劉 杏,張昌龍,陳麗婭,張曉慶,高 陽,張海龍*

1.西安市高陵區(qū)婦幼保健院，西安 710200；2.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 710061

九子連為蘭科植物蝦脊蘭屬流蘇蝦脊蘭（Calanthe fimbriataFranch.）的假鱗莖和全草，為多年生草本，高20～30 cm，假鱗莖粗短，呈長卵形，整體類似牙齒狀排列，是一種常用的土家族民族藥，同時也屬于陜西“七藥”，稱為“馬牙七”。其味淡、微辛、苦，性涼，具有清熱解毒的作用，民間主要用于治療咽炎、肝炎及胃潰瘍等。其在國內(nèi)主要分布于陜西、甘肅、四川和湖北等地［1-2］。

到目前為止，國內(nèi)外對該植物系統(tǒng)的化學(xué)成分及藥理活性研究少有報道。姜祎等［2-3］用水蒸氣蒸餾法提取九子連中的揮發(fā)油并用GC-MS 分析其化學(xué)成分，鑒定出38 種物質(zhì)，并用瓊脂擴(kuò)散法研究九子連提取物的體外抑菌作用發(fā)現(xiàn)，九子連水提取物對痢疾志賀氏菌、乙型溶血性鏈球菌有抑菌作用；九子連正丁醇萃取物對痢疾志賀氏菌、乙型溶血性鏈球菌和金黃色葡萄球菌均有抑菌作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)九子連甲醇提取物及其各萃取層均能提高小鼠糖耐量；通過對鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）誘導(dǎo)的糖尿病小鼠進(jìn)行的抗糖尿病實驗發(fā)現(xiàn)，九子連甲醇提取物能顯著抑制STZ 誘導(dǎo)的糖尿病小鼠血糖的升高［4］；用各種色譜技術(shù)對九子連乙酸乙酯萃取部位的化學(xué)成分進(jìn)行研究，分離得到15 個化合物［5］。為進(jìn)一步闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎、活性優(yōu)良的化合物，繼續(xù)對九子連進(jìn)行化學(xué)成分及生物活性研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器

制備型高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀（PuriMaster 5000）、SuPer-Max 3100 全波長多功能酶標(biāo)儀均購自上?？普苌萍加邢薰?；Megres C18分析型色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）、Megres C18半制備型色譜柱（250 mm× 10.0 mm，5 μm）均購自江蘇漢邦科技有限公司；AVANCE III HD 400 MHz 型核磁共振儀、AVANCE III HD 600 MHz 型核磁共振儀均購自德國Bruker公司；RP-C18（德國Merck 公司）。

1.2 試藥

甲醇、氯仿、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等實驗所用試劑均為分析純，購自天津市大茂化學(xué)試劑廠；胰蛋白酶（美國Hyclone 公司）；胎牛血清（美國Gibco 公司）；DMSO、MTT 等均購自美國Sigma 公司。柱層析硅膠（100～200 目，200～300 目，青島海洋化工有限公司）；DMEM 培養(yǎng)基（美國Hyclone 公司）。

九子連于2021年采集于陜西寧強(qiáng)，經(jīng)西安交通大學(xué)生藥學(xué)系牛曉峰教授鑒定為九子連（Calanthe fimbriataFranch.）的干燥根莖，憑證標(biāo)本（編號JZL 211118）現(xiàn)保存于西安交通大學(xué)藥學(xué)院。

1.3 細(xì)胞

人肝癌HepG2 細(xì)胞（西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科）。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

取于陰涼處晾干的九子連根莖10.0 kg。將其粉碎，用甲醇冷浸后加熱回流提取，甲醇提取液經(jīng)減壓濃縮得到九子連甲醇總提取物1.6 kg。將浸膏分散于適量蒸餾水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，減壓濃縮后得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水層。

取九子連正丁醇層樣品70 g，經(jīng)硅膠（200～300目，500 g）柱色譜進(jìn)行分離，以氯仿-甲醇（1∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1、1∶5、0∶1）進(jìn)行梯度洗脫，收集樣品，經(jīng)薄層色譜檢識合并后，共得到15 個流份（Bu-1～Bu-15）。Bu-8 經(jīng)ODS 柱色譜進(jìn)行分離，以甲醇-水（10∶90～100∶0）進(jìn)行梯度洗脫得到10 個流份（Bu-8-1～Bu-8-10）。Bu-8-7 經(jīng)HPLC（甲醇-水：45∶55）分離純化得化合物1（7.0 mg）。Bu-8-5 經(jīng)HPLC（甲醇-水：40∶60）分離純化得化合物2（5.0 mg）。Bu-8-3 經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜，以甲醇為洗脫劑分離純化得到化合物3（29.0 mg）。Bu-12 經(jīng)ODS 柱色譜進(jìn)行分離，以甲醇-水（10∶90～100∶0）進(jìn)行梯度洗脫得到10 個流份（Bu-12-1～Bu-12-10）。 Bu-12-1經(jīng)HPLC（甲醇-水：7∶93）分離純化得到化合物4（2.4 mg）和化合物5（3.3 mg）。Bu-9 經(jīng)ODS 柱色譜進(jìn)行分離，以甲醇-水（10∶90～100∶0）進(jìn)行梯度洗脫得到8 個流份（Bu-9-1～Bu-9-8）。Bu-9-3 經(jīng)HPLC（甲醇-水：18∶82）分離純化得化合物6（3.8 mg）。Bu-7 經(jīng)ODS 柱色譜進(jìn)行分離，以甲醇-水（10∶90～100∶0）進(jìn)行梯度洗脫得到6 個流份（Bu-7-1～Bu-7-6）。Bu-7-5經(jīng)HPLC（甲醇-水：35∶65）分離純化得到化合物7（4.6 mg）。Bu-7-7 經(jīng)HPLC（甲醇-水：45∶55）分離純化得到化合物8（15.0 mg）。

九子連乙酸乙酯層樣品85.7 g，經(jīng)硅膠（200～300 目，600 g）柱色譜進(jìn)行分離，用氯仿-甲醇（1∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1、1∶5、0∶1）進(jìn)行梯度洗脫，收集并合并相同流份后，共得到33 個流份（EA-1～EA-33）。EA-14 用硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯（3∶1、2∶1）進(jìn)行梯度洗脫得4 個流份（EA-14-1～EA-14-4）。EA-14-3 經(jīng)HPLC（甲醇-水：60∶40）分離純化得化合物9（2.0 mg）。 EA-22經(jīng)HPLC（甲醇-水：20∶80）分離純化得化合物10（2.0 mg）。EA-16 經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜純化，以甲醇為洗脫劑分離得到化合物11（6.0 mg）。

取九子連石油醚層樣品102.3 g，用硅膠（200～300 目，700 g）柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯（1∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1、1∶5、0∶1）進(jìn)行梯度洗脫，收集并合并相同流份后，共得到33 個流份（PE-1～PE-33）。PE-9 經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜進(jìn)行分離，以石油醚-乙酸乙酯（20∶1）進(jìn)行洗脫，得到2 個流份（PE-9-1～PE-9-2）。PE-9-1 經(jīng)PTLC以石油醚-乙酸乙酯（3∶1）為展開劑，純化得到化合物12（5.0 mg）。PE-11 經(jīng)硅膠（200～300 目）柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯（20∶1）進(jìn)行洗脫得到3 個流份（PE-11-1～PE-11-3）。PE-11-3 經(jīng)PTLC 以石油醚-乙酸乙酯（3∶1）為展開劑分離純化得化合物13（2.0 mg）。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無定形粉末，易溶于甲醇，分子式為C16H28O7。1H-NMR （400 MHz，CD3OD），δH：1.25（3H，s，H-9），1.54 （2H，m，H-5），1.67 （3H，s，H-10），2.09 （2H，m，H-4），3.20 （1H，m，H-2＇），3.22（1H，m，H-5＇），3.27 （1H，m，H-4＇），3.34 （1H，m，H-3＇），3.66 （1H，dd，J= 11.8，5.6 Hz，H-6＇a），3.85（1H，m，H-6＇b），4.03 （1H，d，J= 11.5 Hz，H-8a），4.19 （1H，d，J= 11.5 Hz，H-8b），4.24 （1H，d，J=7.8 Hz，H-1＇），5.04 （1H，dd，J= 10.8 Hz，H-1a），5.20 （1H，d，J= 17.5 Hz，H-1b），5.48 （1H，t，J=7.1 Hz，H-6），5.91 （1H，dd，J= 17.4，10.8 Hz，H-2）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD），δC：112.1 （C-1），146.2 （C-2），73.8 （C-3），42.9 （C-4），23.5 （C-5），130.1 （C-6），132.9 （C-7），75.9 （C-8），27.6 （C-9），14.1 （C-10），102.6 （C-1＇），75.1 （C-2＇），78.2（C-3＇），71.7 （C-4＇），77.9 （C-5＇），62.8 （C-6＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［6］，故鑒定化合物1 為betulalbuside A。

化合物2：白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C19H30O7。1H-NMR （400 MHz，CD3OD），δH：5.86（3H，m，H-4，7，8），1.03 （3H，s，H-11），1.04 （3H，s，H-12），1.29 （3H，d，J= 6.4 Hz，H-10），1.92 （3H，s，H-13），2.15 （1H，d，J= 17.0 Hz，H-2a），2.53 （1H，d，J= 17.0 Hz，H-2b），4.42 （1H，m，H-9），4.34（1H，d，J= 7.8 Hz，H-1＇），3.85 （1H，m，H-2＇），3.33（1H，s，H-3＇），3.25 （2H，m，H-4＇，5＇），3.62 （1H，dd，J= 11.7，5.3 Hz，H-6＇a），3.17 （1H，m，H-6＇b）。13CNMR（100 MHz，CD3OD），δC：42.4 （C-1），50.7 （C-2），201.2 （C-3），127.2 （C-4），167.3 （C-5），80.0（C-6），131.5（C-7），135.3 （C-8），77.3 （C-9），21.2 （C-10），23.4 （C-11），24.7 （C-12），19.6 （C-13），102.7 （C-1＇），75.3 （C-2＇），78.1 （C-3＇），71.7（C-4＇），78.0 （C-5＇），62.8 （C-6＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［7］，故鑒定化合物2為roseoside。

化合物3：白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C9H12N2O6。1H-NMR （400 MHz，CD3OD），δH：8.03（1H，d，J= 8.1 Hz，H-6），5.92 （1H，d，J= 4.5 Hz，H-1＇），5.71 （1H，d，J= 8.1 Hz，H-5），4.20 （1H，m，H-3＇），4.17 （1H，m，H-2＇），4.02 （1H，m，H-4＇），3.83（1H，dd，J= 12.2，2.2 Hz，H-5＇a），3.74 （1H，dd，J= 12.2，2.7 Hz，H-5＇b）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD），δC：152.6 （C-2），166.2 （C-4），102.8 （C-5），142.7 （C-6），90.6 （C-1＇），71.3 （C-2＇），75.7 （C-3＇），86.5 （C-4＇），62.3 （C-5＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［8］，故鑒定化合物3為尿苷。

化合物4：白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C18H26O12。1H-NMR （600 MHz，CD3OD），δH：6.76（1H，d，J= 2.7 Hz，H-2），6.71 （1H，d，J= 8.6 Hz，H-5），6.62 （1H，dd，J= 8.6，2.7 Hz，H-6），4.77 （1H，d，J=7.6 Hz，H-1＇），4.36 （1H，d，J= 7.8 Hz，H-1＇），3.84 （3H，s，3-OMe ）。13C-NMR（150 MHz，CD3OD），δC：152.7 （C-1），103.8 （C-2），149.3 （C-3），143.0 （C-4），116.1 （C-5），109.9 （C-6），103.5 （C-1＇），74.9 （C-2＇），77.3 （C-3＇），70.0 （C-4＇），77.8 （C-5＇），61.4 （C-6＇），104.8 （C-1＇），71.6 （C-2＇），75.1 （C-3＇），71.4 （C-4＇），62.7 （C-5＇），56.5 （3-OMe）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［9］，故鑒定化合物4 為4-羥基-3-甲氧基苯基β-D-吡喃木糖基（1→6）-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物5：白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C19H28O13。1H-NMR （600 MHz，CD3OD），δH：6.49（2H，s，H-2，6），4.79 （1H，d，J= 7.5 Hz，H-1＇），4.33（1H，d，J= 7.8 Hz，H-1＇），3.83 （6H，m，3，5-OMe），13C-NMR（150 MHz，CD3OD），δC：152.3 （C-1），149.4（C-3，5），96.7 （C-2，6），132.1 （C-4），103.6 （C-1＇），74.9 （C-2＇），77.8 （C-3＇），71.6 （C-4＇），77.2 （C-5＇），70.4 （C-6＇），105.0 （C-1＇），75.1 （C-2＇），78.1 （C-3＇），71.4 （C-4＇），62.7 （C-5＇），56.9 （3，5-OMe）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［10］，故鑒定化合物5 為arctiiphenolglycoside A。

化合物6：無色針晶，易溶于甲醇，分子式為C14H20O7。1H-NMR （400 MHz，CD3OD），δH：7.05（2H，d，J= 8.4 Hz，H-2，6），6.67 （2H，d，J= 8.5 Hz，H-3，5），2.81 （2H，m，H-7），4.02 （1H，m，H-8a），3.85 （1H，m，H-8b），4.27 （1H，d，J= 7.8 Hz，H-1＇）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD），δC：130.8 （C-1），156.8 （C-4），130.9 （C-2，6），116.1 （C-3，5），36.4 （C-7），72.1 （C-8），104.4 （C-1＇），75.1 （C-2＇），78.0 （C-3＇），71.7 （C-4＇），78.1 （C-5＇），62.8 （C-6＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［11］，故鑒定化合物6 為salidroside。

化合物7：無色油狀物，易溶于甲醇，分子式為C11H22O6。1H-NMR （400 MHz，CD3OD），δH：3.95（1H，dt，J= 9.4，7.0 Hz，H-1a），3.56 （1H，dt，J=9.5，6.9 Hz，H-1b），1.52 （2H，q，J= 6.9 Hz，H-2），1.69 （1H，m，H-3），0.92 （6H，d，J= 6.7 Hz，H-4，5），4.24 （1H，d，J= 7.8 Hz，H-1＇）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD），δC：104.4 （C-1＇），75.1 （C-2＇），78.1（C-3＇），71.7 （C-4＇），77.9 （C-5＇），62.8 （C-6＇），69.3（C-1），39.6 （C-2），26.1 （C-3），23.0 （C-4，5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［12］，故鑒定化合物7 為3-methylbutan-1-ol-β-D-glucopyranoside。

化合物8：無定形粉末，易溶于甲醇，分子式為C16H28O7。1H-NMR （400 MHz，CD3OD），δH：5.23（1H，dd，J= 17.5，1.1 Hz，H-1a），5.01 （1H，dd，J=10.8，1.2 Hz，H-1b），5.99 （1H，dd，J= 17.5，10.8 Hz，H-2），1.95 （2H，m，H-4a，5a），1.81 （2H，m，H-4b，5b），4.06 （1H，t，J= 7.0 Hz，H-6），1.22 （3H，s，H-8），1.25 （3H，s，H-9），1.34 （3H，s，H-10），4.50（1H，d，J= 7.7 Hz，H-1＇），3.15 （1H，m，H-2＇），3.37（1H，m，H-3＇），3.25 （2H，m，H-4＇，5＇），3.82 （1H，dd，J= 11.9，2.0 Hz，H-6＇a），3.63 （1H，dd，J= 11.9，5.2 Hz，H-6＇b）。13C NMR （100 MHz，CD3OD），δC：112.2 （C-1），145.3 （C-2），84.6 （C-3），38.6 （C-4），28.4 （C-5），86.9 （C-6），80.6 （C-7），24.0 （C-8），20.9 （C-9），26.1 （C-10），98.7 （C-1＇），75.1 （C-2＇），77.9 （C-3＇），71.7 （C-4＇），77.6 （C-5＇），62.8 （C-6＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［13］，故鑒定化合物8 為trans-linalool-3，6-oxide-β-D-glucopyranoside。

化合物9：白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C20H24O6。1H-NMR （600 MHz，CD3OD），δH：6.67（1H，d，J= 1.7 Hz，H-2），6.74 （1H，d，J= 8.0 Hz，H-5），6.61 （1H dd，J= 8.0，1.8 Hz，H-6），1.76 （1H，t，J= 10.0 Hz，H-8），3.39 （1H，dd，J= 11.2，4.0 Hz，H-9a），3.66 （2H，m，H-9b，H-9＇b），3.70 （1H，dd，J=10.9，4.9 Hz，H-9＇a），6.65 （1H，s，H-2＇），6.18 （1H，s，H-5＇），2.77 （2H，d，J= 7.5 Hz，H-7＇），3.78 （1H，m，H-7），2.00 （1H，s，H-8＇），3.77 （3H，s，3-OCH3），3.81 （3H，s，3＇ -OCH3）。13C-NMR（150 MHz，CD3OD），δC：138.6 （C-1），113.8 （C-2），149.0 （C-3），146.0 （C-4），116.0 （C-5），123.2 （C-6），48.0（C-7），48.0 （C-8），62.2 （C-9），129.0 （C-1＇），112.4（C-2＇），147.2 （C-3＇），145.3 （C-4＇），117.4 （C-5＇），134.2 （C-6＇），33.6 （C-7＇），40.0 （C-8＇），65.9 （C-9＇），56.4 （3＇-OCH3），56.3 （3-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［14］，故鑒定化合物9為（+）-isolariciresinol。

化合物10：白色粉末，易溶于水，分子式為C10H13N5O4。1H-NMR （400 MHz，D2O），δH：8.29（1H，s，H-8），8.19 （1H，s，H-2），6.03 （1H，d，J=6.1 Hz，H-1＇），4.76 （1H，m，H-2＇），4.41 （1H，s，H-3＇），4.27 （1H，s，H-4＇），3.90 （1H，d，J= 12.8 Hz，H-5＇a），3.82 （1H，d，J= 13.0 Hz，H-5＇b）。13CNMR（100 MHz，D2O），δC：152.3 （C-2），148.2 （C-4），118.8 （C-5），155.3 （C-6），140.4 （C-8），88.3（C-1＇），70.6 （C-2＇），73.7 （C-3＇），85.7 （C-4＇），61.4（C-5＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［15］，故鑒定化合物10為腺苷。

化合物11：白色粉末，易溶于甲醇，分子式為C17H17NO3。1H-NMR （400 MHz，CD3OD），δH：7.42（1H，d，J= 15.7 Hz，H-3），6.36 （1H，d，J= 15.7 Hz，H-2），7.36 （2H，d，J= 8.6 Hz，H-5，9），7.04 （2H，d，J= 8.4 Hz，H-6，8），6.78 （2H，d，J= 8.5 Hz，H-5＇，7＇），6.71 （2H，d，J= 8.4 Hz，H-4＇，8＇），3.43 （2H，d，J= 8.2 Hz，H-1＇），2.73 （2H，d，J= 8.2 Hz，H-2＇）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD），δC：169.2 （C-1），131.3 （C-2），141.8 （C-3），127.7 （C-4），130.6 （C-5，9），116. 2 （C-6，8），160.5 （C-7），42.6 （C-1＇），35.8 （C-2＇），118.4 （C-3＇），130.7 （C-4＇，8＇），116.7（C-5＇，7＇），156.9 （C-6＇）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［16］，故鑒定化合物11 為N-反式-對羥基苯乙基香豆酰胺。

化合物12：白色粉末，易溶于氯仿，分子式為C16H16O4。1H-NMR （400 MHz，CDCl3），δH：6.71（1H，s，H-1），6.97 （1H，dd，J= 8.1，1.0 Hz，H-6），7.16 （1H，t，J= 7.7 Hz，H-7），6.86 （1H，d，J=7.2 Hz，H-8），2.73 （2H，dd，J= 8.8，4.0 Hz，H-9），2.66 （2H，dd，J= 9.9，5.1 Hz，H-10），3.95 （3H，s，2-OCH3），3.76 （3H，s，4-OCH3）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3），δC：108.0 （C-1），146.4 （C-2），137.3（C-3），142.7 （C-4），119.3 （C-4a），119.9 （C-4b），153.8 （C-5），118.1 （C-6），128.5 （C-7），120.1 （C-8），140.7 （C-8a），31.4 （C-9），30.8 （C-10），132.4（C-10a），56.5 （2-OCH3），62.1 （4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［17］，故鑒定化合物12 為marylaurencinol A。

化合物13：棕色粉末，易溶于氯仿，分子式為C16H16O4。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δH：7.86（1H，s，H-5），6.78 （1H，s，H-8），6.42 （1H，d，J=2.2 Hz，H-1），6.35 （1H，s，H-3），3.91 （3H，s，4-OCH3），3.88 （3H，s，7-OCH3），2.68 （4H，s，H-9，10）。13C-NMR（100 MHz，CDCl3），δC：107.5 （C-1），154.5 （C-2），98.2 （C-3），157.5 （C-4），114.3 （C-4a），125.0（C-4b），113.5（C-5），144.4（C-6），142.7 （C-7），111.2 （C-8），129.5 （C-8a），30.8 （C-9），29.0 （C-10），141.2 （C-10a），56.1 （7-OCH3），55.7 （4-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致［18］，故鑒定化合物13為callosin。

2.3 肝癌細(xì)胞增殖抑制活性的測定

用MTT 法檢測分離得到的13 個化合物對人肝癌HepG2 細(xì)胞的增殖抑制作用，以5-氟脲嘧啶（fluorouracil，5-FU）為陽性對照。將細(xì)胞接種于96 孔板內(nèi)，在37 °C、體積分?jǐn)?shù)為5% 的 CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞貼壁生長后，棄去培養(yǎng)基，加入200 μL 預(yù)先配好的含不同濃度（3、10、30、100 μmol·L-1）化合物的新鮮培養(yǎng)基，同時設(shè)空白對照組（200 μL DMEM 高糖完全培養(yǎng)基），每個濃度設(shè)3 個復(fù)孔，置于37 °C、體積分?jǐn)?shù)為5% 的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h 后，向每孔加入20 μL MTT 溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h 后，吸去培養(yǎng)液，每孔加入150 μL DMSO，置于恒溫振蕩器上振搖10 min 至結(jié)晶完全溶解，用酶標(biāo)儀在490 nm 處測定吸光度值。

活性測定結(jié)果表明，化合物13 對HepG2 細(xì)胞表現(xiàn)出了一定的增殖抑制作用，在100 μmol·L-1的濃度下，其對HepG2 細(xì)胞的抑制率達(dá)到了44.8%，其余化合物對HepG2 細(xì)胞的增殖抑制作用均較弱。

3 討論

民族藥是我國少數(shù)民族的智慧結(jié)晶，理應(yīng)得到繼承和發(fā)展，尤其是人數(shù)較少的民族因其無本民族文字，故對民族藥及時加以研究和發(fā)揚(yáng)顯得更加迫切和必要。同時，陜西“七藥”也是我國陜西及周邊地區(qū)的重要民間藥，“七”是“奇”的變音，是具有奇特療效的意思，作為中國傳統(tǒng)醫(yī)藥文化的重要組成部分，“七藥”在維護(hù)人民健康中發(fā)揮重要的作用。繼承和發(fā)展我國的特色民族藥和民間藥，不僅可以豐富和完善我國的傳統(tǒng)醫(yī)藥體系，還能促進(jìn)當(dāng)代醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展。

本論文在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步闡明了土家族民族藥九子連的化學(xué)成分，13 個化合物均為首次從該植物中分離鑒定得到，包括生物堿、木脂素、二氫菲、核苷、芳香苷、單萜苷、環(huán)酮苷和脂肪醇苷等，可見九子連的化學(xué)成分復(fù)雜，結(jié)構(gòu)類型多樣。在這些化合物中，二氫菲類化合物callosin 對人肝癌HepG2 細(xì)胞具有一定的增殖抑制作用。該研究為民族藥九子連的進(jìn)一步深入研究奠定了實驗基礎(chǔ)，也為對其進(jìn)行綜合開發(fā)、利用提供了科學(xué)依據(jù)。