仁青加

DOI： 10.3969/j.issn.1003-1650.2024.18.033

瑪多縣位于我國(guó)青藏高原地區(qū)，是一個(gè)以畜牧業(yè)為主的縣份?，敹嗫h的自然環(huán)境適宜發(fā)展畜牧業(yè)，特別是牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)。目前，瑪多縣的牛養(yǎng)殖規(guī)模較大，養(yǎng)殖品種以牦牛為主。為更好推動(dòng)牛養(yǎng)殖業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展，當(dāng)?shù)卣块T實(shí)施一系列政策和支持措施。在政府政策的引導(dǎo)下，當(dāng)?shù)啬撩穹e極參與養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展，養(yǎng)殖技術(shù)不斷提高，牛肉、奶制品等產(chǎn)品市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力逐步增強(qiáng)。當(dāng)前所在地區(qū)的牛養(yǎng)殖規(guī)模逐年擴(kuò)大，牦牛存欄量較高。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，瑪多縣牦牛存欄量超過(guò)10萬(wàn)頭。養(yǎng)殖規(guī)模擴(kuò)大背景之下，管理期間所存在的諸多問(wèn)題日益凸顯出來(lái)，其中傳染性疾病高發(fā)的問(wèn)題十分嚴(yán)重。在牛的多種傳染性疾病當(dāng)中，副結(jié)核病是一種發(fā)病周期長(zhǎng)，初期癥狀不顯著的接觸性傳染性疾病。該種疾病是由副結(jié)核分歧桿菌感染引起的慢性肉芽腫性腸炎流行性疾病，由于病原血清型相對(duì)較多，并且可以相互感染，增加了疾病的防控難度，再加上現(xiàn)階段牛副結(jié)核病沒(méi)有特效藥，只能夠通過(guò)加強(qiáng)養(yǎng)殖管理進(jìn)行針對(duì)性的防控。所以就需要積極引導(dǎo)牧區(qū)農(nóng)牧民群眾對(duì)牛副結(jié)核病防控的重視程度，明確該種疾病的流行特點(diǎn)和診斷方法，提前采取措施進(jìn)行有效防控，將牛副結(jié)核病的發(fā)生流行率降低到最低程度。本次研究探討了牛副結(jié)核病的診斷與防控措施，希望為廣大同行提供一定的參考。

一、流行病學(xué)

1、病原學(xué)

牛副結(jié)核病是由副結(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性傳染性疾病，主要影響牛，也可能感染其他家畜如綿羊、山羊等。副結(jié)核分枝桿菌屬于分枝桿菌屬，該屬還包括其他多種病原菌，如結(jié)核分枝桿菌等。副結(jié)核分枝桿菌具有多種血清型，目前已知的血清型有1至7型，其中血清型1和3最為常見(jiàn)，不同血清型之間存在抗原差異，對(duì)疫苗研制和診斷方法有一定影響。副結(jié)核分枝桿菌為革蘭氏陽(yáng)性桿菌，形態(tài)呈短桿狀，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜，菌體大小約為0.5～1.0μm×2～4μm，在顯微鏡下觀察，菌體排列緊密，有時(shí)呈鏈狀。該種細(xì)菌對(duì)外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)，能在污染的牧場(chǎng)、草料和水源中存活較長(zhǎng)時(shí)間。在土壤中，該菌可存活數(shù)月至一年。對(duì)消毒藥劑的抵抗力較強(qiáng)，但高溫較易殺死該菌。同時(shí)，副結(jié)核分枝桿菌具有抗酸性染色特性，因此在染色過(guò)程中，菌體呈紅色。此外，該菌對(duì)氧化酶、硝酸還原酶和脲酶等試驗(yàn)呈陽(yáng)性。

2、致病機(jī)理

副結(jié)核分枝桿菌通過(guò)牛的消化道進(jìn)入體內(nèi)，主要侵犯腸道黏膜和淋巴組織，細(xì)菌在腸道黏膜上皮細(xì)胞中繁殖，引起炎癥反應(yīng)。進(jìn)入機(jī)體之后，線圈可以借助自身具有抵抗宿主免疫監(jiān)視的能力，細(xì)菌繁殖復(fù)制過(guò)程中能夠分泌出大量的脂多糖等物質(zhì)，抑制巨噬細(xì)胞的吞噬功能，從而逃避免疫清除。副結(jié)核分枝桿菌在腸道黏膜和淋巴組織中形成肉芽腫，肉芽腫中心干酪樣壞死，周圍有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，這種病變導(dǎo)致腸道功能受損，病牛出現(xiàn)慢性腹瀉、漸進(jìn)性消瘦等癥狀。同時(shí)，副結(jié)核分枝桿菌感染導(dǎo)致腸道黏膜屏障功能受損，細(xì)菌及其毒素易于進(jìn)入宿主血液循環(huán)，進(jìn)一步損害其他器官和組織。隨著體內(nèi)細(xì)菌繁殖，數(shù)量的逐漸增加，副結(jié)核分枝桿菌可隨血液傳播到其他器官，如肝臟、腎臟、肺臟等，導(dǎo)致多器官損傷。

3、流行特點(diǎn)

牛副結(jié)核病的傳染源主要是病牛，病牛在患病期間，從糞便、乳汁、尿液等排出副結(jié)核分枝桿菌，成為傳播病原的主要來(lái)源。從傳播途徑來(lái)看，該種細(xì)菌主要包括了直接接觸傳播（病牛與健康牛直接接觸，通過(guò)口腔、鼻腔、眼睛等途徑傳播病原。）、間接接觸傳播（病牛污染的飼料、飲水、牧場(chǎng)、工具等物品，健康牛在接觸這些物品后再通過(guò)口腔、鼻腔、眼睛等途徑感染病原。）和空氣傳播（病?？人浴娞绲确绞结尫诺暮胁≡娘w沫，健康牛吸入后感染。）三種渠道。細(xì)菌對(duì)牛具有較強(qiáng)的親嗜性，主要感染牛尤其是奶牛，同時(shí)也可見(jiàn)于綿羊、山羊、豬、馬、駱駝和鹿等動(dòng)物，犢牛最易感染，且感染后病程較長(zhǎng)。在很多養(yǎng)殖場(chǎng)中牛副結(jié)核病呈散發(fā)或地方性流行，無(wú)明顯季節(jié)性，但在環(huán)境衛(wèi)生條件差、飼養(yǎng)密度高、管理水平低的養(yǎng)殖場(chǎng)，疾病更容易傳播。

二、臨床癥狀

牛副結(jié)核病的潛伏期較長(zhǎng)，一般為6個(gè)月至15年，甚至更長(zhǎng)。除去感染副結(jié)核分枝桿菌后，病牛在一段時(shí)間內(nèi)可能無(wú)明顯癥狀，部分病牛僅表現(xiàn)出食欲不振、體重減輕、精神不振等非特異性癥狀。大多數(shù)患病牛的病程呈慢性經(jīng)過(guò)，隨后病牛出現(xiàn)進(jìn)行性消瘦、腹瀉、呼吸困難、體溫正常等癥狀，因病菌侵入機(jī)體后，毒力、機(jī)體抵抗力和受害器官的不同，癥狀也有所差異。當(dāng)出現(xiàn)典型臨床癥狀之后，患病牛主要表現(xiàn)出腹瀉、糞便帶血、腹痛、食欲不振，漸進(jìn)性消瘦、乏力、精神不振、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，咳嗽、呼吸困難、體溫正常，腹股溝淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)等部位腫大。病程后期，病?？赡艹霈F(xiàn)其他器官的并發(fā)癥，如肝、腎、肺等部位的結(jié)核病變，從而導(dǎo)致相應(yīng)器官功能損害的癥狀。

三、病理學(xué)變化

牛副結(jié)核病病理學(xué)變化主要表現(xiàn)為慢性增生性腸炎，病變位置主要集中在消化道，尤其是腸道。病死牛解剖之后可以發(fā)現(xiàn)病變主要發(fā)生在小腸，尤其是回腸段。腸道黏膜明顯增厚，形成腦回狀外觀，這是由于黏膜上皮細(xì)胞增生和腺體分泌增加所致。腸道內(nèi)容物呈暗紅褐色稀粥狀，具有腥臭味，腸道系膜淋巴結(jié)腫大，表面呈灰白色，切面多汁。腸系膜淋巴結(jié)腫大，呈樹枝狀淤血，皮質(zhì)部與髓質(zhì)部界限模糊。部分病死牛的心臟、肝臟、脾臟和腎臟等器官無(wú)明顯變化，但有時(shí)可見(jiàn)心肌脂肪膠樣萎縮，肝脾腫大。病牛體質(zhì)消瘦，被毛粗硬，鞏膜呈樹枝狀充血，步態(tài)不穩(wěn)，精神沉郁，眼窩下陷，鼻鏡干燥。

四、實(shí)驗(yàn)室診斷

1、提純副結(jié)核菌素注射試驗(yàn)

試驗(yàn)之前應(yīng)該對(duì)患病牛進(jìn)行剪毛處理，在頸側(cè)中部上1/3處剪毛（或提前一天剃毛），并準(zhǔn)備好酒精棉、卡尺、1～2.5mL注射器、針頭、牛型提純副結(jié)核菌素。選擇頸側(cè)中部上1/3處作為注射部位，用1～2.5mL注射器抽取適量提純副結(jié)核菌素（一般為0.1mL），緩慢注射到剪毛后的頸側(cè)中部上1/3處，注射深度約2～3mm，注射完畢后，局部皮膚呈現(xiàn)半球形隆起。注射后24～72小時(shí)，觀察注射部位的反應(yīng)程度，在對(duì)照組注射生理鹽水的部位無(wú)明顯反應(yīng)的基礎(chǔ)上來(lái)判定，注射提純副結(jié)核菌素的情況，如果發(fā)現(xiàn)注射部位出現(xiàn)紅腫、硬結(jié)等炎癥反應(yīng)，且硬結(jié)直徑大于5mm，這表示患病牛感染了結(jié)核分枝桿菌。如果注射部位無(wú)明顯炎癥反應(yīng)，硬結(jié)直徑小于5mm，這表示未感染結(jié)核分枝桿菌。

2、副結(jié)核補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

牛副結(jié)核病補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是基于抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的原理，通過(guò)檢測(cè)血清中的抗體水平來(lái)判斷牛是否感染了副結(jié)核病。試驗(yàn)中，待檢血清與副結(jié)核抗原進(jìn)行反應(yīng)，如果血清中含有針對(duì)副結(jié)核抗原的抗體，則會(huì)形成補(bǔ)體結(jié)合物，從而表現(xiàn)出特定的顏色變化。在操作過(guò)程中，首先，取待檢血清、參考陽(yáng)性血清、參考陰性血清各0.10mL，加生理鹽水0.80mL，加肺結(jié)核分枝桿菌稀釋抗原0.10mL，混勻，37℃作用1小時(shí)。以抗原稀釋液將副結(jié)核親和層析抗原稀釋至50g/mL，每孔包被0.1mL，部分對(duì)照孔以牛血清白蛋白（50g/mL）包被。將處理后的血清樣本分別加入抗原包被的孔中，37℃孵育1小時(shí)，然后洗滌去除未結(jié)合的血清成分。每孔加入酶標(biāo)二抗（抗牛IgG）0.1mL，37℃孵育1小時(shí)，再次洗滌去除未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。每孔加入底物A（HRP）和底物B（鄰苯二胺），37℃孵育10分鐘，其間觀察孔顏色變化，然后加入終止液（硫酸），終止底物顯色反應(yīng)，觀察各孔顏色變化，計(jì)算陽(yáng)性反應(yīng)孔的OD值，根據(jù)OD值判斷血清樣本是否為陽(yáng)性。待檢血清孔的OD值大于或等于陰性對(duì)照孔的OD值的兩倍，判斷為陽(yáng)性，待檢血清孔的OD值小于陰性對(duì)照孔的OD值，判斷為陰性。如果待檢血清孔的OD值在陰性對(duì)照孔OD值的一倍和兩倍之間，判斷為可疑陽(yáng)性?？梢申?yáng)性樣本需重新進(jìn)行試驗(yàn)，如結(jié)果仍為可疑陽(yáng)性，則判定為陽(yáng)性。

五、疫情處理

牛副結(jié)核病目前沒(méi)有針對(duì)性的治療藥物，選擇使用止瀉的藥物，一般能夠使患病牛的臨床癥狀得到改善，但是停藥之后又會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)，藥物治療效果相對(duì)較差，所以針對(duì)該種疾病通常不需要進(jìn)行治療，要及時(shí)將檢測(cè)為陽(yáng)性的牛立即淘汰處理。同時(shí)與患病牛接觸的危險(xiǎn)牛也需要進(jìn)行針對(duì)性的血清檢測(cè)，檢測(cè)出隱性帶菌牛之后應(yīng)該立即淘汰，將檢測(cè)為陰性的牛群作為假定健康牛群，每年至少進(jìn)行3次的變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，3次變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)全部為陰性的牛群才允許出場(chǎng)或者重新調(diào)整群體結(jié)構(gòu)。對(duì)于養(yǎng)殖場(chǎng)檢測(cè)為陽(yáng)性的待產(chǎn)母牛應(yīng)該在嚴(yán)格隔離條件下，在其產(chǎn)犢3天之后進(jìn)行淘汰處理，同時(shí)要對(duì)其生產(chǎn)的犢牛進(jìn)行持續(xù)性的血清檢測(cè)，連續(xù)三次檢測(cè)為陰性的犢?？梢灾苯舆M(jìn)行育肥快速出場(chǎng)，并且在哺乳階段應(yīng)該向犢牛投喂經(jīng)過(guò)高溫消毒冷卻后的乳汁。養(yǎng)殖場(chǎng)變態(tài)反應(yīng)檢測(cè)為疑似的牛群應(yīng)該注重做好標(biāo)記，檢測(cè)15～30天之后再進(jìn)行第2次檢測(cè)，對(duì)連續(xù)3次檢測(cè)都為疑似反應(yīng)的牛，可以作為陽(yáng)性牛進(jìn)行撲殺無(wú)害化處理。

六、預(yù)防措施

1、關(guān)于疫苗免疫接種的探討

目前針對(duì)牛副結(jié)核病，國(guó)外市場(chǎng)已經(jīng)推出了相應(yīng)的商品化疫苗，包括了弱毒疫苗和滅活疫苗，英國(guó)地區(qū)在進(jìn)行疫苗免疫接種過(guò)程中推薦采用弱毒活疫苗，而美國(guó)地區(qū)主要選擇使用滅活疫苗，但瑞典等國(guó)家禁止采用副結(jié)核疫苗免疫接種，這主要是因?yàn)橛行┡Ｈ涸诮?jīng)過(guò)疫苗免疫接種時(shí)候，其注射部位會(huì)出現(xiàn)肉芽腫，經(jīng)常會(huì)給結(jié)核病的診斷帶來(lái)一定干擾。我國(guó)目前沒(méi)有商品化的副結(jié)核病疫苗上市銷售，所以開展疫苗免疫接種還不現(xiàn)實(shí)，在牛副結(jié)核病防控過(guò)程中，仍然需要通過(guò)加強(qiáng)環(huán)境清理衛(wèi)生消毒和科學(xué)管理等幾方面入手，將副結(jié)核病的發(fā)生流行率降低到最低程度。

2、規(guī)范引種行為

牛養(yǎng)殖場(chǎng)在對(duì)外引種時(shí)，需要遵循的國(guó)家法律標(biāo)準(zhǔn)主要包括《動(dòng)物防疫法》《畜牧法》以及《畜禽遺傳資源保護(hù)條例》等。引種前養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)具備相應(yīng)的設(shè)施設(shè)備，確保能滿足引種動(dòng)物的生活需求和防疫要求，養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部建立完善的防疫制度，包括疫病監(jiān)測(cè)、消毒等措施。引種動(dòng)物應(yīng)來(lái)自無(wú)疫病區(qū)或疫病控制良好的地區(qū)，同時(shí)還需要選擇具有良好遺傳背景、生產(chǎn)性能優(yōu)良的種牛。在引種前還需要詳細(xì)地辦理引種審批手續(xù)，注重向引種當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)主管部門提出引種申請(qǐng)，提供相關(guān)資料，如種牛場(chǎng)資質(zhì)證明、引種計(jì)劃等，畜牧獸醫(yī)主管部門審核通過(guò)后，發(fā)放引種許可證。運(yùn)輸工具應(yīng)進(jìn)行消毒處理，確保無(wú)菌蟲害，引種動(dòng)物在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)做好防疫、保溫和通風(fēng)等措施，確保動(dòng)物健康狀況。引種動(dòng)物到達(dá)養(yǎng)殖場(chǎng)后，需進(jìn)行為期14天的隔離觀察期，觀察期內(nèi)，獸醫(yī)人員需每日檢查動(dòng)物的健康狀況，發(fā)現(xiàn)異常及時(shí)處理。檢疫合格后養(yǎng)殖場(chǎng)需按照《動(dòng)物防疫法》等相關(guān)法規(guī)，對(duì)引種動(dòng)物進(jìn)行定期疫病監(jiān)測(cè)、疫苗接種和消毒等工作，并建立養(yǎng)殖檔案，詳細(xì)記錄動(dòng)物來(lái)源、疫苗接種、疫病監(jiān)測(cè)等信息。

3、堅(jiān)持全進(jìn)全出和科學(xué)分群的養(yǎng)殖方式

全進(jìn)全出制度指的是在同一時(shí)間內(nèi)，所有的牛只都是同一年齡段，它們一同進(jìn)場(chǎng)生長(zhǎng)到一定程度后一同出場(chǎng)。這樣的管理方式有助于防止疾病在不同年齡段牛只之間傳播，同時(shí)也便于對(duì)牲畜進(jìn)行統(tǒng)一的疫苗接種和健康管理。科學(xué)分群則是指根據(jù)牛只的年齡、生產(chǎn)階段以及健康狀況將牛群分成不同的小組，這樣可以確保每個(gè)群體都能獲得適合其狀況的飼養(yǎng)和醫(yī)療條件，進(jìn)一步減少疾病的傳播和發(fā)生。此外，養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)實(shí)施定期的健康監(jiān)測(cè)制度，包括對(duì)牛只進(jìn)行體溫測(cè)量、血液檢測(cè)和病原體檢測(cè)等。通過(guò)這些措施，可以早期發(fā)現(xiàn)患病或者易感染的牛只，及時(shí)隔離治療，避免病情的蔓延。同時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)飼養(yǎng)人員的培訓(xùn)，提高他們對(duì)牛副結(jié)核病的認(rèn)識(shí)和防控能力，確保他們?cè)谌粘９ぷ髦心軌驀?yán)格執(zhí)行各項(xiàng)生物安全措施。另外，飼料和水源的安全同樣重要，應(yīng)保證飼料的質(zhì)量，防止受到污染，定期對(duì)飼料進(jìn)行檢測(cè)，確保不含有病原體。

4、加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生消毒

牛副結(jié)核病防控期間需要執(zhí)行嚴(yán)格的衛(wèi)生消毒方案，減少環(huán)境當(dāng)中的病原數(shù)量，防范該種疾病在養(yǎng)殖場(chǎng)中大范圍傳播流行。一般情況下應(yīng)該選擇具有殺菌、消毒作用的消毒劑。常用的消毒劑有5%～10%的熱堿水、3%～5%的來(lái)蘇水、20%生石灰乳。其中5%～10%的氫氧化鈉適用于牛舍地面、糞尿溝等消毒，噴霧消毒。3%～5%來(lái)蘇水主要用于飼養(yǎng)用具、牛欄、牛床等消毒，噴霧消毒，20%生石灰乳適用于涂墻消毒。在消毒處理過(guò)程中應(yīng)該將消毒劑與水按適當(dāng)比例混合，噴灑在牛舍、牛欄、牛床等需要消毒的部位。噴霧時(shí)應(yīng)保證消毒劑與表面充分接觸，以提高消毒效果?；蛘邔曫B(yǎng)用具等物品浸泡在消毒液中，確保物品表面充分接觸消毒劑。浸泡時(shí)間根據(jù)消毒劑的性質(zhì)和物品的材質(zhì)而定。消毒期間還需要結(jié)合疫情防控需要，制定合理的消毒周期。一般情況下，牛舍地面和糞尿溝每周消毒1次，飼養(yǎng)用具、牛欄、牛床等每周進(jìn)行1～2次消毒，在疫病暴發(fā)期間，消毒頻率應(yīng)適當(dāng)增加。消毒結(jié)束之后，應(yīng)該制定相應(yīng)的消毒檔案，詳細(xì)記錄消毒日期、消毒劑種類、消毒部位、消毒人員等信息，以備查閱和監(jiān)督。

5、強(qiáng)化疫病監(jiān)測(cè)

針對(duì)發(fā)生過(guò)副結(jié)核病的養(yǎng)殖場(chǎng)，建立牛副結(jié)核病的監(jiān)測(cè)體系。根據(jù)牛群的易感程度、疫情風(fēng)險(xiǎn)和監(jiān)測(cè)資源等因素，制定合理的監(jiān)測(cè)頻率，如每年至少進(jìn)行一次血清學(xué)檢測(cè)，結(jié)合牛生產(chǎn)周期和牛群的生理特點(diǎn)，合理安排監(jiān)測(cè)時(shí)間，避免影響牛群的生長(zhǎng)發(fā)育和生產(chǎn)性能。建立完善的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)檔案，包括監(jiān)測(cè)對(duì)象、方法、頻率、時(shí)間、結(jié)果等信息，便于分析和評(píng)估，對(duì)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，評(píng)估疫情風(fēng)險(xiǎn)和防控效果，為制定下一步防控策略提供依據(jù)。

綜上所述，在牛養(yǎng)殖業(yè)高質(zhì)量發(fā)展過(guò)程中，為了更好地降低該類傳染性疾病所造成的經(jīng)濟(jì)損失，就需要了解副結(jié)核病的病原學(xué)和流行病學(xué)，分析該類疾病所帶來(lái)的典型臨床癥狀，并結(jié)合病理解剖，采取針對(duì)有效的診斷方法，及時(shí)發(fā)現(xiàn)患病牛，及時(shí)處理患病牛，進(jìn)一步縮小疫情范圍，從而降低牛副結(jié)核病的發(fā)病流行率，提高牛養(yǎng)殖效益。

（作者單位：813500黃河源園區(qū)國(guó)家公園管理委員會(huì)）