀉、精神萎靡癥狀基本消失，在使用30～40 d 左右，能夠有效改善豬群體型，提高豬體瘦肉率，使得豬群收腹，臀大，背部增寬，生長速度加快，抗病性能更強(qiáng)，長期添加與其他豬群相比，可以盡早出欄，出欄時間可提前16 d 左右。

3.2.2 西藥治療法

養(yǎng)殖技術(shù)人員還可以利用西藥抗生素治療方法[5]。按照每次肌肉注射2～4 mg/kg 劑量，使用慶大霉素（由重慶方通動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，獸藥字號230031506），每日1 次，連續(xù)使用3 d，同時按照15～25 mg/kg 體重口服硫酸新霉素（由綠康生化股份有限公司生產(chǎn)，獸藥字號130011519），每日早晚各1 次，連續(xù)服用3～5 d；或者取頭孢氨芐注射液（由哈爾濱銀山科技畜牧有限責(zé)任公司生產(chǎn)，獸藥字號080206634），每日1次，注射10 mL，結(jié)合磺胺脒0.5 g（由黑龍江齊泰動物保健品有限公司生產(chǎn)，獸藥字號080602705），將二者研制成粉末，按照5～10 mg/kg 體重給病豬拌料喂服，每日早晚各1 次，連續(xù)使用5～7 d，均可起到良好效果，能有效調(diào)解病豬腸道內(nèi)菌群平衡，防止仔豬持續(xù)性脫水、下痢等問題。對于部分病重豬可以利用10%葡萄糖溶液補(bǔ)液，在焦巢穴采取激光治療，可有效抑制仔豬黃痢、仔豬白痢和豬水腫等癥狀。

4 結(jié)語

綜上所述，當(dāng)前在生豬產(chǎn)業(yè)發(fā)展過程中，大腸桿菌病儼然成為關(guān)鍵性制約因素，不僅影響生豬安全生產(chǎn)，同時威脅人類生命健康。為穩(wěn)定生豬市場，降低因大腸桿菌病而引起的生豬死亡發(fā)生數(shù)量，維護(hù)畜禽養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)秩序，養(yǎng)殖場（戶）應(yīng)該在基層畜牧獸醫(yī)人員和相關(guān)部門指導(dǎo)下，做好疫病防控，根據(jù)畜禽具體養(yǎng)殖情況，給予合適飼料，選擇科學(xué)疫病防控體制機(jī)制，將中西醫(yī)治療方法相結(jié)合，以此提高機(jī)體抗病性，降低豬群大腸桿菌病感染幾率。