馬存亮, 耿慶亞

(安徽省阜陽(yáng)民生醫(yī)院, 1. 心內(nèi)科, 2. 全科醫(yī)學(xué)科, 安徽 阜陽(yáng), 236000)

慢性心力衰竭是一種由各種原因引起組織灌注量不足以及出現(xiàn)肺循環(huán)或體循環(huán)瘀血的病理狀態(tài),多發(fā)生于老年人,其具有高發(fā)病率、住院率及病死率的特點(diǎn)[1]。微小RNA(microRNA)作為一類調(diào)節(jié)基因表達(dá)的單鏈非編碼小分子RNA, 可反映機(jī)體生理狀況和疾病種類[2-3], 既往研究[4]顯示, hsa-miR-19b-3p靶基因編碼蛋白參與機(jī)體的炎癥、免疫和轉(zhuǎn)錄效率,在哮喘兒童中呈低表達(dá)。miR-933作為miRNA成員之一,在口腔鱗狀細(xì)胞癌中呈低表達(dá)[5]。目前,血清miR-19b-3p、miR-933在老年慢性心力衰竭患者心功能、預(yù)后中作用的相關(guān)研究較少。本研究探討老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平對(duì)心功能、預(yù)后的評(píng)估價(jià)值,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年2月—2022年5月本院收治的老年慢性心力衰竭患者108例作為研究對(duì)象,并納入研究組,其中男65例,女43例; 年齡60～81歲,平均(70.66±1.85)歲; 根據(jù)紐約心臟學(xué)會(huì)(NYHA)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[6]分為Ⅱ級(jí)35例, Ⅲ級(jí)40例, Ⅳ級(jí)33例。另選擇同期在本院體檢的90例健康人群納入對(duì)照組,其中男55例,女35例; 年齡61～82歲,平均(70.74±2.01)歲。

納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合慢性心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]者; ② 患者和家屬知情同意; ③ 年齡≥60歲者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 伴有肺、腦、腎功能嚴(yán)重障礙者; ② 合并惡性腫瘤疾病者; ③ 伴有其他心臟疾病者; ④ 近期存在大型手術(shù)及外傷史者; ⑤ 近期使用免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素者; ⑥ 精神障礙、意識(shí)不清者; ⑦ 臨床資料不全者; ⑧ 中途退出者。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 一般資料收集: 收集本研究納入對(duì)象的一般資料,包括年齡、性別、收縮壓、體質(zhì)量指數(shù)、美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評(píng)分及總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)及左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)。

1.2.2 熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)血清miR-19b-3p、miR-933: 獲得本研究納入患者知情同意后,抽取清晨空腹外周靜脈血5 mL, 室溫下以2 500轉(zhuǎn)/min離心15 min后取清液,存放至-80 ℃冰箱內(nèi)。后續(xù)按比例加入提取試劑Trizol并充分搖勻,隨后參照miRNA試劑盒說(shuō)明書提取血清總miRNA。采用由上海英杰公司生產(chǎn)的特異性逆轉(zhuǎn)錄引物及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行cDNA合成,經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行擴(kuò)增,以U6為內(nèi)參。PCR儀器設(shè)置參數(shù)為95 ℃、30 s, 95 ℃、5 s, 60 ℃、35 s, 共40個(gè)循環(huán)。miR-19b-3p上游引物為5′-CATGGGTTGTCTCAGTGTCAGAGCT-3′, 下游引物為5′-TGCCTTCTGTCTCCAGTCTTCCAA-3′; miR-933上游引物為5′-CGGCAGGACGAGAAAGAGT-3′, 下游引物為5′-TAGGGCGGGTAGGTGGTGA-3′;U6上游引物為5′-GGAAAGCTGTGGCGTGAT-3′, 下游引物為5′-TCCACAACGGATACATTGGG-3′。最終利用CFX manager 3.0軟件分析Ct值并通過(guò)2-△△Ct法計(jì)算血清miR-19b-3p、miR-933相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 超聲心動(dòng)圖檢查: 使用美國(guó)Alere公司生產(chǎn)的HP5500型彩色多普勒超聲心電圖儀測(cè)定心功能指標(biāo),包括LVEF、LVEDD。

1.3 隨訪

以發(fā)生不良心血管事件再次入院或全因死亡為終點(diǎn)事件,且觀察記錄入院后12個(gè)月內(nèi)終點(diǎn)事件發(fā)生情況。隨后根據(jù)1年內(nèi)是否發(fā)生終點(diǎn)事件分為發(fā)生組(n=34)、未發(fā)生組(n=74)。不良心血管事件包括納入時(shí)未發(fā)生但在隨訪過(guò)程中發(fā)生或隨訪過(guò)程中出現(xiàn)的各種心臟疾病; 全因死亡是指在隨訪過(guò)程中出現(xiàn)的任何原因的死亡事件。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 2組一般資料比較

2組年齡、性別、收縮壓、體質(zhì)量指數(shù)及TC、TG、LDL-C比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 研究組LVEF及 miR-19b-3p、miR-933水平低于對(duì)照組, NIHSS評(píng)分及LVEDD高于或大于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表1。

表1 研究組、對(duì)照組一般資料比較

2.2 不同NYHA分級(jí)患者血清miR-19b-3p、miR-933及心功能指標(biāo)比較

NYHA心功能分級(jí)Ⅳ級(jí)患者血清miR-19b-3p、miR-933及LVEF水平低于心功能Ⅲ級(jí)患者、心功能Ⅱ級(jí)患者和健康人群, LVEDD大于心功能Ⅲ級(jí)患者、心功能Ⅱ級(jí)患者和健康人群,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同人群血清miR-19b-3p、miR-93及心功能指標(biāo)比較

2.3 老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平與心功能的關(guān)系

Pearson相關(guān)分析顯示,老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p水平與LVEF呈正相關(guān)(r=0.554,P<0.001), 與LVEDD呈負(fù)相關(guān)(r=-0.368,P<0.001); 血清miR-933水平與LVEF呈正相關(guān)(r=0.505,P<0.001), 與LVEDD呈負(fù)相關(guān)(r=-0.410,P<0.001)。

2.4 不同預(yù)后血清miR-19b-3p、miR-933水平比較

隨訪12個(gè)月,發(fā)生組老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平低于未發(fā)生組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表3。

表3 不同預(yù)后血清miR-19b-3p、miR-933水平比較

2.5 血清miR-19b-3p、miR-933對(duì)老年慢性心力衰竭患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

ROC曲線結(jié)果顯示,血清miR-19b-3p、miR-933預(yù)測(cè)老年慢性心力衰竭患者預(yù)后的AUC分別為0.835(95%CI: 0.785～0.885)、0.843(95%CI: 0.790～0.890); 二者聯(lián)合預(yù)測(cè)老年慢性心力衰竭患者預(yù)后的AUC為0.901(95%CI: 0.851～0.951), 見表4和圖1。

圖1 血清miR-19b-3p、miR-933預(yù)測(cè)老年慢性心力衰竭患者預(yù)后的ROC曲線

表4 血清miR-19b-3p、miR-933對(duì)老年慢性心力衰竭患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

2.6 老年慢性心力衰竭患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析

以老年慢性心力衰竭患者是否發(fā)生終點(diǎn)事件為因變量(未發(fā)生組=0、發(fā)生組=1), 以外周血miR-19b-3p、miR-933及NIHSS評(píng)分等指標(biāo)為自變量進(jìn)行多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析,賦值為NIHSS評(píng)分(≤8.85分=0、>8.85分=1); miR-19b-3p(≤5.41=1、>5.41=0); miR-933(≤1.01=1、>1.01=0)。結(jié)果顯示,血清miR-19b-3p(HR=3.762, 95%CI: 1.854～7.634)、miR-933(HR=3.480, 95%CI: 1.903～6.364)及NIHSS評(píng)分(HR=3.047, 95%CI: 1.837～5.051)為老年慢性心力衰竭患者預(yù)后不良的影響因素(P<0.05), 見表5。

表5 老年慢性心力衰竭患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析

3 討 論

慢性心力衰竭為各種心臟疾病進(jìn)展到晚期的終末表現(xiàn),近年來(lái)隨著人口老齡化,發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),老年人群慢性心力衰竭發(fā)病率為10%～20%[8], 4年病死率約50%[9]。目前,該病臨床治療效果并不理想,且預(yù)后較差,因此探尋早期有效預(yù)測(cè)老年慢性心力衰竭患者心功能及預(yù)后的指標(biāo)具有重要的意義。

miRNA在心血管疾病發(fā)生發(fā)展方面有重要價(jià)值[10]。研究[11]顯示, miRNA通過(guò)影響心肌細(xì)胞的能量代謝、心肌纖維化、心室重構(gòu),參與心力衰竭的發(fā)生發(fā)展, miRNA-155、miRNA-133均可有效診斷慢性心力衰竭發(fā)生[12-13]。miR-19b-3p、miR-933是miRNA家族成員之一。研究[14]顯示, miR-19b-3p在阿爾茨海默病大鼠血清中表達(dá)降低。但另有研究[15]認(rèn)為,外周血miR-19b高表達(dá)是急性心肌梗死并發(fā)醫(yī)院感染患者預(yù)后不良的影響因素。研究[16]認(rèn)為,外周血中miR-19b異常升高可預(yù)測(cè)老年急性心肌梗死患者的死亡。研究[17]顯示, miR-933定位于人2q31.1區(qū)域,其過(guò)表達(dá)對(duì)肺癌的增殖、侵襲具有抑制作用。本研究分析發(fā)現(xiàn),研究組血清miR-19b-3p、miR-933水平均低于對(duì)照組(P<0.05), 說(shuō)明miR-19b-3p、miR-933可能參與老年慢性心力衰竭的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。LVEDD、LVEF均是目前臨床判斷心功能的常用指標(biāo),本研究Pearson相關(guān)分析顯示,老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p水平與LVEF呈正相關(guān),與LVEDD呈負(fù)相關(guān)(P<0.05); 血清miR-933水平與LVEF呈正相關(guān),與LVEDD呈負(fù)相關(guān)(P<0.05), 說(shuō)明血清miR-19b-3p、miR-933水平變化可反映慢性心力衰竭患者心功能。

本研究隨訪12個(gè)月發(fā)現(xiàn),發(fā)生組老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平均低于未發(fā)生組(P<0.05), 提示miR-19b-3p、miR-933水平變化與慢性心力衰竭患者不良預(yù)后有關(guān)。本研究ROC曲線結(jié)果顯示,血清miR-19b-3p、miR-933預(yù)測(cè)老年慢性心力衰竭患者預(yù)后的AUC均超過(guò)0.8,提示血清miR-19b-3p、miR-933對(duì)患者預(yù)后不良有一定預(yù)測(cè)價(jià)值,進(jìn)一步多因素分析顯示,血清miR-19b-3p、miR-933均為老年慢性心力衰竭預(yù)后不良的影響因素(P<0.05), 可見臨床監(jiān)測(cè)血清miR-19b-3p、miR-933水平變化可判斷病情發(fā)展,對(duì)及早干預(yù)和改善患者預(yù)后具有價(jià)值。miR-19b-3p是一種具有調(diào)控因素表達(dá)作用的非編碼小分子,作為miRNA成員,具有抗炎及保護(hù)心臟等作用。相關(guān)研究[18-19]顯示, miR-19b可通過(guò)細(xì)胞凋亡酶激活因子-1/胱天蛋白酶信號(hào)通路發(fā)揮抑炎作用,同時(shí)可通過(guò)下調(diào)下游分子同源磷酸酶-張力蛋白(PTEN)激活A(yù)kt信號(hào)通路,保護(hù)心肌細(xì)胞。研究[19]顯示, miR-19b-3p高表達(dá)可通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化、抑制經(jīng)典的炎癥途徑和增強(qiáng)其他抗炎反應(yīng),發(fā)揮對(duì)心臟的保護(hù)作用。研究[20]報(bào)道, miR-19b高表達(dá)可顯著抑制H9c2細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷,發(fā)揮心肌細(xì)胞保護(hù)作用。miR-933過(guò)表達(dá)在腫瘤疾病中具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞增殖、降低細(xì)胞遷移和侵襲能力等作用[21-22]。因此推測(cè),血清miR-19b-3p、miR-933, 水平降低可使心肌損傷細(xì)胞損傷加重,增加預(yù)后不良發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本研究發(fā)現(xiàn), miR-19b-3p聯(lián)合miR-933預(yù)測(cè)老年慢性心力衰竭不良預(yù)后的AUC大于單一指標(biāo),說(shuō)明二者聯(lián)合應(yīng)用更有助于診斷老年慢性心力衰竭患者預(yù)后狀況,可為臨床及時(shí)采取積極有效措施提供依據(jù)。

綜上所述,老年慢性心力衰竭患者血清miR-19b-3p、miR-933水平均呈低表達(dá),且其水平變化與心功能及預(yù)后密切相關(guān),可作為預(yù)測(cè)老年慢性心力衰竭患者預(yù)后不良的有效指標(biāo)。但本研究為單中心分析,且樣本量較少,今后仍需進(jìn)一步探討。