摘要：蚯蚓堆肥可削減畜禽糞便中部分耐藥基因（ARGS），為進(jìn)一步削減ARGs殘留，本研究通過向牛糞蚯蚓堆肥中加入3%的板藍(lán)根（BG）等8種不同抑菌功效的中藥渣，研究其對ARCs和可移動遺傳元件（MCEs）的動態(tài)變化影響（0-28 d）。結(jié)果表明：不同中藥渣對蚯蚓的存活影響不同，當(dāng)歸（DG）和板藍(lán)根有利于其存活，而枸杞（GQ）、苦參（KS）、蒲公英（PY）和三七（sQ）對其存活不利。堆體中ARGs普遍存在，優(yōu)勢主導(dǎo)基因?yàn)閟ut-ARCs、tetX和str-ARGs。不同中藥渣對ARGs影響不同，28 d的ARCs豐度為：DC＜ZS（紫蘇）＜BC＜CK＜PY＜KS＜GG（葛根）＜SQ＜GQ，DC對sul-ARGs和str-ARCs的去除更為有效，前者中的sull和su坦的去除率分別為81.50%和82.72%；后者中strB的去除率為72.02%。DG、ZS和BC對MGEs中的intll的削減率分別為84.76%、79.72%和58.58%，對intl2的削減均達(dá)到100%；其他中藥渣對intI1有促進(jìn)增殖作用。研究表明，不同中藥渣對蚯蚓堆肥過程ARGs和MGEs的影響存在差異，當(dāng)歸、板藍(lán)根和紫蘇可有效減少ARGs的污染和傳播風(fēng)險。

關(guān)鍵詞：中藥渣；牛糞；蚯蚓堆肥；耐藥基因；傳播風(fēng)險

中圖分類號：S141.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1672-2043（2024）07-1639-09 doi：10.1 1654/jaes.2023-1098

隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；c集約化的快速發(fā)展，大量抗生素類藥物被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖過程，致使大量抗生素耐藥性細(xì)菌（ARB）與抗生素耐藥基因（ARGS）在畜禽糞便中產(chǎn)生并富集。畜禽糞便作為ARB與ARGs的龐大儲庫之一，若后續(xù)處理或利用不當(dāng)可造成畜禽源ARCs在受納環(huán)境中的積累與二次傳播，進(jìn)一步加劇ARGs污染帶來的風(fēng)險。

蚯蚓堆肥作為一種畜禽糞污高值資源化利用的重要方式，具有工藝簡單、處理成本低、資源化利用率高等優(yōu)點(diǎn)，除了能夠增加糞肥中的生物可利用成分、提高糞便附加值外，還可以利用蚯蚓腸道內(nèi)分泌的生物酶和內(nèi)源微生物等對畜禽糞便中的ARB和ARGs進(jìn)行分解轉(zhuǎn)化。此外，蚯蚓堆肥還可降低整合子、接合型質(zhì)粒等ARGs主要傳播載體的豐度水平，通過控制ARGs的傳播來降低ARGs的含量。然而，由于堆肥底物畜禽糞便中ARGs含量較高且種類豐富，加之蚯蚓堆肥對ARGs的去除具有一定選擇性，使得堆肥產(chǎn)物蚯蚓體內(nèi)和蚓糞中仍會檢出一定量的ARGs，存在后續(xù)利用安全風(fēng)險。如Chen等利用相對定量PCR研究了蚯蚓污泥堆肥過程中四環(huán)素類（tet-ARCs）和喹諾酮類（qnr-ARGs）ARGs的變化，發(fā)現(xiàn)蚯蚓堆肥可顯著去除qnr-ARCs中的qnrS基因，但對tet-ARCs的去除效果偏弱。Tian等也在蚯蚓堆肥的末端產(chǎn)物蚯蚓糞中發(fā)現(xiàn)部分ARGs豐度上調(diào)的現(xiàn)象，如blaampc和fexA。因此，如何進(jìn)一步促進(jìn)蚯蚓堆肥過程ARGs的削減去除，值得深入研究和探討。

我國是中醫(yī)藥大國，中藥渣廢棄物年產(chǎn)量高達(dá)7 000萬t，中藥渣含有豐富的纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、粗蛋白、氨基酸、生物堿、黃酮類及苷類等生物活性物質(zhì)及微量元素，經(jīng)過發(fā)酵作為栽培基質(zhì)或者有機(jī)肥是目前常見的處理方式。中藥渣作為藥物殘?jiān)?，其中還含有大量的藥用抑菌成分。研究發(fā)現(xiàn)，黃芩口服液的草藥殘留物與牛糞蚯蚓共堆肥能夠促進(jìn)蚯蚓生長繁殖的基因和代謝途徑，蓮花清瘟中藥殘?jiān)臀勰?、蚯蚓共堆肥有效降低了污泥、蚯蚓糞中目標(biāo)MGEs和ARGs，降低了ARGs傳播的風(fēng)險，并減少了MGEs和ARGs在蚯蚓堆肥中的潛在宿主菌。

中藥種類繁多，不同種類中藥（渣）活性物質(zhì)不同，對微生物影響存在差異。雖然已有研究探究了中藥渣與畜禽糞便共堆肥的效應(yīng)和機(jī)制，但不同種類中藥（渣）對ARB和ARGs的豐度影響鮮見報(bào)道。本研究針對蚯蚓牛糞堆肥過程中ARGs傳播風(fēng)險，選取板藍(lán)根、三七等具不同抑菌抗菌功效的8種中藥渣作為添加物，探究不同中藥渣對蚯蚓牛糞堆肥過程中ARGs的賦存影響及其對蚯蚓堆肥削減ARGs的強(qiáng)化效應(yīng)，以及蚯蚓牛糞堆肥過程中可移動遺傳元件（MGEs）的變化規(guī)律及其與ARCs的相關(guān)性，研究結(jié)果有望為進(jìn)一步削減蚯蚓堆肥過程ARGs的傳播提供理論依據(jù)，助力畜禽糞污的資源化安全利用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試蚯蚓為表?xiàng)惓嘧訍蹌衮荆‥iseniafoetida），單體質(zhì)量0.55±0.2 g，試驗(yàn)前將個體大小相近的蚯蚓在牛糞環(huán)境下馴化30 d，馴化后挑選帶有生殖環(huán)帶且活潑健康的成蚓進(jìn)行投加。投加前，用無菌水清洗蚯蚓表面后放置在濕潤濾紙的干凈培養(yǎng)皿中，黑暗環(huán)境下保持24 h，進(jìn)行清腸處理。

供試牛糞采白天津市嘉立荷集團(tuán)經(jīng)自然堆放20d的樣品，經(jīng)晾干、去雜、粉碎、混勻后備用。供試中藥渣采白天津某中藥廠，共8種，分別為當(dāng)歸（DG）、葛根（GG）、紫蘇（ZS）、三七（SQ）、苦參（KS）、枸杞（GQ）、板藍(lán)根（BG）和蒲公英（PY），經(jīng)過定量分析檢測其24種特定亞型ARGs的檢出率為零。將中藥渣剪至長寬皆小于1 cm備用，供試中藥渣的主要化學(xué)成分見表1。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與樣品采集

每種中藥渣均按3％（質(zhì)量比）添加，共8個處理組，對照（CK）為純牛糞，培養(yǎng)過程中于0、7、14、21d和28 d進(jìn)行破壞性取樣，每次分別取樣3個平行。蚯蚓在塑料方盒（長11 cm、寬15 cm、高7.5 cm）中養(yǎng)殖，每盒放入充分混勻的干料1 kg，加蒸餾水調(diào)節(jié)含水量至70%左右。然后每盒按350條蚯蚓量均勻投放在盒內(nèi)基料上，盒子四周用黑色塑料紙做避光處理，并用2層紗布封蓋，保證透氣并防止蚯蚓逃逸，同時為保持水分和濕度，通過計(jì)重的方式每隔2d噴灑一次無菌水。收集的基質(zhì)存于-80℃為后續(xù)實(shí)驗(yàn)用。

1.3 DNA提取方法

稱取0.5 g采集的基質(zhì)樣本，采用Fast DNA SPINKit for soil試劑盒（MP Biomedicals， LLC， Santa"Ana，CA，美國）按操作手冊進(jìn)行DNA提取。提取后，采用超微量紫外可見光分光光度計(jì)Nano Drop 2000（Ther-mo Fisher，美國）和瓊脂糖凝膠電泳法檢測DNA質(zhì)量。提取與檢測完成后，將DNA樣品放置于-20℃冰箱中暫存。蚯蚓堆肥中ARGs的去除率=（轉(zhuǎn)化前基質(zhì)中ARGs的總相對豐度-轉(zhuǎn)化后基質(zhì)中ARGs的總相對豐度）／轉(zhuǎn)化前基質(zhì)中ARGs的總相對豐度×100％，其中正數(shù)表示第28天不同種類中藥渣處理下基質(zhì)中ARGs與第0天相比降低的百分比，負(fù)數(shù)表示上升的百分比。

1.4 實(shí)時熒光定量PCR

本研究通過實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測了樣本中的16S rRNA基因（表征細(xì)菌總數(shù)）、24種特定亞型ARGs以及3個MGEs，包括2個磺胺類耐藥基因（sul-ARGs，sul1、sul2）、6個四環(huán)素類耐藥基因（tet-ARCs，tetL、tetX、tetQ、tetO、tetW、tetM）、5個β-內(nèi)酰胺類耐藥基因（bla - ARCs， blampC、blaTEM-1、blaOXA-1、blaCES-1、blaNDM-1）、2個氯霉素類耐藥基因（fexA、cfr）、2個大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因（erm-ARCs，ermB、ermC）、3個喹諾酮類耐藥基因（qnr-ARGs，qnrB、qnrS、oqxB）、3個鏈霉素類耐藥基因（str-ARGs，strA、strB、aadA）、1個多重耐藥類耐藥基因（mcr-1），3個MGEs分別為intI1、intI2和traA。在7500實(shí)時熒光定量PCR系統(tǒng)（Ap-行熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)混合物（20 μL）包含0.4μL ROX參考染料II、前引物和后引物各0.4 μL、6.8μL DNA游離水、10 μL SYBR Premix Ex TaxTM II和2μL樣本DNA模板。熒光定量PCR擴(kuò)增過程如下：預(yù)變性為95℃，30 s；然后為40個循環(huán)，包括95℃變性Ss和60℃退火持續(xù)34 s，熔解曲線分析在60-95℃之間進(jìn)行。其中無菌水為陰性對照，每個DNA模板設(shè)置3個平行，熒光定量PCR反應(yīng)程序和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作參照文獻(xiàn)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 22．0對數(shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA方差分析，以P＜0.05作為差異顯著水平。采用Origin 2021軟件繪制熱圖、柱狀圖及折線圖。采用R軟件的psych和ti-dyverse程序包計(jì)算相關(guān)性分析的刷直及P值，并繪制網(wǎng)格圖。數(shù)據(jù)的絕對豐度、相對豐度（ARGS copies/16S rRNA gene copies）、平均值和標(biāo)準(zhǔn)差的計(jì)算均使用Excel 2016。

2 結(jié)果與討論

2.1 蚯蚓數(shù)量與體質(zhì)量變化

不同中藥渣對蚯蚓的數(shù)量和平均體質(zhì)量影響不同，由表2可知，經(jīng)過28 d后，所有處理的蚯蚓數(shù)量均有減少，但不同中藥渣處理死亡率存在不同程度差異（P＜0.05）。紫蘇、板藍(lán)根和當(dāng)歸的死亡率均低于對照（6.57%），分別為6. 18%、5.42%和4.09%，其中板藍(lán)根和當(dāng)歸達(dá)到顯著性差異；其他處理死亡率則均比對照高，其中枸杞（11.71%）、苦參（10.85%）、蒲公英（10.28%）和三七（7.71%）達(dá)到顯著性差異。蚯蚓平均體質(zhì)量各處理間差異不顯著（圖1）。結(jié)果表明，當(dāng)歸和板藍(lán)根有利于蚯蚓存活，而枸杞、苦參、蒲公英和三七對蚯蚓存活不利。

2.2 耐藥基因的發(fā)生特征與削減差異

針對蚯蚓堆肥體系，考察了基質(zhì)中24種常見ARGs亞型的豐度變化特征（圖2）?？傮w來看，除了tetM、blaCES-1和mcr-1在所有樣品中未檢出外，其余ARGs均有檢出，單個樣品中檢出頻率為8.30%-100.00%。sul-ARGs、str-ARGs與氯霉素ARGs的檢出率最高（均為100%），其次為tet-ARCs（平均檢出率83.30%）。值得注意的是，與人類健康密切相關(guān)的bla-ARCs在基質(zhì)中普遍存在，其中blaOXA-1和blaNDM-1檢出率最高（分別為73.3%和68.89%），而qnr-ARGs的檢出率最低（平均為59.25%）。從賦存水平來看，所有處理中sul-ARGs的相對豐度最高（1×10-3-1×10-2copies／16S rRNA copies），其次為tet-ARGs和str -ARGs，豐度水平分別為1 × 10-6-1×10-2 copies／16SrRNA copies和1×10-5-1×10-2 copies／16S rRNA cop-ies。而qnr-ARGs和bla-ACRs類在ARGs各類型中的相對豐度較低，除blampe豐度達(dá)到1×10-5-1×10-3copies/16S rRNA copies外，其余僅為1×10-7-1×10-6copies／16S rRNA copies。以上結(jié)果表明，牛糞中ARGs普遍存在，這與畜禽養(yǎng)殖過程中抗生素的普遍使用有關(guān)；同時，蚯蚓堆肥后基質(zhì)中ARGs仍普遍檢出，說明蚯蚓堆肥沒有徹底消除ARGs風(fēng)險。

不同種類中藥渣對蚯蚓堆肥牛糞過程ARGs的影響不同（圖3）。28 d時，ARGs豐度表現(xiàn)為DG＜ZS＜BG＜CK＜PY＜KS＜GG＜SQ＜GQ，處理間差異顯著（P＜0.05）。BG、ZS和DG處理ARGs的相對豐度顯著降低（P＜0.05），sul-ARCs和str-ARGs的豐度水平較CK平均降低了23.35%和24.15%；其中降低最顯著的sul1分別降低了67.90%、70.66%和81.50%，其次是sul2，分別降低了56.46%、63.09%和82.50%；三者也顯著降低了qnr-ARCs和erm-ARGs的含量，其中，qnrS的含量為o。DG對ARGs削減的效果最好，對sul-ARGs和str-ARGs的去除更為有效，前者中的sull和sul2的去除率分別為81.50%和82.72%；后者中的strB的去除率達(dá)到72.02%。

中藥渣可造成蚯蚓腸道微生物群落變化，如糞產(chǎn)堿菌（Alcaligenes faecalis）、假單胞菌屬（Pseudomonas）及抗壞血酸克呂沃爾氏菌（Kluyvera ascorbata）等變形菌門中的細(xì)菌，而變形菌門可同時攜帶四環(huán)素類和磺胺類ARGs，中藥渣可驅(qū)動含有sul-ARCs和str-ARGs細(xì)菌宿主的選擇。不同的中藥渣因?yàn)槌煞植煌志咕男Ч膊煌?，對微生物和ARGs的影響差異值得深入研究。

2.3 代表性耐藥基因的動態(tài)變化

所有處理中，sul-ARGs的相對豐度最高，其次為tet-ARCs。在第0、7、14、21天和28天，不同中藥渣對sul1和sul2的去除效果存在顯著差異（圖4）。BG、ZS、DG處理的sul1相對豐度變化規(guī)律與CK-致，呈現(xiàn)出整體降低趨勢；0-14 d平均豐度由1.67×10-2 cop-ies/16S copies降低到6.60×10-3 copies/16S copies、21d略微升高（6.95×10-3 copies/16S copies）、28 d繼續(xù)降低（5.19×10-3 copies/16S copies）。sul2與sul1呈現(xiàn)相同的變化趨勢，第0d豐度為2.10×10-2 copies/16S cop-ies，0-14 d先下降了62.33%，21d上升（1.08×10-2 cop-ies/16S copies），28 d繼續(xù)下降（7.78×10-3 copies/16Scopies，下降了62.9%）。Duan等的研究結(jié)果表明蓮花清瘟中藥渣的添加使污泥中sul1和sul2的絕對豐度分別下降了72.98%-90.66% （P＜O.01）和23.59%-68.94%（P＜0.05）。Abdellah等在研究中也發(fā)現(xiàn)薇甘菊中藥渣在雞糞堆肥中的添加能夠有效去除sul-ARGs，與本研究結(jié)果一致。而其他處理（PY、GQ、SQ、KS和GG），sul1和sul2的豐度在堆肥全過程呈現(xiàn)逐漸上升趨勢，sul1在0-21 d先逐漸略微下降，之后在22-28 d平均豐度逐漸升高至1.91×10-2 copies/16S copies，最終豐度高于0 d（1.67×10-2 copies/16S copies）；而sul2則是在0-7 d先下降，然后上升至14 d達(dá)到最高值，然后又逐漸下降到第21天，22-28 d又出現(xiàn)轉(zhuǎn)折上升，最終豐度與sul1一樣高于第Od（升高了5.58%）。不同中藥渣對sul1和sul2削減不同，可能與不同中藥渣對sul-ARCs的潛在宿主細(xì)菌的抑制作用不同有關(guān)。

對tet-ARGs來說，不同中藥渣（BG、ZS、DG、PY、CQ、so、KS和GG）及各亞型（tetL、tetX、tetQ、tetO、tetW、tetM）變化較為一致，不同中藥渣處理間的差異不顯著（P＞0．05），整體規(guī)律呈現(xiàn)出在0-28 d時間軸上，tet-ARGs豐度為逐漸升高的趨勢，說明不同中藥渣均促進(jìn)了基質(zhì)中tet-ARGs的累積。對于其他幾類ARGs來說，在0-28 d間ARGs豐度的消長變化不顯著（P＞0．05），不同中藥渣對其均無有效的去除。以上結(jié)果說明，蚯蚓堆肥中添加中藥渣并不能有效降低所有ARGs的豐度，部分ARGs變化不顯著甚至可能存在升高的現(xiàn)象，這可能是由于牛糞中含有的ARGs受到中藥渣—牛糞中抗生素的脅迫，通過影響蚯蚓腸道菌群，進(jìn)一步影響了基質(zhì)中ARGs的產(chǎn)生與傳播。

2.4 中藥渣對牛糞蚯蚓堆肥過程MGEs的影響

MGEs是ARGs的重要載體，本研究檢測的與ARGs密切相關(guān)的MGEs（intI1、intI2和traA）中，接合性質(zhì)粒的遺傳標(biāo)記基因traA在所有樣品中均未檢出，但一類和二類整合子的整合酶基因intIl和intI2在蚯蚓牛糞堆肥過程中普遍存在，其檢出率分別為100.00%和55.60%；不同中藥渣添加處理組中intIl和intI2的豐度水平均較高，分別為1×10-3 copies/16S copies和1×10-4 copies/16S copies，除ZS和DG處理組外，其他處理組整合子intI1的豐度水平在蚯蚓牛糞堆肥過程中顯著高于intI2，高出1個數(shù)量級，上述結(jié)果表明在蚯蚓堆肥過程中整合子intI1可能是該過程中ARGs傳播的主要媒介，在ARGs水平轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。

BG、ZS、DG處理與CK相同（圖6），intI1的相對豐度總體上呈現(xiàn)先在0-14 d降低，然后在第21天升高達(dá)到最高值，第28天再下降的變化趨勢。第28天與第0天相比，BG、ZS和DG處理中intI1的相對豐度均有所下降，分別下降了58.58%、79.72%和84.76%，最終豐度均顯著低于CK，說明這3種中藥渣的添加有效地去除了intI1的豐度，與以前的研究結(jié)果一致。Duan等研究發(fā)現(xiàn)將蓮花清瘟中藥渣添加到污泥蚯蚓共堆肥中，與對照組相比，蓮花清瘟的添加組中intI1的豐度顯著降低了71.40%，這可能會進(jìn)一步導(dǎo)致與其緊密相關(guān)的ARGs含量水平的變化。其他中藥渣處理，intI1的豐度在第28天顯著升高并高于CK，其結(jié)果在一定程度上印證了這些中藥渣處理對部分ARGs的促進(jìn)作用。對于intI2而言，在整個堆肥過程中BG、DG和ZS處理與CK均呈現(xiàn)出逐漸降低的變化趨勢，并且在第28天未檢出，說明添加板藍(lán)根、紫蘇、當(dāng)歸中藥渣可明顯降低蚯蚓堆肥中MGEs的豐度。Guo等研究發(fā)現(xiàn)中藥渣能夠顯著降低雞糞高溫堆肥中MGEs的豐度，中藥渣也可以通過降低豬糞中MGEs的豐度，從而削弱ARGs的水平轉(zhuǎn)移和傳播，但是具體的中藥渣作用機(jī)制有待研究。

2.5 ARGs與MGEs的相關(guān)分析

研究表明，ARGs在環(huán)境微生物間的傳播和轉(zhuǎn)移與MEGs緊密相關(guān)，因此，對ARGs的絕對豐度與MGEs之間的相關(guān)性進(jìn)行了分析（圖7）。部分ARGs與MGEs（intI1和intI2）存在顯著相關(guān)性，表明MCEs可能促進(jìn)了ARGs在蚯蚓堆肥過程中的遷移和傳播。BG、DG和ZS處理，大多數(shù)ARGs和2種MGEs存在顯著相關(guān)性（P＜0．05），而GG、GQ、KS、PY和SQ組中ARGs與intI1和intI2的相關(guān)性大多不顯著（P＞0．05）。在BG、DG和ZS組中MGEs主要與sul-ARCs的相關(guān)性多呈顯著。intI1在BG、ZS、DG處理中與sul1和sul2多呈顯著正相關(guān)，尤其是BG中intI1與sul1（r=0.98，P＜0.001）呈極顯著相關(guān)，結(jié)果表明，sul1、sul2更易與intI1結(jié)合，依靠intI1進(jìn)行傳播，在蚯蚓堆肥中可以通過減少intI1來控制sul-ARGs削減。IntI2在BG、ZS、DG組中也多與sul-ARGs呈顯著正相關(guān)，尤其是ZS中intI2與sull（r=0.96，P＜0．001）呈極顯著相關(guān)，intI2在BG組和ZS組中與tetO呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.93，P＜0.05：r=- 0.94。P＜0.05）。以上結(jié)果中intI1和intI2在BG、ZS和DG組中與sul-ARGs的顯著正相關(guān)關(guān)系，與sul-ARGs和MGEs在堆肥結(jié)束第28 d較好的削減結(jié)果一致，解釋了sul-ARGs去除效果較好的原因。

在蚯蚓堆肥過程中，添加這3種中藥渣導(dǎo)致intI1和intI2在堆肥全過程中逐漸下降，從而通過MGEs進(jìn)一步導(dǎo)致了sul-ARGs豐度的降低。此外，有研究表明多種sul-ARGs與質(zhì)粒和其他新型MGEs相關(guān)。因此，中藥渣在牛糞蚯蚓堆肥中的添加可能通過降低相關(guān)MGEs的豐度，抑制基因水平傳播的速度，從而一定程度減少了ARGs的傳播。

3 結(jié)論

（1）添加不同中藥渣（3%）對蚯蚓的存活影響不同，當(dāng)歸和板藍(lán)根有利于蚯蚓存活，而枸杞、苦參、蒲公英和三七不利于蚯蚓存活。

（2）牛糞—蚯蚓堆肥過程中耐藥基因（ARGS）普遍存在，具有種類多樣、多種耐藥機(jī)制并存的污染特點(diǎn)，優(yōu)勢主導(dǎo)ARGs主要為sul-ARGs、tetX和str-ARGs。

（3）當(dāng)歸、紫蘇和板藍(lán)根對蚯蚓牛糞堆肥體系A(chǔ)RGs的去除效果較好，當(dāng)歸最佳。

（4）不同中藥渣對MGEs的影響有顯著差異，板藍(lán)根、紫蘇和當(dāng)歸對MGEs的去除效果較好，但其他種類中藥渣對intI1的增殖有促進(jìn)作用，存在增加ARGs傳播的風(fēng)險。

（責(zé)任編輯：葉飛）

基金項(xiàng)目：中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（Y2024QC28）；國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃課題（2022YFD1601103）；國家自然科學(xué)基 金項(xiàng)目（42077355）；天津市自然科學(xué)基金項(xiàng)目（23JCYBJC00250）