摘要：為了了解邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中禽白血病病毒（ALV）感染情況及禽白血病病亞群的流行情況。本試驗(yàn)于2022年1月—2024年3月采集邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的血液、蛋清、胎糞（雛雞）及肛拭子病料組織檢測(cè)樣本共計(jì)1 244份，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（EILSA）檢測(cè)樣品中禽白血病病毒感染情況及亞群的流行情況。結(jié)果顯示，不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中的ALV p27抗原總陽(yáng)性率分別為20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清樣品中的ALV p27抗原陽(yáng)性率均高于血清和胎糞，且呈現(xiàn)逐年下降的趨勢(shì)，ALV p27抗原陽(yáng)性樣本中分別檢出A/B亞群、J亞群、E亞群3種亞群，以ALV -J亞群流行為主，ALV-E亞群檢測(cè)率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)。為進(jìn)一步研究蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中ALV流行病調(diào)查與凈化提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：蛋雞；禽白血病病毒；p27抗原；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（EILSA）

禽白血病（avian leukosis，AL）是危害禽類養(yǎng)殖業(yè)主要的病毒性疾病之一，該病主要由禽白血病不同亞群病毒（avian leukosis virus，ALV）引起禽類的禽骨髓細(xì)胞性白血病、淋巴細(xì)胞性白血病、成髓細(xì)胞性白血病和成紅細(xì)胞性白血病等多種腫瘤疾病的總稱[1]。禽白血病主要的傳染源是病雞和帶毒雞，尤其是帶毒雞不表現(xiàn)明顯臨床癥狀容易被忽視，同時(shí)該病可垂直傳播，也是導(dǎo)致該病在我國(guó)養(yǎng)殖場(chǎng)流行的主要因素之一，臨床以引起禽類腫瘤疾病、免疫抑制及生產(chǎn)性能下降等為常見(jiàn)，嚴(yán)重者可以導(dǎo)致死亡，嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展[2-4]。ALV根據(jù)感染宿主范圍、結(jié)構(gòu)抗原差異性及囊膜特性可以分為11個(gè)亞群（A、B、C、D、J 、K、E、F、G、H 和 I），我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)以ALV-A、B 和 J 為主，其中ALV-J 在我國(guó)各地區(qū)不同類型種雞群中的流行最為嚴(yán)重，雞群感染ALV-J日益增加并形成地區(qū)性流行[5-7]。因此，對(duì)雞群中ALV-J凈化具有重要的意義。為進(jìn)一步分析ALV在邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中感染情況和亞群的流行情況，本研究針對(duì)邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞中的ALV-J進(jìn)行了檢測(cè)和分析其亞群的流行情況，為進(jìn)一步研究蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中ALV-J流行病調(diào)查與凈化提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1病料來(lái)源

2022年1月—2024年3月采集邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的血液、蛋清、胎糞（雛雞）及肛拭子病料檢測(cè)樣本共計(jì)1 244份，其中2022年采集的病料組織樣本456份，2023年采集的病料組織檢測(cè)樣本478份，2024年1月—3月份采集病料組織檢測(cè)樣本310份。

1.2 主要試劑

禽白血病P27抗原ELISA檢測(cè)試劑盒、ALV亞群（A、B、C、D、E、J）ELISA檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自北京天之泰生物科技有限公司；樣品采集管、采血針、采血管，均購(gòu)石家莊豐悅生生物科技有限公司。

1.3 病料組織樣品的處理

將采集邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的病料檢測(cè)樣本共計(jì)1 244進(jìn)行處理，對(duì)采集血液離心（2 500 r/min，5 min）制備血漿樣本，4 ℃保存?zhèn)錂z；蛋清樣本（500倍稀釋）和胎糞樣本（PBS處理）等，在-80 ℃條件下反復(fù)凍融3次后備檢，將采集的病料組織樣本進(jìn)行編號(hào)，分裝及在-80 ℃低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 ALVp27抗原的ELISA檢測(cè)

取1.3中處理好的肛拭子、血清、蛋清及胎糞病理組織樣本，參照ALVp 27抗原ELISA檢測(cè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)對(duì)上述樣品檢測(cè)結(jié)果判定，分析邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中蛋雞ALV的陽(yáng)性率，陽(yáng)性率計(jì)算公式如下，陽(yáng)性率=檢出陽(yáng)性樣本/檢查樣本總數(shù)×100%。

1.5 ALV亞群檢測(cè)

取1.4中ALVp 27抗原ELISA檢測(cè)陽(yáng)性的樣品，按照EILSA檢測(cè)ALV亞群（A、B、C、D、E、J）試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)ALV亞群進(jìn)行檢測(cè)，并參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行結(jié)果判定，并分析的邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中蛋雞ALV亞群攜帶情況。

2 結(jié)果

2.1 ALV-p27抗原ELISA檢測(cè)結(jié)果

2022年1月—2024年3月采集邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的血液、蛋清、胎糞（雛雞）及肛拭子病料檢測(cè)樣本共計(jì)1 244份，采用參照ALVp 27抗原ELISA檢測(cè)試劑盒EILSA 進(jìn)行樣品中ALV p27抗原檢測(cè)。結(jié)果由表2可知，2022年1月—2024年3月不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的ALV p27抗原總陽(yáng)性率分別為20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清檢測(cè)樣品中的ALV p27抗原陽(yáng)性率均高于血清和胎糞，且呈現(xiàn)逐年下降的趨勢(shì)。

2.2 ALV亞群的檢測(cè)結(jié)果

2022年1月—2024年3月采集邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的血液、蛋清、胎糞（雛雞）及肛拭子病料檢測(cè)樣本中分別檢測(cè)出95份、70份、44份ALV p27抗原陽(yáng)性樣品，分別對(duì)ALV p27抗原陽(yáng)性樣品進(jìn)行ALV亞群的測(cè)定，并統(tǒng)計(jì)在（肛拭子、血清、蛋清及胎糞）樣品中的分布情況。 結(jié)果由表3可知，2022年1月-2024年3月邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞中ALV亞群流行情況有A/B亞群、J亞群、E亞群3個(gè)亞群，以ALV -J亞群流行為主，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)2022年1月-2024年3月邢臺(tái)地區(qū)不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞中ALV-E亞群檢測(cè)率出現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)。

3 討論

禽白血病（ALV）是一種危害養(yǎng)禽業(yè)免疫抑制性傳染病，該病原具有11個(gè)亞群，其中J 亞群對(duì)禽類的致病力最強(qiáng)其威脅最大，ALV-J 首次在英國(guó)發(fā)現(xiàn)的新型外源性病毒，該病毒初期主要感染肉用型種雞，隨著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展蛋用型種雞感染率也呈現(xiàn)日趨升高，甚至造成地區(qū)性流行[8-9]。近幾年，國(guó)內(nèi)關(guān)于地方品種雞感染ALV-J報(bào)道逐漸增多。ALV-J對(duì)肉用、蛋用型雞及其他相關(guān)品種的雞均具有較強(qiáng)的致病性和傳染性，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害較大[2]。因此，對(duì)不同品種的種雞進(jìn)行ALV-J凈化，對(duì)減少禽白血病的垂直傳播具有重要的意義。本試驗(yàn)研究表明，2022年1月—2024年3月不同蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)中海蘭褐蛋雞和羅曼粉蛋雞的ALV p27抗原總陽(yáng)性率分別為20.8%、14.6%、14.2%，其中肛拭子、蛋清檢測(cè)樣品中的ALV p27抗原陽(yáng)性率均高于血清和胎糞，且呈現(xiàn)逐年下降的趨勢(shì)。說(shuō)明該地區(qū)規(guī)?；半u場(chǎng)中存在ALV流行情況，應(yīng)該對(duì)蛋雞進(jìn)行ALV檢測(cè)并進(jìn)行淘汰陽(yáng)性蛋雞，建立有效的綜合防控措施，進(jìn)行有效的綜合防控。國(guó)內(nèi)相關(guān)研究表明在蛋雞場(chǎng)中以ALV以J亞群流行比較多[10]，為主，本試驗(yàn)通對(duì)ALV p27抗原陽(yáng)性樣本進(jìn)行ALV亞群的檢測(cè)，共檢測(cè)出 3種亞群，以ALV -J亞群流行為主，與上述報(bào)道的一致。相關(guān)研究表明ALV-E亞群一般屬于內(nèi)源性感染，但是在蛋雞也存在一定的致病性[11-12]，但是同時(shí)檢測(cè)出ALV-E亞群，呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)，應(yīng)該引起重視，在蛋雞養(yǎng)殖過(guò)程中應(yīng)該對(duì)ALV-E進(jìn)行檢測(cè)與凈化，淘汰陽(yáng)性的雞群。因此，禽白血病目前沒(méi)有有效的疫苗進(jìn)行預(yù)防，在蛋雞養(yǎng)殖過(guò)程中應(yīng)該進(jìn)行定期檢測(cè)，尤其是種雞的檢測(cè)，淘汰陽(yáng)性種雞，凈化種群。■

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