李明玥 成祿艷 崔陽陽 戴建修 黃春秀 黎思辰 叢林 冉春

摘要

柑橘全爪螨是一種世界性害螨，目前對(duì)許多藥劑已經(jīng)產(chǎn)生抗性。藥劑復(fù)配是治理抗性問題，延長藥劑使用壽命的重要手段。為篩選出增效明顯的復(fù)配新產(chǎn)品，本文選取聯(lián)苯肼酯作為標(biāo)準(zhǔn)藥劑，與阿維菌素和氟啶胺分別進(jìn)行復(fù)配，并采用葉碟噴霧法測(cè)定其聯(lián)合毒力及增效作用。結(jié)果表明，聯(lián)苯肼酯、阿維菌素和氟啶胺的單劑LC50分別為16.43、0.29?mg/L和12.63?mg/L。聯(lián)苯肼酯與阿維菌素復(fù)配比例為19∶1和15∶5的共毒系數(shù)分別為135.02和158.40，具有增效作用。聯(lián)苯肼酯與氟啶胺在6∶4、7∶3、5∶5、9∶1、8∶2復(fù)配比例的共毒系數(shù)分別為466.28、410.61、370.22、311.15和275.85，增效作用顯著。

關(guān)鍵詞

柑橘全爪螨;?聯(lián)苯肼酯;?阿維菌素;?氟啶胺;?聯(lián)合毒力

中圖分類號(hào)：

S?482.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：?B

DOI：?10.16688/j.zwbh.2023242

Cotoxicity?of?bifenazate?and?two?acaricides?against?Panonychus?citri?（Acari：?Tereanychidae）

LI?Mingyue1，?CHENG?Luyan2，?CUI?Yangyang1，?DAI?Jianxiu3，?HUANG?Chunxiu4，?LI?Sichen1，CONG?Lin1，?RAN?Chun1

（1.?Citrus?Research?Institute，?Southwest?University，?Chongqing?400712，?China;?2.?Chongqing?Institute?for

Food?and?Drug?Control，?Chongqing?401121，?China;?3.?Yunyang?County?Development?Center?of?Fruit?Industry，

Chongqing?404500，?China;?4.?Zhongxian?Agrotech?Extension?and?Service?Center，?Chongqing?404300，?China）

Abstract

Panonychus?citri?is?a?worldwide?pest?mite?known?for?its?resistance?to?various?acaricides.?Combining?acaricides?is?an?effective?strategy?to?solve?the?resistance?problem?and?extend?the?shelf?life?of?acaricides.?In?this?study，?compound?formulations?comprising?bifenazate，?with?abamectin，?or?fluazinam?were?screened?to?identify?new?compound?products?with?clear?synergistic?effects.?The?cotoxicity?and?synergistic?effect?of?these?compound?acaricides?were?determined?using?the?leafspray?method.?The?LC50?values?were?determined?as?16.43?mg/L?for?bifenazate，?0.29?mg/L?for?abamectin，?and?12.63?mg/L?for?fluazinam.?Cotoxicity?coefficients?of?135.02?and?158.40?were?observed?for?bifenazate?and?abamectin?at?ratios?of?19∶1?and?15∶5，?respectively，?indicating?a?synergistic?effect.?For?bifenazate?and?fluazinam?at?ratios?of?6∶4，?7∶3，?5∶5，?9∶1，?and?8∶2，?cotoxicity?coefficients?of?466.28，?410.61，?370.22，?311.15，?and?275.85，?were?recorded，?displaying?significant?synergistic?effects.

Key?words

Panonychus?citri;?bifenazate;?abamectin;?fluazinam;?cotoxicity

柑橘全爪螨Panonychus?citri又名柑橘紅蜘蛛，是一種世界性柑橘害螨，每年在春、秋季出現(xiàn)螨口高峰［1］。柑橘全爪螨以刺吸式口器吸食寄主嫩梢、嫩葉、花和果實(shí)，為害癥狀主要表現(xiàn)為葉片出現(xiàn)斑點(diǎn)、褪綠，造成光合作用效率降低，嚴(yán)重時(shí)引起落葉落果，嚴(yán)重影響柑橘產(chǎn)業(yè)發(fā)展［13］。

目前，害螨的防治策略仍主要依靠化學(xué)合成殺螨劑，然而殺螨劑的長期不科學(xué)使用，以及柑橘全爪螨具有繁殖能力強(qiáng)、發(fā)育歷期短等特點(diǎn)，常導(dǎo)致柑橘全爪螨產(chǎn)生抗藥性［4］。國內(nèi)抗性監(jiān)測(cè)表明，柑橘全爪螨對(duì)一些傳統(tǒng)藥劑已產(chǎn)生較高的抗性，對(duì)阿維菌素、噠螨靈、螺螨酯等常用藥劑也產(chǎn)生了不同程度的抗性［57］。在國外，柑橘全爪螨對(duì)螺螨酯、聯(lián)苯肼酯等殺螨劑的抗性問題同樣嚴(yán)重［810］。由于研制開發(fā)新型農(nóng)藥面臨著投資大、周期長等風(fēng)險(xiǎn)，因此延長現(xiàn)有農(nóng)藥的使用年限是抗性治理的重要手段。通過不同藥劑復(fù)配或輪用可以有效地延緩害螨抗藥性的產(chǎn)生，延長藥劑使用年限［11］。

聯(lián)苯肼酯（bifenazate）是1999年商業(yè)化的聯(lián)苯肼類殺螨劑，因其具有速效性好、持效期長、對(duì)環(huán)境友好以及與現(xiàn)有殺螨劑無交互抗性等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于各類害螨防控［1213］。聯(lián)苯肼酯一開始被認(rèn)為是一種神經(jīng)毒劑，后來被證實(shí)其作用位點(diǎn)是細(xì)胞線粒體電子傳遞鏈Ⅲ上的細(xì)胞色素b［14］。由于不科學(xué)使用，在我國多個(gè)地區(qū)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對(duì)聯(lián)苯肼酯產(chǎn)生抗性的柑橘全爪螨田間種群，抗性問題正在成為聯(lián)苯肼酯使用的一大限制［7］。阿維菌素（abamectin）是一種大環(huán)內(nèi)酯化合物，其作用靶標(biāo)為昆蟲的谷氨酸門控氯離子通道［15］，因其高效、安全、持效期長等特點(diǎn)，同樣被廣泛用于害螨防治［16］。氟啶胺（fluazinam）是一類吡啶胺衍生物，因其具有廣譜性殺菌效果和殺螨效果，在國內(nèi)外常被用作保護(hù)性殺菌劑和殺螨劑，其機(jī)制被認(rèn)為是抑制氧化磷酸化過程［1718］。對(duì)作用機(jī)制不同的藥劑進(jìn)行復(fù)配使用，能夠延長化學(xué)藥劑的使用壽命，提高殺蟲效率，拓寬殺蟲譜等，是抗性治理的一個(gè)重要手段［19］。聯(lián)苯肼酯、阿維菌素、氟啶胺具有不同的作用機(jī)制，未發(fā)現(xiàn)明顯的交互抗性報(bào)道，選用聯(lián)苯肼酯作為混配的基本藥劑可能提高復(fù)配制劑的防治效果。鑒于此，本文選用聯(lián)苯肼酯分別與阿維菌素、氟啶胺進(jìn)行復(fù)配，以期篩選出增效明顯的復(fù)配新產(chǎn)品。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

試驗(yàn)使用的柑橘全爪螨最初于2005年采自重慶北碚柑桔研究所柑橘園，并于室內(nèi)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行飼養(yǎng)，參數(shù)設(shè)置為溫度26℃，光周期L∥D=14?h∥10?h，飼養(yǎng)期間未接觸任何化學(xué)藥劑。

試驗(yàn)藥劑：96%聯(lián)苯肼酯原藥、98.4%阿維菌素原藥和98.8%氟啶胺原藥，均由南開大學(xué)提供。

試驗(yàn)試劑：吐溫80（北京索萊寶科技有限公司）、丙酮（成都市科隆化學(xué)品有限公司）。

1.2?試驗(yàn)方法

1.2.1?室內(nèi)毒力測(cè)定

試驗(yàn)中生物測(cè)定采用葉碟噴霧法［20］。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，將各原藥單劑溶于丙酮作為母液，使用含0.1%吐溫80的純凈水稀釋成5個(gè)濃度梯度，使試螨死亡率控制在10%～90%，用含0.1%吐溫80的純凈水作為空白對(duì)照，每個(gè)梯度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。復(fù)配藥劑比例根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行設(shè)置，將單劑母液按質(zhì)量比進(jìn)行混合，隨后用含0.1%吐溫80的純凈水稀釋成5個(gè)濃度梯度，用含0.1%吐溫80的純凈水作為空白對(duì)照，每個(gè)濃度梯度設(shè)置3個(gè)重復(fù)。葉碟噴霧法的具體操作如下：將海綿修剪成略小于培養(yǎng)皿（9?cm）的圓形，于清水中浸潤后放入培養(yǎng)皿中，將定性濾紙修剪成相同大小后置于濕潤的海綿上。將洗凈的柑橘葉片剪為直徑25?mm的圓形放于定性濾紙上，用濕棉線圍住葉緣，防止試蟲逃逸。每個(gè)葉碟挑取40頭螨態(tài)一致、活力較高的雌成螨，靜置4?h后于體視顯微鏡下觀察，去除不健康的試蟲，確保每個(gè)葉碟至少有30頭健康雌成螨。取1?mL配制的藥劑，用Potter噴霧塔進(jìn)行噴霧處理。處理后將葉碟放入

溫度26℃，光周期?L∥D=14?h∥10?h，

恒溫培養(yǎng)箱中，24?h后觀察試蟲死亡情況，以毛筆輕觸螨體，螨足不動(dòng)則視為死亡［21］。

1.2.2?共毒系數(shù)計(jì)算

根據(jù)Sun等的共毒系數(shù)公式［22］，計(jì)算各混劑的共毒系數(shù)，計(jì)算公式如下：

毒性指數(shù)（TI）=標(biāo)準(zhǔn)藥劑的LC50/供試藥劑的LC50×100;

混劑（M）的實(shí)測(cè)毒力指數(shù)（ATI）=A單劑的LC50/M的LC50×100;

混劑（M）的理論毒力指數(shù)（TTI）=TI（A）×M中A的含量?（%）+TI（B）×M中B的含量（%）;

混劑的共毒系數(shù)（CTC）=ATI/TTI×100。

將計(jì)算所得的共毒系數(shù)（CTC）進(jìn)行比較，CTC≥120表現(xiàn)為增效作用，CTC≤80表現(xiàn)為拮抗作用，80＜CTC＜120表現(xiàn)為相加作用。

1.3?數(shù)據(jù)分析

采用農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（武漢市蔬菜科學(xué)研究所和農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，2006）［23］計(jì)算出死亡率和校正死亡率，求出毒力回歸方程、LC50及95%置信區(qū)間，使用IBM?SPSS?Statistics?20進(jìn)行卡方檢驗(yàn)并計(jì)算χ2，使用Excel?2019計(jì)算共毒系數(shù)。

2?結(jié)果與分析

2.1?3種單劑對(duì)柑橘全爪螨雌成螨的毒力

3種藥劑對(duì)柑橘全爪螨的毒力存在差異，其中阿維菌素LC50值為0.29?mg/L，氟啶胺和聯(lián)苯肼酯的LC50值分別為12.63?mg/L和16.43?mg/L（表1）。

2.2?復(fù)配劑對(duì)柑橘全爪螨雌成螨的毒力

聯(lián)苯肼酯與阿維菌素在19∶1和15∶5兩個(gè)配比下對(duì)柑橘全爪螨表現(xiàn)出增效作用，共毒系數(shù)分別為135.02和158.40（表2）。其余配比下對(duì)柑橘全爪螨均表現(xiàn)為相加作用，共毒系數(shù)分別為106.54、117.67、118.72、100.49。

聯(lián)苯肼酯與氟啶胺在5個(gè)配比之下均表現(xiàn)出較好的增效作用（表3）。其中，復(fù)配比例為6∶4時(shí)共毒系數(shù)最大，為466.28。其余的增效作用程度依次為7∶3>5∶5>9∶1>8∶2，其共毒系數(shù)分別為410.61、370.22、311.15和275.85。

3?結(jié)論與討論

聯(lián)苯肼酯作為一種常用的殺螨劑被廣泛用于柑橘全爪螨的防控。試驗(yàn)結(jié)果表明，聯(lián)苯肼酯對(duì)柑橘全爪螨有較好的效果，且持續(xù)時(shí)間長，對(duì)環(huán)境安全［21］。而由于柑橘全爪螨具有發(fā)育歷期短、繁殖能力強(qiáng)等生物學(xué)特點(diǎn)，以及聯(lián)苯肼酯不科學(xué)的使用，柑橘全爪螨已對(duì)聯(lián)苯肼酯產(chǎn)生不同程度的抗性［4］。選取不同作用機(jī)理的藥劑與聯(lián)苯肼酯復(fù)配是緩解抗性問題，延長聯(lián)苯肼酯使用壽命的重要手段。根據(jù)中國農(nóng)藥信息網(wǎng)［24］最新統(tǒng)計(jì)，我國目前登記的用于防治害螨的聯(lián)苯肼酯混劑共有78個(gè)，數(shù)量前三是與乙螨唑（44個(gè)）、螺螨酯（14個(gè)）和阿維菌素（6個(gè)）進(jìn)行復(fù)配。

阿維菌素作為高效、廣譜的生物源農(nóng)藥，對(duì)天敵具有一定的選擇性，廣泛用于柑橘害螨的防治［2526］。但長期單一使用容易產(chǎn)生抗藥性，研制其復(fù)配產(chǎn)品不僅提高防治效果，同時(shí)可以延緩抗藥性產(chǎn)生。據(jù)報(bào)道，阿維菌素和噠螨靈、炔螨特等藥劑復(fù)配后對(duì)朱砂葉螨Tetranychus?cinnabarinus毒力顯著提高，共毒系數(shù)可達(dá)582.5和452.6［27］。我國目前登記防治柑橘害螨的聯(lián)苯肼酯與阿維菌素復(fù)配產(chǎn)品共有6個(gè)。本研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)苯肼酯與阿維菌素在19∶1和15∶5兩個(gè)比例下顯示出增效作用，共毒系數(shù)為135.02和158.40，其余比例均為相加作用，因此，聯(lián)苯肼酯與阿維菌素復(fù)配產(chǎn)品研發(fā)時(shí)應(yīng)注意配方。

氟啶胺是一種廣譜性殺菌劑，并且兼有殺螨的效果，目前被廣泛用于草莓灰霉病、小麥赤霉病和馬鈴薯晚疫病等真菌病害的防治［2830］。而氟啶胺在柑橘中應(yīng)用報(bào)道較少，主要是用于防治柑橘黑點(diǎn)病和柑橘全爪螨［31］。本試驗(yàn)研究不同配比下聯(lián)苯肼酯與氟啶胺混劑對(duì)柑橘全爪螨的室內(nèi)毒力，發(fā)現(xiàn)所有配比下均表現(xiàn)出良好的增效作用，最高可達(dá)466.28，需進(jìn)一步研究該配方的劑型加工技術(shù)，最終在田間評(píng)價(jià)其對(duì)柑橘全爪螨的防治效果。

參考文獻(xiàn)

［1］?李隆術(shù)，?朱文炳，?胡國文.?桔全爪螨發(fā)生規(guī)律的初步研究［J］.?植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1980，7（1）：1726.

［2］?劉映紅，?李隆術(shù)，?趙志模.?桔全爪螨與柑桔相互作用的研究［J］.?蛛形學(xué)報(bào)，1995，4（2）：103110.

［3］?HU?Junfeng，?WANG?Changfeng，?WANG?Jun，?et?al.?Monitoring?of?resistance?to?spirodiclofen?and?five?other?acaricides?in?Panonychus?citri?collected?from?Chinese?citrus?orchards?［J］.?Pest?Management?Science，2010，66（9）：10251030.

［4］?袁明龍，?劉永華，?王保軍，?等.?柑橘全爪螨抗藥性研究進(jìn)展［C］∥成卓敏.?糧食安全與植保科技創(chuàng)新.?北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2009：365372.

［5］?黃國洋，?徐展華，?方志剛.?浙江省柑橘全爪螨抗藥性研究［J］.?浙江林學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，16（3）：252259.

［6］?陳達(dá)榮，?鐘捷英，?陳細(xì)生.?福州地區(qū)桔全爪螨對(duì)水胺硫磷抗性測(cè)定［J］.?植物保護(hù)，1990，16（3）：1213.

［7］?PAN?Deng，?DOU?Wei，?YUAN?Guorui，?et?al.?Monitoring?the?resistance?of?the?citrus?red?mite?（Acari：?Tetranychidae）?to?four?acaricides?in?different?citrus?orchards?in?China?［J］.?Journal?of?Economic?Entomology，2020，113（2）：918923.

［8］?VAN?LEEUWEN?T，?VAN?NIEUWENHUYSE?P，?VANHOLME?B，?et?al.?Parallel?evolution?of?cytochrome?b?mediated?bifenazate?resistance?in?the?citrus?red?mite?Panonychus?citri?［J］.?Insect?Molecular?Biology，2011，20（1）：135140.

［9］?DOKER?I，?KAZAK?C.?Detecting?acaricide?resistance?in?Turkish?populations?of?Panonychus?citri?McGregor?（Acari：?Tetranychidae）?［J］.?Systematic?and?Applied?Acarology，2012，17（4）：368377.

［10］GILMORE?J?E，?MUNGER?F.?Stability?of?resistance?to?demeton?and?ovex?in?citrus?red?mite?［J］.?Journal?of?Economic?Entomology，1967，60（1）：5255.

［11］莫建初，?莊佩君，?唐振華.?殺蟲劑輪用和混用對(duì)害蟲種群抗性演化的影響［J］.?昆蟲學(xué)報(bào)，1999，42（4）：337346.

［12］謝道燕，?沈雪鳳，?楊振國，?等.?聯(lián)苯肼酯懸浮劑的殺螨活性測(cè)試及對(duì)家蠶的安全性評(píng)價(jià)［J］.?蠶業(yè)科學(xué)，?2017，43（4）：631637.

［13］VAN?LEEUWEN?T，?TIRRY?L，?NAUEN?R.?Complete?maternal?inheritance?of?bifenazate?resistance?in?Tetranychus?urticae?Koch?（Acari：?Tetranychidae）?and?its?implications?in?mode?of?action?considerations?［J］.?Insect?Biochemistry?and?Molecular?Biology，2006，36（11）：869877.

［14］VAN?LEEUWEN?T，?VONTAS?J，?TSAGKARAKOU?A，?et?al.?Acaricide?resistance?mechanisms?in?the?twospotted?spider?mite?Tetranychus?urticae?and?other?important?Acari：?A?review?［J］.?Insect?Biochemistry?and?Molecular?Biology，2010，40（8）：563572.

［15］KANE?N?S，?HIRSCHBERG?B，?QIAN?S，?et?al.?Drugresistant?Drosophila?indicate?glutamategated?chloride?channels?are?targets?for?the?antiparasitics?nodulisporic?acid?and?ivermectin?［J］.?Proceedings?of?the?National?Academy?of?Sciences?of?the?United?States?of?America，2000，97（25）：1394913954.

［16］張敏恒.?新型高效廣譜殺蟲殺螨劑——阿維菌素［J］.?農(nóng)藥，1998，37（3）：3637.

［17］王彥博，?程曦，?王鄭睿，?等.?7種藥劑對(duì)柑橘全爪螨的室內(nèi)毒力及田間防效［J］.?植物保護(hù)，2019，45（6）：292294.

［18］WANG?Xiaohou，?ZHENG?Shanshan，?HUANG?Tao，?et?al.?Fluazinam?impairs?oxidative?phosphorylation?and?induces?hyper/hypoactivity?in?a?dose?specific?manner?in?zebrafish?larvae?［J］.?Chemosphere，2018，210：633644.

［19］何林，?趙志模，?鄧新平，?等.?朱砂葉螨對(duì)3種殺螨劑的抗性選育及抗性治理研究［J］.?中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，36（4）：403408.

［20］程明明，?成祿艷，?王莉，?等.?乙唑螨腈和腈吡螨酯對(duì)柑橘全爪螨的亞致死效應(yīng)［J］.?果樹學(xué)報(bào)，2021，38（5）：782791.

［21］徐淑，?陳凱歌，?余瑤，?等.?聯(lián)苯肼酯對(duì)柑橘全爪螨的毒力測(cè)定及田間防效［J］.?植物保護(hù)，2014，40（5）：191195.

［22］SUN?Yunpei，?JOHNSON?E?R.?Analysis?of?joint?action?of?insecticides?against?house?flies?［J］.?Journal?of?Economic?Entomology，1960，53（5）：887892.

［23］楊娟生，?叢林，?王翠倫，?等.?亞致死濃度溴蟲腈和毒死蜱對(duì)等鉗蠊螨生長繁殖和解毒酶的影響［J］.?昆蟲學(xué)報(bào)，2020，63（1）：3645.

［24］農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所.?中國農(nóng)藥信息網(wǎng)［DB/OL］.［20230519］.?http：∥www.chinapesticide.org.cn/.

［25］馬海芹，?丁佩.?阿維菌素的研究應(yīng)用、存在問題及對(duì)策［J］.?農(nóng)藥科學(xué)與管理，2009，30（10）：2023.

［26］ISMAIL?T，?KERATUM?A，?ELHETAWY?L.?Formulation?of?abamectin?and?plant?oilbased?nanoemulsions?with?efficacy?against?the?twospotted?spider?mite?Tetranychus?urticae?（Acari：?Tetranychidae）?under?laboratory?and?field?conditions?［J/OL］.?Applied?Biological?Chemistry，2022，65（1）：61.?DOI：?10.1186/s13765022007319.

［27］付志能，?朱秀，?魏敬懷，?等.?阿維菌素與其他3種藥劑復(fù)配對(duì)朱砂葉螨的聯(lián)合作用［J］.?植物保護(hù)，2015，41（1）：196200.

［28］邵莒南，?徐大同，?李慧，?等.?氟啶胺等殺菌劑對(duì)不同發(fā)育階段小麥赤霉病菌的毒力及其作用方式［J］.?植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2016，43（2）：314320.

［29］楊肖芳，?李偉龍，?周曉肖，?等.?氟啶胺對(duì)草莓灰霉病防效及安全性評(píng)價(jià)［J］.?湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，68（12）：6365.

［30］張建新，?姚鳳蘭.?殺菌劑防治馬鈴薯晚疫病田間藥效試驗(yàn)［J］.?農(nóng)藥，2018，57（7）：532535.

［31］張斌，?李偉龍，?吳群，?等.?氟啶胺防治柑橘黑點(diǎn)病效果評(píng)價(jià)［J］.?植物保護(hù)，2020，46（1）：279284.

（責(zé)任編輯：田?喆）