陳秋月 張佳怡 張鵬程 萬欣 鄒定燕 李玥頎 焦曉磊 張崟

摘要：白烏魚是新培育的淡水魚品種，其蛋白肽的功能性有待深入研究。為建立最優(yōu)的制備白烏魚魚肉蛋白肽的水解工藝，為其功能性評價提供參考，以白烏魚魚肉為原料，在比較不同蛋白酶（堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶）對其水解度影響的基礎(chǔ)上，通過單因素實驗和響應(yīng)面法對白烏魚魚肉的酶解工藝進行了優(yōu)化，結(jié)果顯示：堿性蛋白酶水解白烏魚魚肉的水解度最高（29.5%）。以該酶為催化劑，通過單因素實驗（酶解溫度、酶解時間、pH和酶濃度）和響應(yīng)面法得出在酶解溫度55 ℃、酶解時間4.65 h、pH 8.65、酶濃度1.0%時，白烏魚魚肉的水解度最高（39.62%）。以該酶解工藝為條件，驗證實驗的實測水解度為39.87%，與預(yù)測值39.62%的相對誤差為0.63%。因此，所建立的白烏魚魚肉的酶解工藝具有可靠性。

關(guān)鍵詞：白烏魚；多肽；響應(yīng)面法；優(yōu)化；酶解工藝

中圖分類號：TS254.1

文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1000-9973（2024）06-0077-06

Optimization of Enzymatic Hydrolysis Process of Polypeptides from

Opniocepnalus argus var Kimnra

CHEN Qiu-yue^1，2， ZHANG Jia-yi^1，2， ZHANG Peng-cheng^1，2， WAN Xin^1，2，

ZOU Ding-yan^1，2， LI Yue-qi^1，2， JIAO Xiao-lei³， ZHANG Yin^1，2*

（1.Key Laboratory of Meat Processing in Sichuan Province， Chengdu University， Chengdu 610106，

China; 2.College of Food and Bioengineering， Chengdu University， Chengdu 610106， China;

3.Neijiang Academy of Agricultural Sciences in Sichuan Province， Neijiang 641099， China）

Abstract： Opniocepnalus argus var Kimnra is a newly cultivated freshwater fish species， and the functionality of its protein peptides needs to be further explored. In order to establish the optimal hydrolysis process of preparing protein peptides from Opniocepnalus argus var Kimnra and provide references for the evaluation of their functionality， with Opniocepnalus argus var Kimnra as the raw material， on the basis of comparing the effects of different proteases （alkaline protease， trypsin， papain， neutral protease， pepsin） on the degree of hydrolysis （DH）， single factor experiment and response surface method are used to optimize the enzymatic hydrolysis process of Opniocepnalus argus var Kimnra. The results show that alkaline protease has the highest degree of hydrolysis （29.5%）. Using alkaline protease as the catalyst， through single factor experiment （enzymatic hydrolysis temperature， enzymatic hydrolysis time， pH and enzyme concentration） and response surface method， it is found that the degree of hydrolysis of Opniocepnalus argus var Kimnra is the highest （39.62%） when enzymatic hydrolysis temperature is 55 ℃， enzymatic hydrolysis time is 4.65 h， pH is 8.65 and enzyme concentration is 1.0%. Under the conditions of this enzymatic hydrolysis process， the measured degree of hydrolysis in the verification experiment is 39.87%， with the relative error of 0.63% compared to the predicted value of 39.62%. Therefore， the established enzymatic hydrolysis process of Opniocepnalus argus var Kimnra is reliable.

Key words： Opniocepnalus argus var Kimnra; polypeptides; response surface method; optimization; enzymatic hydrolysis process

收稿日期：2023-12-05

基金項目：四川省科技計劃項目（2021YFN0033）；國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系四川創(chuàng)新團隊項目（sccxtd-2023-15）；四川省自然科學(xué)基金項目（2022NSFSC1764）；內(nèi)江市科技項目（2021KJJH008）

作者簡介：陳秋月（1998—），女，碩士，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品加工與保藏。

*通信作者：張崟（1981—），男，教授，博士，研究方向：農(nóng)產(chǎn)品加工與保藏。

白烏魚是2022年被中國漁業(yè)協(xié)會認(rèn)定的淡水魚新品種^[1]，具有高蛋白、低脂肪等特點^[2]，其市場開發(fā)潛力巨大。自從白烏魚新品種獲得認(rèn)定以來，國內(nèi)外學(xué)者對其胴體黏液中耐熱菌種類^[3]、白烏魚黏液中菌種的抗菌活性^[4]、一氧化碳處理對白烏魚魚肉品質(zhì)的影響^[5]等進行了探索，建立了白烏魚方便湯粉^[6]、白烏魚肉松^[7]等產(chǎn)品的制作工藝。但是對白烏魚魚肉酶解液中功能性肽的酶解制備工藝研究較少。坊傳白烏魚魚肉具有催乳、促進傷口愈合等功效^[8]，但是至今沒有可靠的數(shù)據(jù)證明這些功效。

近年來，國內(nèi)外研究人員從魚肉酶解液中分離鑒定出多種功能性肽，馬天新^[9]從烏魚魚肉中發(fā)現(xiàn)了血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶（ACE）抑制肽，Zhang等^[10]從烏魚魚肉中發(fā)現(xiàn)了抗氧化肽，Huang等^[11]從鰱魚魚肉中提取了抗衰老肽，韓貴新等^[12]從雜交鱘魚龍筋中發(fā)現(xiàn)了具有抗腫瘤活性的功能性肽等。因此，白烏魚魚肉多肽可能是其具有催乳、促進傷口愈合等功效的主要原因。本文參照酶解肉類原料制備功能性肽的方法^[13-14]，采用響應(yīng)面法對白烏魚魚肉的酶解工藝進行了優(yōu)化，為評價白烏魚魚肉多肽的功能性奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

白烏魚（1 000～1 500 g/條）：十陵鎮(zhèn)久貿(mào)農(nóng)貿(mào)市場；胰蛋白酶（2 500 U/mg）、中性蛋白酶（100 U/mg）、木瓜蛋白酶（800 U/mg）、堿性蛋白酶（200 U/mg）：上海源葉生物科技有限公司；胃蛋白酶（10 000 U/mg）：山東拓普生物工程有限公司；硫酸銅：江蘇諾泰澳賽諾生物制藥股份有限公司；硫酸鉀：江蘇普樂司生物科技有限公司；濃硫酸、36%～38%甲醛溶液、濃鹽酸：德國科隆公司；氫氧化鈉、百里酚酞、碳酸鈉、碳酸氫鈉：成都市科隆化學(xué)品有限公司。

WP-UPT-20標(biāo)準(zhǔn)型超純水機 四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司；YP30002型電子天平 上海佑科儀器儀表有限公司；KDN-04C型消化爐、KDN-102C型凱氏定氮儀 上海昕瑞儀器儀表有限公司；Scientz-11無菌均質(zhì)機 寧波新芝生物科技股份有限公司；PHS-3G型pH計 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；HH-S6型六孔電熱恒溫水浴鍋 北京科偉永興儀器有限公司；TGL-1650型高速冷凍離心機 四川蜀科儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 白烏魚魚肉蛋白質(zhì)的測定

根據(jù)GB 5009.5—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中蛋白質(zhì)的測定》方法測定白烏魚魚肉中蛋白質(zhì)的含量。

1.2.2 白烏魚魚肉的酶解

將白烏魚宰殺后去皮去骨，切成3 mm×3 mm×2 mm的小塊，將魚塊混勻后稱取20.0 g，加入料液比1∶4（肉∶水）的去離子水，用無菌均質(zhì)機拍打180 s。將料液調(diào)節(jié)至適當(dāng)pH后，加入適量的酶制劑酶解，反應(yīng)結(jié)束后于90 ℃水浴加熱10 min滅酶，待冷卻到室溫時，過濾除去殘渣，將濾液在4 ℃、10 000 r/min條件下離心10 min，取上清液即為酶解液。

1.2.3 蛋白酶的篩選

選擇5種不同種類的蛋白酶（中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶），參照各種酶的指導(dǎo)性水解條件對白烏魚魚肉進行酶解，具體酶解條件見表1。

1.2.4 單因素實驗

在1.2.3的基礎(chǔ)上，以堿性蛋白酶為酶制劑，在料液比為1∶4的條件下，分別對酶解溫度、酶解時間、pH及酶濃度進行單因素實驗，具體酶解條件如下。

1.2.4.1 酶解溫度

根據(jù)堿性蛋白酶的指導(dǎo)性水解條件，在固定酶解時間為4 h、pH為8、酶濃度為0.6%的條件下，在45，50，55，60，65 ℃的酶解溫度下，分析酶解溫度對白烏魚魚肉水解度的影響。

1.2.4.2 酶解時間

以1.2.4.1確定的最佳酶解溫度為條件，在固定pH為8、酶濃度為0.6%的條件下，在2，3，4，4.5，5，5.5，6 h的酶解時間下，分析酶解時間對白烏魚魚肉水解度的影響。

1.2.4.3 pH

以1.2.4.1和1.2.4.2確定的最佳酶解溫度和酶解時間為條件，在固定酶濃度為0.6%的條件下，在6，7，8，9，10的pH下，分析pH對白烏魚魚肉水解度的影響。

1.2.4.4 酶濃度

以1.2.4.1、1.2.4.2和1.2.4.3確定的最佳酶解溫度、酶解時間和pH為條件，在0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%的酶濃度下，分析酶濃度對白烏魚魚肉水解度的影響。

1.2.5 響應(yīng)面實驗設(shè)計

在單因素實驗的基礎(chǔ)上，以酶解溫度（A）、酶解時間（B）、pH（C）、酶濃度（D）4個因素進行響應(yīng)面實驗設(shè)計，以水解度（DH）為響應(yīng)值，采用1中心、4因素、5水平、30次實驗的響應(yīng)面實驗方案，分析酶解條件對白烏魚魚肉水解度的影響。響應(yīng)面實驗因素水平表見表2。

1.2.6 水解度的測定

參考鄒澤斌等^[15]的方法，使用緩沖溶液將酶解待測液的pH調(diào)節(jié)至7.0，將待測溶液定容至100 mL，吸取待測溶液20 mL至250 mL的錐形瓶中，加入5 mL甲醛溶液及2～3滴0.5%的酚酞溶液，并在室溫下放置5 min，然后用0.1 mol/L標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液滴定至終點。NaOH的體積用于計算游離氨基酸的量。水解度計算公式如下：

水解度（%）=游離氨基酸量（mg/g）總氮量（mg/g）×100%。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 24.0、Excel 2016對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析和繪圖；采用Design-Expert 12.0設(shè)計響應(yīng)面實驗方案，并分析數(shù)據(jù)的顯著性和繪制響應(yīng)面圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 蛋白酶種類對水解度的影響對比

為了篩選對白烏魚魚肉具有較高酶解效率的蛋白酶，本實驗選取堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶對白烏魚魚肉蛋白進行水解，所得水解度見圖1。

由圖1可知，這5種蛋白酶對白烏魚魚肉的水解效率差異顯著（P<0.05），水解度從大到小的順序為堿性蛋白酶＞木瓜蛋白酶＞中性蛋白酶＞胰蛋白酶＞胃蛋白酶。因此，根據(jù)水解度選擇堿性蛋白酶為催化劑，用于水解白烏魚魚肉并制備多肽。

堿性蛋白酶是一種絲氨酸內(nèi)切酶^[16]；胃蛋白酶有利于共價連接在絲氨酸上的磷酸基團^[17]；胰蛋白酶主要作用位點為賴氨酸和精氨酸的羧基側(cè)^[18]；木瓜蛋白酶則是一種半胱氨酸內(nèi)切酶^[19]。白烏魚魚肉蛋白中絲氨酸含量較高，而堿性蛋白酶的活性中心為絲氨酸，因此堿性蛋白酶作用于白烏魚魚肉，能夠更有效釋放生物活性肽^[16]。這些酶特性的差異可能是導(dǎo)致其對白烏魚魚肉水解度不同的主要原因。

2.2 單因素實驗

2.2.1 酶解溫度

由圖2可知，白烏魚魚肉蛋白的水解度隨著酶解溫度的增加呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。在55 ℃時，水解度最高，55 ℃后水解度顯著下降（P＜0.05），這可能是溫度破壞了酶內(nèi)部結(jié)構(gòu)，酶活性下降，酶對白烏魚魚肉蛋白的酶解效果降低所致。酶解溫度低于55 ℃時，堿性蛋白酶活性未達到最佳，這可能是導(dǎo)致白烏魚魚肉水解度較低的主要原因。

寧詩文等^[20]在采用堿性蛋白酶對大黃花魚肉進行水解時得出類似的實驗結(jié)果。蛋白酶的活性受水解溫度的影響很大，只有在一定的溫度范圍內(nèi)，酶保持最佳活性，才能夠達到最大酶解效率。55 ℃時堿性蛋白酶的活性最高，這可能是55 ℃時白烏魚魚肉水解度最高的主要原因。因此，選擇45～65 ℃作為響應(yīng)面設(shè)計時的溫度限值。

2.2.2 酶解時間

在2.2.1中確定的最適酶解溫度條件下，對酶解時間對白烏魚魚肉水解度的影響進行實驗，所得結(jié)果見圖3。

由圖3可知，白烏魚魚肉的水解度隨著酶解時間的增加呈現(xiàn)顯著上升的趨勢（P＜0.05），在5 h時水解度達到峰值，之后水解度略有下降。堿性蛋白酶主要影響連接絲氨酸的肽鍵，當(dāng)酶解達到一定程度時，堿性蛋白酶切割位點達到飽和^[21]，這可能是隨著酶解時間的延長，白烏魚魚肉蛋白水解程度不再增加的主要原因。因此，選擇3.35～5.95 h作為響應(yīng)面設(shè)計時的時間限值。

2.2.3 pH

pH對白烏魚魚肉水解度的影響見圖4。

由圖4可知，隨著pH從6增加到9，水解度從27.73%增加至31.47%，此時白烏魚魚肉的水解度最大，顯著高于其他pH時的水解度（P＜0.05）。當(dāng)pH繼續(xù)增加時，水解度顯著下降（P＜0.05）。堿性蛋白酶的最佳pH范圍為8.5～9.5，在此pH范圍時其酶活性較高。當(dāng)pH超過9.5時，反應(yīng)環(huán)境會抑制堿性蛋白酶的活性，水解度降低^[22]，這可能是pH為9時白烏魚魚肉的水解度最高的主要原因。因此，選擇pH 7.35～9.95作為響應(yīng)面設(shè)計時的pH限值。

2.2.4 酶濃度

酶濃度對白烏魚魚肉水解度的影響見圖5。

由圖5可知，隨著酶濃度的增加，白烏魚魚肉的水解度逐漸增加，在酶濃度為1.0%時，白烏魚魚肉的水解度達到峰值。隨著酶濃度的繼續(xù)增加，白烏魚魚肉蛋白的水解度趨于穩(wěn)定。底物濃度和酶濃度之間具有匹配性^[23-24]，在底物濃度確定的條件下（1.2.4.4），再高的酶濃度也不能催化底物更多地水解，這可能是當(dāng)酶濃度超過1.0%時水解度趨于平緩的主要原因。因此，選擇酶濃度0.6%～1.4%作為響應(yīng)面設(shè)計時的酶濃度限值。

2.3 響應(yīng)面實驗結(jié)果

根據(jù)圖2～圖5的實驗結(jié)果，以酶解溫度（A）45～65 ℃、酶解時間（B）3.35～5.95 h、pH（C）7.35～9.95、酶濃度（D）0.6%～1.4%為響應(yīng)限值，設(shè)計四因素五水平的響應(yīng)面實驗方案。響應(yīng)面實驗設(shè)計和結(jié)果、實測水解度（Y_1實測）和預(yù)測水解度（Y_1預(yù)測）以及實測水解度與預(yù)測水解度的相對誤差見表3。

由表3可知預(yù)測水解度和實測水解度的相對誤差值，有20組（67.7%）的相對誤差小于5%，有25組（83.3%）的相對誤差小于10%。由此可見，所建立的各酶解因素與水解度之間的擬合模型能夠較準(zhǔn)確地預(yù)測水解度。為了進一步分析所建立模型的可靠性，對擬合模型的顯著性進行了分析。

2.4 擬合顯著性分析

對各反應(yīng)條件與水解度的擬合方差和顯著性分析見表4。

由表4可知，模型的P＜0.000 1，表明該擬合模型極顯著，由失擬項的P＞0.05可知，所建立的白烏魚魚肉的酶解條件與水解度間的擬合模型具有顯著性。

由表4中一次項A、B、C、D的P值大小順序D＞B＞A＞C可知，對白烏魚魚肉酶解工藝的影響程度為pH（C）＞酶解溫度（A）＞酶解時間（B）＞酶濃度（D）。因此，在采用堿性蛋白酶水解白烏魚魚肉制備多肽時，應(yīng)重點控制pH。

白烏魚魚肉蛋白水解度與各因素的響應(yīng)面圖見圖6。比較圖6中水解度與各因素的變化幅度可知，在其他條件確定的情況下，水解度隨著pH的變化而變化的幅度最大，這也進一步證明了pH是影響白烏魚魚肉酶解制備多肽的關(guān)鍵因素，應(yīng)重點控制。

2.5 擬合方程的可靠性驗證

為了進一步驗證所建立擬合模型的可靠性，以酶解溫度55 ℃、酶解時間4.65 h、pH 8.65、酶濃度1.0%為水解條件，對白烏魚魚肉的水解度進行測定，所得結(jié)果為（39.87±0.63）%。該值與預(yù)測值39.62%的相對誤差為0.63%（<5%）。因此，所建立的最優(yōu)酶解工藝具有較好的可靠性。

3 結(jié)論

通過對比堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶對白烏魚魚肉水解度的影響，發(fā)現(xiàn)堿性蛋白酶對白烏魚魚肉蛋白的水解效果顯著優(yōu)于其他4種蛋白酶（P<0.05）。以堿性蛋白酶為催化劑，在單因素實驗的基礎(chǔ)上，通過響應(yīng)面實驗得出：當(dāng)酶解溫度為55 ℃、酶解時間為4.65 h、pH為8.65、酶濃度為1.0%時，白烏魚魚肉的水解度最高（39.62%）。驗證實驗結(jié)果顯示：所得預(yù)測值39.62%與實測值的相對誤差為0.63%（<5%）。因此，白烏魚魚肉的最優(yōu)水解工藝為酶解溫度55 ℃、酶解時間4.65 h、pH 8.65、酶濃度1.0%。

參考文獻：

[1]肖堯，張如義，蘇圣淞，等.緊扣現(xiàn)代農(nóng)業(yè)特色優(yōu)勢，打造丘區(qū)農(nóng)業(yè)種業(yè)強市——四川省內(nèi)江市農(nóng)業(yè)科學(xué)院加快推進種業(yè)振興的實踐與思考[J].農(nóng)村經(jīng)濟與科技，2022，33（14）：81-83.

[2]周愛國.白甲烏鱧種質(zhì)分析、白化特征機理及其熱休克蛋白基因的研究[D].廣州：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017.

[3]張龍翼，張崟，陳平平，等.白烏魚胴體粘液中耐熱菌的耐熱性及特征菌種鑒定[J].現(xiàn)代食品科技，2018，34（11）：77-82.

[4]張龍翼，陳平平，王林果，等.白烏魚胴體黏液抗菌活性分析[J].成都大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2018，37（2）：155-158.

[5]張龍翼，張崟，張鵬程，等.冷藏過程中一氧化碳對白烏魚肉品質(zhì)的影響[J].現(xiàn)代食品科技，2019，35（3）：95-100.

[6]焦曉磊，王林果，母運龍，等.白烏魚方便湯粉的工業(yè)化鼓風(fēng)干燥工藝[J].食品工業(yè)，2023，44（2）：107-112.

[7]蔣麗施，舒春霞，徐遠行，等.白烏魚風(fēng)味魚肉松加工工藝研究[J].中國調(diào)味品，2022，47（7）：109-113.

[8]韓旭，彭海川，白婷，等.蒸煮和油炸對魚肉蛋白質(zhì)營養(yǎng)和風(fēng)味的影響[J].成都大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2021，40（3）：247-255.

[9]馬天新.黑魚魚肉ACE抑制肽的制備及快速篩選[D].南昌：江西師范大學(xué)，2022.

[10]ZHANG J， LI M， ZHANG G N， et al. Identification of novel antioxidant peptides from snakehead （Channa argus） soup generated during gastrointestinal digestion and insights into the anti-oxidation mechanisms[J].Food Chemistry，2021，337：127921.

[11]HUANG J J， LI H L， XIONG G Q， et al. Extraction， identification and anti-photoaging activity evaluation of collagen peptides from silver carp （Hypophthalmichthys molitrix） skin[J].LWT-Food Science and Technology，2023，173：114384.

[12]韓貴新，汪金林，李鈺金，等.雜交鱘魚（Acipenseridae）龍筋中活性肽的分離、鑒定和抗癌機制[C]//中國食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會第十九屆年會論文摘要集，2022.

[13]ZHANG Y， ZHANG L Y， VENKITASAMY C， et al. Improving the flavor of microbone meal with flavourzyme by response surface method[J].Journal of Food Process Engineering，2019，42（4）：13040-13041.

[14]ZHNAG Y， KE H， BAI T， et al. Characterization of umami compounds in bone meal hydrolysate[J].Journal of Food Science，2021，86（6）：2264-2275.

[15]鄒澤斌，賴玉健，梁杉，等.響應(yīng)面優(yōu)化黃魚膠酶解工藝及其基本成分分析[J].食品科技，2022，47（4）：152-160.

[16]TACIAS-PASCACIO V G， MORELLON-STERLING R， EL-HOCINE S， et al. Use of alcalase in the production of bioactive peptides： a review[J].International Journal of Biological Macromolecules，2020，165：2143-2196.

[17]DANIEL C， BERENGUER-MURCIA ?， FERNANDEZ-LAFUENTE R， et al. Biological activities of peptides obtained by pepsin hydrolysis of fishery products[J].Process Biochemistry，2022，120：53-63.

[18]MIKHAIL S， KASHINSKAYA E， GISBERT E. A meta-analysis for assessing the contributions of trypsin and chymotrypsin as the two major endoproteases in protein hydrolysis in fish intestine[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part A： Molecular & Integrative Physiology，2023，278：111372.

[19]TACIAS-PASCACIO V G， CASTA?EDA-VALBUENA D， MORELLON-STERLING R， et al. Bioactive peptides from fisheries residues： a review of use of papain in proteolysis reactions[J].International Journal of Biological Macromolecules，2021，184：415-428.

[20]寧詩文，崔珊珊，尚宏麗.響應(yīng)面法優(yōu)化大黃花魚肉蛋白水解工藝及多肽抗氧化性研究[J].食品工業(yè)科技，2020，41（13）：219-226.

[21]CAO M D， LI W H， LI H， et al. Antioxidant and ACE inhibitory activities of peptides prepared from adzuki bean by semi-solid enzymatic hydrolysis[J].Food Bioscience，2022，47（3）：253-261.

[22]YANG L H， GUO Z L， WEI J Q， et al. Extraction of low molecular weight peptides from bovine bone using ultrasound-assisted double enzyme hydrolysis： impact on the antioxidant activities of the extracted peptides[J].LWT-Food Science and Technology，2021，146：111470.

[23]侯小楨，張伊敏，林群超，等.響應(yīng)面法優(yōu)化毛蝦酶解工藝條件[J].韓山師范學(xué)院學(xué)報，2020，41（3）：61-69.

[24]燕瑜翰，盧靜靜.響應(yīng)面法優(yōu)化克氏原螯蝦蝦頭酶解工藝研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2022（24）：20-22.