秦倩倩 葛紅衛(wèi) 張婧 趙子復(fù) 冷嬋 王瑞

(北京市紅十字血液中心，北京 100088)

對(duì)獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)的血液進(jìn)行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、人類免疫缺陷病毒抗體或抗原抗體(抗-HIV 或HIV Ag/Ab)、丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)和梅毒螺旋體特異性抗體(抗-TP)篩查，是采供血行業(yè)公認(rèn)的確保血液安全的重要舉措。 國(guó)內(nèi)血站血液篩查實(shí)驗(yàn)室(下文簡(jiǎn)稱血站實(shí)驗(yàn)室)按照國(guó)家相關(guān)要求采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)本質(zhì)量是關(guān)乎檢測(cè)結(jié)果的重要因素之一，制定并文件化標(biāo)本接受或拒收標(biāo)準(zhǔn)是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的通用技術(shù)要求。

日常工作中，溶血是最為常見的標(biāo)本質(zhì)量不合格情況之一，溶血達(dá)到一定程度可能會(huì)對(duì)ELISA 檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾，一般以檢測(cè)系統(tǒng)說明書要求為依據(jù)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室具體情況制定適宜的溶血標(biāo)本接受或拒收標(biāo)準(zhǔn)，但部分ELISA 試劑廠家說明書并未詳細(xì)載明標(biāo)本溶血對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。 鑒于血站實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本來自于獻(xiàn)血時(shí)同步留取，與臨床實(shí)驗(yàn)室相比很難重新獲得，再加上重新從血袋血液中留取標(biāo)本操作繁多，增加了差錯(cuò)的風(fēng)險(xiǎn)。 因此，明確實(shí)驗(yàn)室可接受的溶血標(biāo)本范圍，符合標(biāo)準(zhǔn)的溶血標(biāo)本正常接收和檢測(cè)，僅對(duì)不符合標(biāo)準(zhǔn)的溶血標(biāo)本進(jìn)行重新留樣、讓步檢測(cè)或停止檢測(cè)等后續(xù)處理，可大大提高實(shí)驗(yàn)室的工作效率，對(duì)出具準(zhǔn)確的檢測(cè)報(bào)告也至關(guān)重要。 本研究旨在通過使用不同檢測(cè)項(xiàng)目及不同廠家試劑對(duì)不同溶血程度的陰性和弱陽性標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，為血站實(shí)驗(yàn)室提供ELISA 檢測(cè)可接受的溶血標(biāo)本范圍，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

不同溶血程度(梯度)的陰性標(biāo)本和弱陽性標(biāo)本，原始標(biāo)本來自本站實(shí)驗(yàn)室常規(guī)血液篩查結(jié)果合格(ALT、HBsAg、HIV Ag/Ab、抗-HCV、抗-TP 及HBV DNA、HIV RNA、HCV RNA 檢測(cè)結(jié)果均合格)且狀態(tài)正常(無溶血、乳糜、血比容異常等情況)的獻(xiàn)血者標(biāo)本，每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目取10 支標(biāo)本(約5 mL/支)進(jìn)行制備。 由于乙肝疫苗在我國(guó)已經(jīng)普及，很多人體內(nèi)會(huì)存在乙型肝炎病毒表面抗體(HBsAb)，為避免HBsAb 對(duì)HBsAg 檢測(cè)產(chǎn)生影響，使用HBsAb ELISA 試劑盒篩選出其中HBsAb 為陰性的標(biāo)本，用于HBsAg 項(xiàng)目陰性溶血標(biāo)本原液的制備。

1.2 試劑與儀器

血紅蛋白(Hb)檢測(cè)試劑(東亞公司，批號(hào):A0008)；陰性/陽性質(zhì)控品(康徹思坦公司，批號(hào):201911001/201911002、201911012)；ELISA 檢測(cè)試劑和陽性質(zhì)控品基本信息見表1。 Sysmex XN-550全自動(dòng)血液分析儀(東亞公司)；Microlab STAR 8CH 全自動(dòng)標(biāo)本處理系統(tǒng)、FAME 全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)(Hamilton 公司)。

表1 試劑及陽性質(zhì)控品基本信息Table 1 Basic information of reagents and positive quality control products

1.3 方法

1.3.1不同溶血梯度陰性標(biāo)本的制備

將每支原始標(biāo)本采用反復(fù)凍融方式[1-2]制備成溶血標(biāo)本后，離心20 min，將上清液吸取至1 管，制備成溶血陰性標(biāo)本原液，并用陰性質(zhì)控品對(duì)其進(jìn)行梯度稀釋，制備成不同溶血梯度陰性標(biāo)本。 以無溶血的陰性質(zhì)控品作為溶血陰性標(biāo)本的空白對(duì)照。

1.3.2不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本的制備

將S/CO≈4 的陽性質(zhì)控品分別與不同溶血梯度的陰性標(biāo)本1 ∶1混合，得到S/CO≈2 的不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本。 將S/CO≈4 的陽性質(zhì)控品與陰性質(zhì)控品1 ∶1混合制成無溶血的弱陽性標(biāo)本，作為溶血弱陽性標(biāo)本的空白對(duì)照。

1.3.3標(biāo)本檢測(cè)

1.3.3.1不同溶血梯度陰性標(biāo)本Hb 含量檢測(cè)

分別測(cè)定(SLS-Hb 法)不同溶血梯度陰性標(biāo)本中的Hb 含量。

1.3.3.2ELISA 檢測(cè)

分別使用不同廠家試劑對(duì)不同溶血梯度陰性標(biāo)本和弱陽性標(biāo)本進(jìn)行HBsAg、HIV Ag/Ab、抗-HCV、抗-TP 檢測(cè)，每份標(biāo)本檢測(cè)4 孔。 每批檢測(cè)應(yīng)符合試劑說明書中的有效性判定標(biāo)準(zhǔn)，并按說明書要求計(jì)算S/CO 值。

1.3.4數(shù)據(jù)分析

使用EXCEL 2010 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，計(jì)算每個(gè)標(biāo)本4 個(gè)重復(fù)孔的平均S/CO 值作為最終檢測(cè)結(jié)果。 繪制折線圖，分析不同程度溶血對(duì)陰性和弱陽性標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果的影響趨勢(shì)。 既往調(diào)查表明各血站實(shí)驗(yàn)室灰區(qū)設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)不一，有實(shí)驗(yàn)室灰區(qū)設(shè)置低至0.50[3]，為盡量降低標(biāo)本溶血對(duì)陰性標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果判定的影響，陰性溶血標(biāo)本以出現(xiàn)高值陰性結(jié)果(0.50 ≤S/CO ＜1.00)或假陽性結(jié)果(S/CO ≥1.00)為標(biāo)本溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響。 依據(jù)血站技術(shù)操作規(guī)程(2019 版)中對(duì)于弱陽性質(zhì)控品L-J 圖的要求和對(duì)同批次檢測(cè)標(biāo)本的變異度要求，弱陽性溶血標(biāo)本以出現(xiàn)假陰性結(jié)果(S/CO＜1.00)或S/CO＜-3SD(以無溶血的弱陽性標(biāo)本結(jié)果為均值，CV 為15%計(jì)算SD)為標(biāo)本溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響。

1.3.5目視比色卡制備

由照相師使用專業(yè)相機(jī)對(duì)各溶血管進(jìn)行拍照處理，選取涵蓋輕度至重度溶血的標(biāo)本數(shù)支，將溶血圖片與Hb 濃度對(duì)應(yīng)，制備目視比色卡。

2 結(jié)果

2.1 不同溶血梯度陰性標(biāo)本和弱陽性標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果

不同溶血梯度陰性標(biāo)本Hb 含量檢測(cè)結(jié)果見表2。 不同溶血梯度陰性標(biāo)本ELISA 檢測(cè)結(jié)果見表3，其中HIV Ag/Ab B(3 代)試劑存在假陽性結(jié)果，A(3 代)和C(3 代)試劑存在高值陰性結(jié)果，其他均為低值陰性結(jié)果；不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本ELISA 檢測(cè)結(jié)果見表4，其中HIV Ag/Ab A(3 代)和A(4 代)試劑存在假陰性結(jié)果，其他均為陽性結(jié)果。

表2 不同溶血梯度陰性標(biāo)本Hb 含量檢測(cè)結(jié)果(g/L)Table 2 The Hb concentration of negative samples with different hemolysis gradients (g/L)

表3 不同溶血梯度陰性標(biāo)本ELISA 檢測(cè)結(jié)果(S/CO)Table 3 ELISA test results of negative samples with different hemolysis gradients (S/CO)

表4 不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本ELISA 檢測(cè)結(jié)果(S/CO)Table 4 ELISA test results of weakly positive samples with different hemolysis gradients(S/CO)

2.2 標(biāo)本溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響

將不同溶血梯度陰性標(biāo)本ELISA 檢測(cè)結(jié)果繪制為折線圖，以無溶血的陰性標(biāo)本結(jié)果繪制參考線，見圖1-4。 將不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本ELISA檢測(cè)結(jié)果繪制為折線圖，以無溶血的弱陽性標(biāo)本結(jié)果繪制參考線，并繪制＋3SD 和-3SD 的參考線(以無溶血的弱陽性標(biāo)本結(jié)果為均值，CV 為15%，計(jì)算SD)，見圖5-10。 可見部分項(xiàng)目的部分試劑檢測(cè)結(jié)果會(huì)隨溶血程度增高出現(xiàn)明顯的升高或降低。 溶血弱陽性標(biāo)本中，除HIV Ag/Ab ELISA 項(xiàng)目中出現(xiàn)的假陰性結(jié)果外，其他結(jié)果均未低于相應(yīng)的-3SD，有部分結(jié)果超出＋3SD。 綜合來看，溶血對(duì)HBsAg、抗-HCV、抗- TP ELISA 3 項(xiàng)的檢測(cè)結(jié)果沒有影響，僅對(duì)HIV Ag/Ab ELISA 檢測(cè)結(jié)果有影響，為避免出現(xiàn)高值陰性、假陽性或假陰性結(jié)果，建議將Hb 2 g/L作為HIV Ag/Ab ELISA 試驗(yàn)可接受的溶血程度。

圖1 不同溶血梯度陰性標(biāo)本HBsAg ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖Figure 1 Trend of HBsAg ELISA test results in negative samples with different hemolysis gradients

圖2 不同溶血梯度陰性標(biāo)本HIV Ag/Ab ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖Figure 2 Trend of HIV Ag/Ab ELISA test results in negative samples with different hemolysis gradients

圖3 不同溶血梯度陰性標(biāo)本抗-HCV ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖Figure 3 Trend of anti-HCV ELISA test results in negative samples with different hemolysis gradients

圖4 不同溶血梯度陰性標(biāo)本抗-TP ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖Figure 4 Trend of anti-TP ELISA test results in negative samples with different hemolysis gradients

圖5 不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本HBsAg ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖Figure 5 Trend of HBsAg ELISA test results in weakly positive samples with different hemolysis gradients

圖6 不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本HIV Ag/Ab ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖(3 代試劑)Figure 6 Trend of HIV Ag/Ab ELISA test results in weakly positive samples with different hemolysis gradients(third-generation reagents)

圖7 不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本HIV Ag/Ab ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖(4 代試劑)Figure 7 Trend of HIV Ag/Ab ELISA test results in weakly positive samples with different hemolysis gradients(fourth-generation reagents)

圖8 不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本抗-HCV ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖(間接法試劑)Figure 8 Trend of anti-HCV ELISA test results in weakly positive samples with different hemolysis gradients (indi rect method reagents)

圖9 不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本抗-HCV ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖(夾心法試劑)Figure 9 Trend of anti-HCV ELISA test results in weakly positive samples with different hemolysis gradients (sandwich method reagents)

圖10 不同溶血梯度弱陽性標(biāo)本抗-TP ELISA 檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)圖Figure 10 Trend of anti-TP ELISA test results in weakly positive samples with different hemolysis gradients

2.3目視比色卡的建立

本研究建立的Hb 濃度目測(cè)比色卡見圖11，與臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本溶血檢測(cè)與應(yīng)用專家共識(shí)(征求意見稿)[4]中的基本一致，可供參考。

圖11 Hb 濃度目測(cè)比色卡Figure 11 Hb concentration visual colorimetric card

3 討論

研究表明醫(yī)學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室60%～70%的差錯(cuò)是由檢測(cè)前階段引起的，由標(biāo)本溶血引起的差錯(cuò)占38%[5-6]，臨床各領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)室對(duì)于標(biāo)本溶血問題很重視，國(guó)內(nèi)外關(guān)于標(biāo)本溶血對(duì)多種臨床檢測(cè)影響的研究非常廣泛，先后制定了一系列臨床溶血標(biāo)本檢測(cè)與應(yīng)用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和共識(shí)[7-10]。

血站實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目主要為輸血相關(guān)傳染病檢測(cè)(包括HBV，HIV，HCV，TP)，屬于定性檢測(cè)范疇，其結(jié)果表達(dá)為反應(yīng)性或非反應(yīng)性，因此關(guān)于溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響研究也應(yīng)以是否影響最終的定性結(jié)論為標(biāo)準(zhǔn)。 出現(xiàn)假陽性結(jié)果會(huì)造成血液浪費(fèi)，并可能對(duì)獻(xiàn)血者產(chǎn)生不良影響，增加其心理負(fù)擔(dān)；出現(xiàn)假陰性結(jié)果可能會(huì)導(dǎo)致不合格血液進(jìn)入臨床，引起受血者感染。 目前，我國(guó)尚無針對(duì)血站實(shí)驗(yàn)室溶血標(biāo)本管理的標(biāo)準(zhǔn)或規(guī)范，關(guān)于標(biāo)本溶血對(duì)輸血相關(guān)傳染病檢測(cè)結(jié)果影響的研究也多集中在核酸檢測(cè)技術(shù)上，而對(duì)血清學(xué)檢測(cè)方法如ELISA 的研究較少。 大部分ELISA 進(jìn)口試劑說明書中載明了該試劑可接受的標(biāo)本溶血程度，實(shí)驗(yàn)室可參照其要求進(jìn)行驗(yàn)證并作為標(biāo)本接收標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。 但國(guó)產(chǎn)ELISA 試劑說明書絕大部分僅說明溶血標(biāo)本可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，或不能檢測(cè)重度溶血標(biāo)本，未有細(xì)化的或可測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)。 ELISA 作為血站實(shí)驗(yàn)室在用的血清學(xué)檢測(cè)的主要方法，探究標(biāo)本溶血對(duì)其結(jié)果的影響很有必要。 因此，本研究針對(duì)血站實(shí)驗(yàn)室的ELISA 檢測(cè)項(xiàng)目分別選取了幾種常用的國(guó)產(chǎn)試劑，研究標(biāo)本不同程度溶血對(duì)其檢測(cè)結(jié)果的影響，供各實(shí)驗(yàn)室參考。

標(biāo)本溶血對(duì)ELISA 檢測(cè)造成影響的原因可能有多個(gè)方面。 標(biāo)本溶血后，水、Hb、無機(jī)鹽、蛋白質(zhì)等紅細(xì)胞內(nèi)容物的釋放會(huì)造成血漿稀釋，待測(cè)物質(zhì)濃度相對(duì)降低。 此外，紅細(xì)胞破碎后釋放的Hb 及其他非特異性物質(zhì)可能會(huì)吸附在反應(yīng)孔壁上，與反應(yīng)孔中的包被物非特異性結(jié)合，在洗滌過程中不能完全洗脫，Hb 中的亞鐵血紅素具有類似辣根過氧化物酶的活性，會(huì)增加顯色反應(yīng)，導(dǎo)致假陽性結(jié)果。而其他物質(zhì)與包被物結(jié)合，則會(huì)導(dǎo)致待測(cè)物與包被物的結(jié)合減少，減弱顯色反應(yīng)。 總之，溶血對(duì)ELISA 檢測(cè)的影響機(jī)制比較復(fù)雜，溶血程度不同，不同的影響因素可能會(huì)占據(jù)主導(dǎo)位置，從而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)一定的偏差[11]。

本研究選取檢測(cè)結(jié)果易受標(biāo)本狀態(tài)影響的陰性和弱陽性標(biāo)本作為研究對(duì)象，探討不同程度溶血對(duì)這2 類標(biāo)本在HBsAg、HIV Ag/Ab、抗-HCV、抗-TP 4 項(xiàng)ELISA 檢測(cè)結(jié)果的影響，各項(xiàng)目使用的試劑涉及3 ～5 種常用的國(guó)產(chǎn)試劑。 1)對(duì)于HBsAg ELISA 項(xiàng)目，Hb≤19 g/L 時(shí)陰性和弱陽性標(biāo)本的S/CO 值均波動(dòng)較小，未出現(xiàn)高值陰性、假陽性或假陰性結(jié)果。 有研究顯示Hb 5 g/L 和10 g/L 均不會(huì)對(duì)HBsAg 陰性和陽性標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，與本次研究結(jié)果相符，當(dāng)達(dá)到Hb 100 g/L 的重度溶血時(shí)，HBsAg 陰性標(biāo)本檢測(cè)的假陽性率會(huì)明顯升高，但未對(duì)其臨界值進(jìn)行研究[2，12]。 2)對(duì)于HIV Ag/Ab ELISA 項(xiàng)目，陰性標(biāo)本的檢測(cè)中，B(3 代)試劑在Hb≥9 g/L 時(shí)出現(xiàn)假陽性結(jié)果，A(3 代)和C(3 代)試劑均在Hb 為17 g/L 時(shí)出現(xiàn)了高值陰性結(jié)果，可能影響結(jié)果判定，其他2 種試劑在Hb≤17 g/L 時(shí)檢測(cè)結(jié)果均為低值陰性。 對(duì)于弱陽性標(biāo)本的檢測(cè)，A(3 代)和A(4 代)試劑分別在Hb≥3 g/L和4 g/L 時(shí)出現(xiàn)了假陰性結(jié)果，其他3 種試劑在Hb≤17 g/L 時(shí)檢測(cè)結(jié)果均為陽性。 比較同一廠家3代和4 代試劑的檢測(cè)結(jié)果，可見A 和B 廠家的3 代試劑檢測(cè)溶血陰性和弱陽性標(biāo)本的S/CO 值升高或下降程度(與空白對(duì)照相比)總體高于同廠家的4 代試劑，提示HIV Ag/Ab ELISA 項(xiàng)目對(duì)標(biāo)本溶血的抗干擾能力相對(duì)較弱，不同廠家的試劑對(duì)標(biāo)本溶血的抗干擾能力存在差異，且總體來看同一廠家4代試劑對(duì)標(biāo)本溶血的抗干擾能力優(yōu)于3 代試劑。張志紅等[13]的研究顯示Hb＞10 g/L 時(shí)部分試劑檢測(cè)抗-HIV 陰性標(biāo)本的OD 值明顯升高，Hb＞5 g/L時(shí)部分試劑檢測(cè)抗-HIV 弱陽性標(biāo)本的OD 值明顯降低，可能導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果，與本次研究的結(jié)果趨于一致。 此外，本研究中A(3 代)、B(3代)和A(4 代)試劑檢測(cè)弱陽性標(biāo)本時(shí)均出現(xiàn)隨溶血程度增高，S/CO 值先下降后上升的現(xiàn)象，提示溶血對(duì)HIV Ag/Ab ELISA 檢測(cè)的影響機(jī)制較為復(fù)雜，以上現(xiàn)象可能是在不同溶血程度時(shí)，不同的影響因素發(fā)揮作用的強(qiáng)弱不同導(dǎo)致的。 3)對(duì)于抗-HCV ELISA 項(xiàng)目，Hb≤17 g/L 時(shí)未出現(xiàn)高值陰性、假陽性或假陰性結(jié)果，其中A(間接法)試劑檢測(cè)弱陽性標(biāo)本在Hb≥4 g/L 時(shí)S/CO 值出現(xiàn)了明顯升高，但不影響定性結(jié)果的判定，其他3 種試劑檢測(cè)的S/CO 值波動(dòng)均較小。 甄志軍等[11]的研究顯示溶血對(duì)抗-HCV 陰性和強(qiáng)陽性標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果無影響，抗-HCV 弱陽性標(biāo)本在Hb 為5 g/L 時(shí)OD 值明顯下降，可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果，該研究使用的試劑廠家與本研究有重合，但結(jié)果與本次研究存在一定差異，由于該研究時(shí)間較早(2012 年)，本研究的結(jié)果可能與試劑廠家對(duì)試劑質(zhì)量改進(jìn)有關(guān)。 4)對(duì)于抗-TP ELISA 項(xiàng)目，Hb≤13 g/L 時(shí)未出現(xiàn)高值陰性、假陽性或假陰性結(jié)果，其中C 試劑檢測(cè)陰性標(biāo)本在Hb≥1 g/L 時(shí)S/CO 值有明顯升高趨勢(shì)，在Hb 為13 g/L 時(shí)S/CO 值達(dá)到0.47，接近0.50，存在一定風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)引起重視。 王欣等[14]的研究顯示對(duì)同1位獻(xiàn)血者，體外原因引起的標(biāo)本溶血會(huì)導(dǎo)致抗-TP陰性標(biāo)本OD 值升高，中度溶血[Hb(5 ～10)g/L]時(shí)已出現(xiàn)假陽性標(biāo)本；溶血程度增高，會(huì)導(dǎo)致抗-TP陽性標(biāo)本OD 值升高，但不影響定性結(jié)果判定，與本研究的結(jié)果存在一定差異，該研究使用的試劑與本研究不同，可能與不同試劑對(duì)標(biāo)本溶血的抗干擾能力不同有關(guān)。

綜上所述，標(biāo)本溶血對(duì)于血站實(shí)驗(yàn)室ELISA 檢測(cè)結(jié)果的影響主要為對(duì)HIV Ag/Ab ELISA 的影響，其他3 個(gè)項(xiàng)目在本次研究的試劑和標(biāo)本溶血范圍內(nèi)檢測(cè)結(jié)果均不受影響。 由于血站實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)模式為同1 管標(biāo)本需同時(shí)進(jìn)行ELISA 4 項(xiàng)的檢測(cè)，因此實(shí)驗(yàn)室在確定可接受的標(biāo)本溶血程度時(shí)，應(yīng)以最易受溶血影響的項(xiàng)目為標(biāo)準(zhǔn)。 依據(jù)本次研究結(jié)果，Hb 2 g/L 為適合于相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目、設(shè)備、試劑的可接受的標(biāo)本溶血程度。 強(qiáng)生抗-HCV 和伯樂HIV Ag/Ab ELISA 試劑說明書中載明的對(duì)陰性和弱陽性標(biāo)本無影響的溶血程度分別為Hb 2 g/L 和1 g/L，與本次實(shí)驗(yàn)得出的可接受的溶血程度相近。 但本研究存在一定的局限性:首先，4 個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目是分別進(jìn)行標(biāo)本制備及試驗(yàn)的，因此各項(xiàng)目陰性原液溶血程度及采用的稀釋梯度存在一定差異，但均覆蓋了強(qiáng)、中、弱不同程度的溶血，不影響整體試驗(yàn)結(jié)果；其次，對(duì)各溶血程度標(biāo)本的檢測(cè)數(shù)量過少，無法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

由于ELISA 檢測(cè)對(duì)標(biāo)本溶血的耐受程度受試劑、設(shè)備、環(huán)境等多種因素的影響，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自身實(shí)際情況，通過確認(rèn)或驗(yàn)證確定適宜于本實(shí)驗(yàn)室ELISA 檢測(cè)的可接受的溶血程度。 同時(shí)，為便于實(shí)際操作，實(shí)驗(yàn)室可通過制作溶血色卡或使用儀器測(cè)定血漿中Hb 濃度等方式幫助工作人員判定標(biāo)本溶血程度及標(biāo)本接收與否。 此外，由于血站實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本來源于健康人群，溶血多為體外原因造成，比如在標(biāo)本采集過程中穿刺方式不當(dāng)，運(yùn)輸過程中劇烈晃動(dòng)采血管等[15]。 因此，對(duì)于溶血標(biāo)本的管理應(yīng)從源頭做起，通過人員培訓(xùn)、規(guī)范操作等措施，對(duì)標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)、離心等檢測(cè)前環(huán)節(jié)進(jìn)行優(yōu)化，盡量減少標(biāo)本溶血。