馬丹 白明 于潔 李艷

摘 要：為掌握天津市售海產(chǎn)貝類腹瀉性貝類毒素（diarrhetic shellfish poison， DSP）的污染狀況，保障消費者的食用安全。2019—2023 年每年4—8月在天津市大型水產(chǎn)批發(fā)農(nóng)貿(mào)市場采集10種共354個海產(chǎn)貝類樣品，采用酶聯(lián)免疫（ELISA）法進行檢測，并對檢測結(jié)果進行數(shù)據(jù)分析。檢測結(jié)果共有253個樣品檢出陽性，檢出率為71%，檢出樣品DSP的含量范圍為10.40～154.47 μg/kg，均值為51.44 μg/kg，并未有超過食用安全限量值160 μg/kg的樣品。研究表明，在每年4—8月染毒高發(fā)期間，天津市售海產(chǎn)貝類DSP毒素含量整體較低，在采集的10種貝類中，牡蠣、扇貝、毛蚶的檢出率、檢出平均含量均位于前列，DSP含量5月最低，8月最高。通過本次研究發(fā)現(xiàn)，至2023年4—8月高發(fā)期，天津市售海產(chǎn)貝類腹瀉性貝類毒素的檢出率已達到100%，說明養(yǎng)殖環(huán)境中已存在產(chǎn)毒藻類繁殖，盡管含量普遍較低，應堅持在高發(fā)期對染毒情況進行監(jiān)測，并建議河北省、山東省、遼寧省等天津周邊養(yǎng)殖區(qū)域持續(xù)對養(yǎng)殖環(huán)境進行監(jiān)測。

關(guān)鍵詞：天津；貝類; 腹瀉性貝類毒素（DSP）

腹瀉性貝類毒素（diarrhetic shellfish poison， DSP）中毒是一種非致死性急性胃腸道綜合征。主要癥狀包括腹瀉、惡心、嘔吐和腹痛。根據(jù)毒素濃度和攝入量，發(fā)病時間可能在攝入后半小時至幾小時，一般在3 d內(nèi)可恢復[1]。1976 年，Yasumoto等[2]首次從多種貝類的肝胰腺中分離出DSP，從而確定了食用貝類導致腹瀉的原因并非致瀉菌微生物所為，而是DSP中毒，此后大量學者投入到貝毒及相關(guān)科學的探索和研究之中[3-6]。DSP由有毒甲藻類鰭藻屬（Dinophysis）[7]和原甲藻屬（Prorocentrum）[8-9]產(chǎn)生，可通過攝入海水中魚、蝦、貝等傳遞至人體。已有學者在黃道蟹（Cancer pagurus）[10]、巴西南部死亡綠海龜（Chelonia mydas）消化道中檢測出DSP毒素[11]。2007年丹麥和瑞典發(fā)生了海洋哺乳動物（海豹和海豚）大規(guī)模死亡事件，學者從尸體樣本中檢測出鰭藻毒素[12]。

DSP在全球沿岸海域均有分布，是世界范圍內(nèi)具有最嚴重健康威脅的赤潮藻毒素之一，不僅能造成急性中毒[13]，也能引起潛在的慢性中毒，并可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變，歐洲及美國已將DSP納入其常規(guī)生物毒素監(jiān)測計劃，在意大利14年的監(jiān)測數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)DSP是海產(chǎn)貝類主要的污染物[14]。2011年，寧波市和寧德市報道了中毒人數(shù)超過兩百人的貽貝中毒事件，是國內(nèi)首次大規(guī)模DSP中毒事件[15]，隨著我國沿海工業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模不斷擴大，近岸水體富營養(yǎng)化嚴重造成赤潮頻發(fā)，引起人們對海產(chǎn)貝類食用安全的高度關(guān)注。

我國渤海海域位于暖溫帶，特別是天津港經(jīng)貿(mào)航運遍布全球，往來頻繁，十分有利于有毒藻類的引入和擴散。李靜等[16]對國內(nèi)外已公開發(fā)表的船舶壓載艙沉積物相關(guān)文獻和資料進行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)船舶壓載艙沉積物攜帶有外來浮游植物共計106 種。而渤海灣發(fā)現(xiàn)通過壓載水傳播的外來浮游植物有17種，16種均屬于赤潮生物，其中包含產(chǎn)DSP的有毒藻類[17]。2009—2019年間，渤海共發(fā)生赤潮92次，主要發(fā)生在每年的5—9月份，其中，6—8月份赤潮發(fā)生的頻率最高[18]。渤海海域在1999年和2004年分別發(fā)生過鰭藻屬和原甲藻屬引發(fā)的赤潮。在渤海灣中，以天津市北部的漢沽大神堂近岸海域赤潮出現(xiàn)最為頻繁，其次為天津市與河北省南部交界的大港—黃驊近岸海域和天津市天津港近岸海域[19]。近幾年京津冀區(qū)域的河北省沿海城市頻頻發(fā)生食用貝類中毒事件，特別是在夏季，天津市場對貝類需求量極大，基本都是從臨近的山東省、河北省、遼寧省等批發(fā)而來，對本地食用貝類安全監(jiān)測預警能力提出了更高的要求。

本文研究了天津市售海產(chǎn)貝類的腹瀉性貝類毒素含量，對結(jié)果進行分析，同時通過實時監(jiān)測保障市民食用安全，防止食用貝類中毒事件在本區(qū)域發(fā)生。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 樣品采集及處理 2019—2023年，采集10種貝類樣品共354個，樣品主要采集于天津市大型水產(chǎn)批發(fā)農(nóng)貿(mào)市場（濱海新區(qū)金元寶農(nóng)貿(mào)批發(fā)市場、津南區(qū)阿米瑪何莊子農(nóng)貿(mào)批發(fā)市場、濱海新區(qū)古林農(nóng)貿(mào)市場和萬源星城菜市場、東麗區(qū)金鐘農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)市場、博疆菜市場）以及渤海灣天津海域（漢沽海域、大港海域）。采集的樣品主要為當?shù)刂饕?jīng)濟貝類，見表1。按照GB 5009.212-2016《食品安全國家標準貝類中腹瀉性貝類毒素的測定》[20]中5.2試樣制備的要求進行樣品的處理：用清水徹底洗凈貝類樣品外表，切斷閉殼肌，開殼，用清水淋洗內(nèi)部去除泥沙及其他異物，取出貝肉，瀝水，均質(zhì)。若樣品不能及時檢測，需保存至-18 ℃以下備用。

1.1.2 儀器與材料 ?Multiskan FC 酶標儀（Thermo）；SQP電子天平（Sartorius）; VORTEX-GENIE2 旋渦混合器（Scientific Industries）; 3-18KS離心機（SIGMA）； 腹瀉性貝類毒素酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒（Abraxis）。

1.2 檢測方法

樣品的前處理：向玻璃瓶中加入1 g均質(zhì)后的貝肉和6 mL 80%甲醇，4 ℃下3 500 r/min離心10 min，收集上清液；在殘留的貝肉中加入2 mL? 80%甲醇，4 ℃下3 500 r/min離心10 min，收集上清液；用80%甲醇將收集的上清液總體積補至10 mL，用0.45 μm的濾膜過濾。取100 μL濾液，稀釋至1 mL，待測。按照ELISA試劑盒使用說明書的檢測步驟進行上機檢測。每個濃度的標準溶液及每個樣品均做平行樣，在酶標儀450 nm處測量吸光度（OD）取平均值。以標準品的濃度為x軸，標準品的%B/B0值（標準品平均吸光值與零標準品平均吸光值之比）為y軸，構(gòu)建標準曲線。計算樣品的%B/B0值，從曲線上讀取濃度結(jié)果（ppb），再乘以稀釋倍數(shù)得出最終結(jié)果。所用試劑盒均放置于4～8 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 結(jié)果判定

根據(jù)GB 5009.212—2016《食品安全國家標準 貝類中腹瀉性貝類毒素的測定》[20]中標注“任何腹瀉性貝類毒素含量值大于16 μg/100 g的樣品即被認為是有害的，對人類食用不安全”。方法的定量限為10 μg/kg，以結(jié)果160 μg/kg為限量，進行結(jié)果判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 貝類污染基本狀況

腹瀉性貝毒污染狀況調(diào)查結(jié)果顯示（表2），在采集的10種354份貝類樣本中，共有253個樣品檢出，檢出率為71%，檢出樣品的含量范圍為10.40～154.47 μg/kg，均值為51.44 μg/kg，檢測結(jié)果均未超標。所有樣品中，檢出率由高到低依次為青蛤、文蛤、牡蠣、扇貝、毛蚶、脈紅螺、四角蛤蜊、螠蟶、菲律賓蛤仔、紫貽貝。青蛤、文蛤的樣品量較少，但均有低濃度檢出，牡蠣的檢出率較高，檢出平均含量最高，扇貝、毛蚶的檢出率及平均值在采集的貝類品種中均為較高水平，經(jīng)常發(fā)生食用中毒事件的主角紫貽貝檢出率及平均值處于較低水平。

2.2 不同貝類DSP污染狀況

采集的10種354個貝類樣品中DSP檢出率最高的是青蛤、文蛤，青蛤共有6個樣品，文蛤共有5個樣品，大部分采集自2022年，樣品量較少，采集年份較集中，對檢出率有一定影響。紫貽貝共采集樣品數(shù)20個，大部分為2019年采集，檢出率為35%，且濃度較低，可能是由于周邊城市出現(xiàn)食用貝類中毒事件后，管理部門對紫貽貝的食用進行預警，導致銷售紫貽貝商戶減少，并且流通速度變慢，為毒素進一步代謝提供時間。其他種類由高到低分別為牡蠣＞扇貝＞毛蚶＞脈紅螺＞四角蛤蜊＞螠蟶＞菲律賓蛤仔，檢出率最高79%，最低64% （圖1）。DSP含量檢測均值最高的是牡蠣，達到66.79 μg/kg，由高到低分別為牡蠣＞毛蚶＞螠蟶＞文蛤＞扇貝＞脈紅螺＞菲律賓蛤仔＞四角蛤蜊＞紫貽貝＞青蛤（圖2）。

2.3 不同時間DSP污染分布狀況

2019年共采集樣品23份，包含13份紫貽貝樣品和10份其他品種，其中2份紫貽貝樣品檢測陽性，其他樣品均為陰性，檢出率為8.7%，檢測均值為31.80 μg/kg。2019－2023年樣品檢出率呈逐年升高的趨勢，檢測結(jié)果顯示DSP濃度含量并不高，最高值出現(xiàn)在2022年，其他年份總體含量相對較低，遠低于限量值160 μg/kg（表3）。

在陽性樣品的檢測結(jié)果中，2019年采集樣品較少，且只有兩份紫貽貝樣品呈陽性。2020年DSP含量最高的是扇貝，其次為四角蛤蜊、毛蚶。2021年DSP含量最高的是毛蚶，其次為牡蠣、螠蟶，2021年各種貝類樣品濃度均相對較低。2022年DSP含量最高的是牡蠣，濃度達到107.63 μg/kg， 其次為脈紅螺、 文蛤， 2022年的檢測濃度最高。2023年DSP含量最高的是青蛤，濃度為56.07 μg/kg，其次為毛蚶55.45 μg/kg、扇貝53.66 μg/kg，2023年的檢測含量普遍不高（圖3）。

由表4可以看出，在DSP高發(fā)期的4—8月期間，各月檢出率均在60%以上，8月檢出率最高，為89%，并且DSP含量也最高。8月采集的樣品中螠蟶的檢測濃度最高，為84.22 μg/kg；其次為四角蛤蜊63.25 μg/kg、毛蚶55.64 μg/kg。7月檢出率最低，為61%，但DSP含量僅次于8月， 位列第二。7月采集的樣品中牡蠣的檢測濃度最高為69.97 μg/kg；其次為扇貝67.14 μg/kg、螠蟶62.54 μg/kg。5月檢出率較低，為64%，且DSP含量最低，為41.05 μg/kg。5月采集的樣品中毛蚶的檢測濃度最高，為120.11 μg/kg；其次為牡蠣42.37 μg/kg、菲律賓蛤仔35.53 μg/kg。

從圖4中可以看出，10種貝類樣品DSP含量普遍不高，除5月份的毛蚶樣品超過100 μg/kg，其它均在20～90 μg/kg之間，均未超過限量值160 μg/kg。4月、6月各種貝類DSP含量值較為分散，5月份含量普遍較低，7月份DSP含量值相對集中，8月含量普遍升高?？赡苁怯捎诓煌愵惖臄z食習性與代謝速度不同，導致不同月份DSP毒素含量不同。有學者在實驗室中對貽貝代謝DSP進行凈化試驗，結(jié)果表明16 d內(nèi)能降低到約初始毒素含量的50%[21]。

3 結(jié)論與討論

目前發(fā)現(xiàn)能夠產(chǎn)生腹瀉性貝毒的藻類有漸尖鰭藻（D.acuminate）、具尾鰭藻（D.caudate）、尖銳鰭藻（D.cauta）、倒卵形鰭藻（D.fortii）、挪威鰭藻（D.norvegica）、球囊鰭藻（D.saccullus）、三角鰭藻（D.tripos）、帽狀禿頂藻（D.mitra）及利瑪原甲藻（P.lima）、凹形原甲藻（P.concavum）、P.hoffmannianumt、P.maculosumt、P.faustiae等[22]。無論是在渤海灣[19]還是在秦皇島近海[23]、山東近海[24]、大連海域[25]等區(qū)域均有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)DSP的有毒藻類，雖然不是能夠直接引起赤潮的優(yōu)勢種群，但作為營養(yǎng)藻種經(jīng)常伴隨著赤潮的發(fā)生[26]。

隨著各地沿海人工養(yǎng)殖貝類規(guī)模的不斷發(fā)展壯大，近岸海域水體富營養(yǎng)化程度不斷增加，加上海上建設、海運貿(mào)易等經(jīng)濟發(fā)展模式，對海水環(huán)境絲毫沒有改善作用。養(yǎng)殖區(qū)域又大都處于半封閉狀態(tài)，與外界水體交換速度緩慢，大量貝類攝食消耗初級生產(chǎn)力有助于有毒藻類穩(wěn)定繁殖，根據(jù)日照和溫度的變化，使不同貝類體內(nèi)保持各自不同的穩(wěn)定的毒素濃度。

本研究對2019—2023年4—8月高發(fā)期間天津市售海產(chǎn)貝類中腹瀉性貝類毒素進行了調(diào)查監(jiān)測。結(jié)果表明，所有樣品均未超過食用安全標準，并處于較低水平。其中青蛤、文蛤、牡蠣、扇貝、毛蚶等主要經(jīng)濟貝類染毒概率相對較大。與楊輝等[27]調(diào)查的河北省市售貝類結(jié)果相近。由于食用預警，采樣期間紫貽貝市售樣品較少且流通速度較慢，導致檢出率及含量均處于較低水平。DSP含量5月最低，8月最高，在采集的10種貝類中牡蠣、扇貝、毛蚶的檢出率、檢出平均含量均處于前列。有研究表明DSP來源不僅限于營養(yǎng)型游動藻細胞，也可來自孢囊。在條件不宜時（如冬季），單胞藻常以孢囊的形式存在于基底中[28]，海底或灘涂上生長的貝類例如泥蚶、縊蟶和青蛤等，有可能攝食這些有毒孢囊，DSP就會轉(zhuǎn)移到其體內(nèi)，這可能是青蛤DSP檢出率高的原因。

貝類含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、無機鹽和多種維生素，并含有大量的肝糖，易被消化和吸收，口感鮮美。以貝類為主的海鮮燒烤更是讓消費者無法抗拒。由于我國貝類安全監(jiān)控機制不健全等問題，貝類出口一直受到歐盟的禁止，基本以內(nèi)銷為主。通過本次研究發(fā)現(xiàn)，至2023年4—8月高發(fā)期，天津市售海產(chǎn)貝類腹瀉性貝類毒素的檢出率已達到100%，說明養(yǎng)殖環(huán)境中已存在產(chǎn)毒藻類繁殖，盡管含量普遍較低，為保證消費者食用安全適時發(fā)布預警，應堅持在高發(fā)期對染毒情況進行監(jiān)測，并建議河北、山東、遼寧等天津周邊養(yǎng)殖區(qū)持續(xù)對養(yǎng)殖環(huán)境進行監(jiān)測。

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Analysis on pollution status of diarrhetic shellfish poisons in retail marine shellfish of Tianjin

MA Dan1，2，BAI Ming1，2，YU Jie1，2，LI Yan1

（1.Tianjin Agricultural Ecological Environment Monitoring and Agricultural Product Quality Testing Center， Tianjin 300221， China;

2. Fisheries Environment and Aquatic Product Quality Testing Center of the Ministry of Agriculture and Rural Affairs （Tianjin）， Tianjin 300221， China）

Abstract：To investigate the pollution status of diarrhetic shellfish poison （DSP） in commercial marine shellfish of Tianjin. From every April to August in 2019 to 2023， totally 354 samples of 10 kinds of marine shellfish from Tianjin markets were analyzed with ELISA detective. The results showed that， among 354 samples， there were 253 samples positive with DSP， the detection rate was 71%， the contents range of DSP were 10.40～154.47 μg/kg， average value was 51.44 μg/kg， there was no sample above the 160 μg/kg safety limit. Research has shown that during the high incidence of DSP from April to August every year， there was a low level of DSP in commercial marine shellfish of Tianjin. Among the 10 collected shellfish， Crassostrea gigas，Chlamys farreri，Scapharca subcrenata ranked among the top in terms of detection rate and average detection content， there was the lowest DSP content in May and the highest in August. Through this study， it was found that the

detection rate of DSP in commercial marine shellfish of Tianjin during the high incidence period from April to August each year has reached 100%. Although the content is generally low， in order to ensure the safety of public consumption， it is necessary to adhere to monitoring during the high incidence period. It is recommended that all culture areas continue to monitor the environment.

Key words：Tianjin; shellfish; diarrhetic shellfish poison （DSP）

（收稿日期：2024-05-07）