摘 要：為探討2 型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（ transglutaminase 2，TG2） 對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（ glioblastoma，GBM） 放射敏感性的影響。通過(guò)生信分析TG2 表達(dá)與膠質(zhì)瘤病人預(yù)后的關(guān)系，并分析了其在GBM 放射抵抗細(xì)胞株U251 中的水平;瞬時(shí)轉(zhuǎn)染得到TG2 過(guò)表達(dá)細(xì)胞（ U251-TG2） 或空載細(xì)胞（ U251-EV） ;CCK8 法繪制生長(zhǎng)曲線;transwell 檢測(cè)細(xì)胞遷移能力;不同劑量X 射線照射后，檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力、ROS 水平;并通過(guò)免疫熒光檢測(cè)γ-H2AX 水平;Westernblot 檢測(cè)自噬關(guān)鍵分子Beclin-1、LC3 及mTOR 磷酸化水平。結(jié)果顯示，TG2 高表達(dá)膠質(zhì)瘤患者具有更差的無(wú)進(jìn)展間隔期及總生存期，TG2 在放射抵抗型U251 中的表達(dá)顯著高于野生型U251;U251-TG2 細(xì)胞增殖能力高于U251-EV，且前者遷移能力高于后者;經(jīng)X 射線照射后，U251-TG2 細(xì)胞克隆形成率高于U251-EV，前者ROS 水平及γ-H2AX 熒光焦點(diǎn)數(shù)均低于后者;自噬關(guān)鍵蛋白Beclin-1 及自噬活性指標(biāo)LC3-Ⅱ / Ⅰ比值在U251-TG2 的水平均高于U251-EV，且前者mTOR 磷酸化水平低于后者。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，X 射線照射后，TG2 可能通過(guò)抑制mTOR 磷酸化的方式促進(jìn)自噬，進(jìn)而降低GBM 細(xì)胞U251 的放射敏感性。

關(guān)鍵詞：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤;2 型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶;放射敏感性

中圖分類號(hào)：Q274 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（ glioblastoma，GBM） 是一種高度侵襲性的原發(fā)性腦腫瘤，全世界每年發(fā)病約17萬(wàn)例。傳統(tǒng)的外科手術(shù)、放療以及同時(shí)輔以替莫唑胺，是治療 GBM 的主要方式，但過(guò)去的20 年并未觀察到GBM 生存率的顯著改善[1] ，中位生存期為12 ～ 15 個(gè)月，只有5% ～ 7%的患者存活超過(guò)5 年。放療是包括GBM 在內(nèi)的實(shí)體瘤傳統(tǒng)治療方式之一，可改善腫瘤的局部控制、提高患者生存期。但 GBM 對(duì)放療并不敏感，GBM 患者經(jīng)常出現(xiàn)放療抵抗，這是其死亡率高的主要原因之一[ 2-3] 。因此，闡明GBM 放射抵抗機(jī)制、尋找放射抵抗的關(guān)鍵靶點(diǎn)對(duì)于提高放療療效迫在眉睫。

2 型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（ transglutaminase 2，TG2）作為轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（transglutaminases， TGs））家族成員，主要催化蛋白質(zhì)的翻譯后修飾，產(chǎn)生具有穩(wěn)定功能的共價(jià)交聯(lián)[4] ，參與多種疾病生理過(guò)程。研究顯示，TG2 高表達(dá)與胃癌的病理分級(jí)密切相關(guān)，并與胃癌患者生存率較低有關(guān)，它可通過(guò)抑制TRIM21 介導(dǎo)的STAT1 泛素化降解促進(jìn)胃癌的惡性進(jìn)展[5] ; 下調(diào)TG2 可通過(guò)調(diào)節(jié) IL - 6/ JAK/STAT3 信號(hào)通路抑制 T 細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞增殖[6] ;抑制TG2 可通過(guò)調(diào)節(jié)c/ EBPβ 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的間質(zhì)轉(zhuǎn)化[7] ;等等。目前，TG2 與腫瘤放射敏感性相關(guān)研究鮮有報(bào)道。

前期，課題組通過(guò)TCGA 數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，TG2的表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后不良有關(guān);進(jìn)一步通過(guò)GEO 分析發(fā)現(xiàn)，TG2 mRNA 在人GBM 放射抵抗細(xì)胞株U251 中的水平顯著高于野生型細(xì)胞株，且U251 經(jīng)不同劑量X 射線照射后TG2 mRNA 呈不同程度上調(diào)，故本研究通過(guò)對(duì)GBM 細(xì)胞U251 行TG2 過(guò)表達(dá)，初步探討了X 射線作用下，TG2 對(duì)U251 細(xì)胞放射敏感性的影響及其可能機(jī)制。