摘 要：I亞群禽腺病毒近年來(lái)多地都有過(guò)相關(guān)報(bào)導(dǎo)，其傳播速度以及傳播范圍呈上升趨勢(shì)，給全球的養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大損失。本文對(duì)禽腺病毒分類、檢測(cè)方法以及疫苗研究等進(jìn)行綜述，旨在為該病的防控提供參考。

關(guān)鍵詞：I亞群禽腺病毒；流行病學(xué)；檢測(cè)方法；疫苗

中圖分類號(hào)：S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-1085（2024）07-0049-10

隨著現(xiàn)代專業(yè)化、集約化、規(guī)?；B(yǎng)禽業(yè)的不斷發(fā)展，我國(guó)已成為全球養(yǎng)禽大國(guó)，但禽病仍然是影響我國(guó)禽類成活率以及養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益的重要因素之一，尤其是一些重大或烈性的傳染性疾病[1]。禽腺病毒（Fowl adenoviruses，F(xiàn)AdV）是養(yǎng)禽業(yè)中危害較大的一種病毒，通常會(huì)引起禽類發(fā)生包涵體肝炎（Inclusion Body Hepatitis，IBH）、心包積液綜合征（Hepatitises Hydropericardium Syndromw，HPS）以及肌胃糜爛（Gastric erosion，GE）等病變[2]，該病感染初期沒(méi)有明顯的臨床癥狀，感染2～3 d開(kāi)始出現(xiàn)精神沉郁、食欲不振、羽毛雜亂、雙腳麻痹、排綠色糞便等癥狀。FAdV被認(rèn)為是一種弱毒性的病毒，它需要與免疫抑制病毒共同感染才能導(dǎo)致疾病的發(fā)生[3]，使感染率更高、死亡率增加。該疾病分布廣泛，據(jù)流行病學(xué)調(diào)查表明，2013年之前我國(guó)FAdv為散在性分布，2013年之后感染病例不斷增加，2015-2016年包涵體肝炎和心包積液綜合征在全國(guó)范圍內(nèi)傳播，其中蛋雞、種雞、麻雞、肉雞發(fā)病率較高[4]。2015-2022年禽腺病毒發(fā)病較為嚴(yán)重，其中山東、河北、江蘇、河南、黑龍江、云南等地均出現(xiàn)了病情。田甜等[5]人通過(guò)對(duì)不同省份疑似324份病例樣品進(jìn)行PCR檢測(cè)，陽(yáng)性檢測(cè)率為23.4%；Zhuang等[6]采集了多個(gè)省市1 920份拭子樣本，其中8.65%是來(lái)自明顯健康禽類的臨床樣本，PCR檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性。禽腺病毒可以廣泛、快速的傳播，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的損失。本文對(duì)禽腺病毒分類、檢測(cè)方法以及疫苗研究等方面進(jìn)行綜述，旨在為該病的防控提供參考。

1 "禽腺病毒概述

1.1 "禽腺病毒分類

該病毒因最開(kāi)始是從腺體組織中分離，故稱為腺病毒；又根據(jù)其形態(tài)結(jié)構(gòu)、免疫學(xué)特性和宿主范圍劃分為哺乳動(dòng)物腺病毒屬、禽腺病毒屬[7]。禽腺病毒是一類常見(jiàn)的具有免疫抑制作用的病毒，可以通過(guò)種源垂直傳播。根據(jù)其抗原性的不同，分為3個(gè)亞群（I、II、III）。其中，I亞群禽腺病毒病是一種由I亞群禽腺病毒引起的病毒性疾病，I亞群禽腺病毒根據(jù)基因組序列又分為A、B、C、D、E 5個(gè)基因型，通過(guò)交叉中和試驗(yàn)分析可將其分為12個(gè)血清型，其各血清型都可引起不同癥狀，如表1所示。

1.2 "形態(tài)結(jié)構(gòu)

禽腺病毒（FAdV）屬于腺病毒屬，是一種無(wú)包膜的雙鏈DNA病毒，基因組大小為43～45 kb，在負(fù)染色電子顯微鏡下為直徑70～90 nm的二十面體球形顆粒，核心外層的殼體由252個(gè)殼粒亞單位組成，其中240個(gè)非頂點(diǎn)（六鄰體Hexon）和12個(gè)頂點(diǎn)囊粒（五鄰體Penton），頂點(diǎn)殼粒帶有纖突[8-9]。Hexon、Penton和Fiber（纖突蛋白）是結(jié)構(gòu)蛋白，同時(shí)還有一些非結(jié)構(gòu)蛋白如33K、55K、100K、E1、E2、E3、E4等。

Hexon蛋白有P1和P2兩個(gè)功能區(qū)，同時(shí)還包含Loop1、Loop2、Loop3和Loop4四個(gè)環(huán)，Hexon在感染初期起重要作用，它具有可以中和抗體的抗原決定簇，與致病性有著密切的關(guān)系[10]。Penton和Fiber兩者密切相關(guān)，其五鄰體蛋白與細(xì)胞表面蛋白作用，使表面纖突增長(zhǎng)，從而促進(jìn)病毒侵入和內(nèi)化宿主細(xì)胞。Penton具有中和活性的作用，通過(guò)組織病毒粒子從酸性核內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)入細(xì)胞漿，該蛋白作為免疫原產(chǎn)生的抗體可以使病毒失活。纖突蛋白其N端與戊基非共價(jià)結(jié)合，I群禽腺病毒中FAdV-1、FAdV-4和FAdV-10都有纖突蛋白，分別為Fiber1和Fiber2，而其它血清型只有一種Fiber[11]。纖突蛋白決定病毒毒力，并且通過(guò)和細(xì)胞受體的相互作用在病毒與宿主細(xì)胞之間粘附起著重要作用[12]。

33K與衣殼的形成過(guò)程有關(guān)，是空殼病毒粒子的組成成分；55K在參與病毒組裝時(shí)基因組與殼粒間相互識(shí)別的過(guò)程中起重要作用；100K在宿主細(xì)胞病毒復(fù)制期間的蛋白運(yùn)輸中發(fā)揮重要作用；E1可啟動(dòng)早期基因，在對(duì)抗干擾素及腫瘤壞死細(xì)胞因子介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷中起作用；E2調(diào)節(jié)并且參與病毒DNA復(fù)制。

1.3 "理化性質(zhì)

禽腺病毒在環(huán)境中相當(dāng)穩(wěn)定，但容易被一般消毒劑滅活；凍結(jié)狀態(tài)下穩(wěn)定，可在-20 ℃長(zhǎng)期存活；耐酸，適宜pH5～6，所以在胃腸道內(nèi)可保持其活性；對(duì)氯仿、乙醚等脂溶劑不敏感，而在丙酮中不穩(wěn)定，0.1%甲醛就能使其失去活性[2]。

2 "禽腺病毒檢測(cè)方法

2.1 "病毒分離

2.1.1 "SPF雞胚分離法 "患病家禽的肝臟病毒載量最高，在無(wú)菌環(huán)境下采集患病家禽的肝臟，與滅菌生理鹽水以1：5的比例充分研磨成勻漿液，接種9～10日齡雞胚尿囊腔或卵黃囊內(nèi)，接種后雞胚胚體出現(xiàn)發(fā)育遲緩、肝臟出血，并最終以胚胎死亡為結(jié)果。收集死胚，無(wú)菌收集尿囊液，過(guò)濾除菌后再盲傳3代。張騰[13]通過(guò)雞胚尿囊腔和絨毛尿囊膜兩種接種方式分離培養(yǎng)FAdV，以尿囊腔的接種方式獲得了FAdV，并傳至12代。王翰[14]通過(guò)雞胚卵黃囊的接種方式分離培養(yǎng)，最終獲得了FAdV，并傳至4代。

2.1.2 "細(xì)胞分離法 "使用LMH細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，當(dāng)LMH單層細(xì)胞生長(zhǎng)到80%時(shí)，病毒懸液按照1：10的比例接種至LMH細(xì)胞并孵育，電鏡下可見(jiàn)感染病毒后的細(xì)胞出現(xiàn)CPE現(xiàn)象，脫落、感染的細(xì)胞內(nèi)存在核內(nèi)包涵體[15]：LMH細(xì)胞病變達(dá)到80%時(shí)，收獲細(xì)胞液，-80 ℃反復(fù)凍融3次，離心取上清液，將病毒懸液按照上述方法盲傳3代。魏鳳等[16]通過(guò)不同細(xì)胞培養(yǎng)FAdV，從而篩選出FAdV的適應(yīng)性細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)LMH細(xì)胞為最適宿主。趙蕾[17]等對(duì)FAdV-4 DC株在LMH細(xì)胞中的增殖條件進(jìn)行了優(yōu)化，為FAdV的細(xì)胞分離提供了參考。

2.2 "血清學(xué)診斷

血清學(xué)診斷是指基于抗原抗體的特異性反應(yīng)來(lái)檢測(cè)抗原或抗體的方法。常用的檢測(cè)方法主要包括瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、間接免疫熒光試驗(yàn)、病毒中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、膠體金檢測(cè)法等。各種血清學(xué)診斷方法的優(yōu)缺點(diǎn)以及應(yīng)用范圍見(jiàn)表2。

2.2.1 "瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) "瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（Agar gel immunodiffusion test，AGIDT）是水溶性抗原和相應(yīng)的抗體在富含電解質(zhì)的半固體瓊脂凝膠內(nèi)擴(kuò)散，特異性結(jié)合反應(yīng)生成沉淀線，通過(guò)肉眼觀察是否有一條白色的沉淀線來(lái)判斷試驗(yàn)結(jié)果。智海東[19]等研制的禽腺病毒1型瓊脂擴(kuò)散抗原，該抗原與其他禽類病原體的陽(yáng)性血清不產(chǎn)生反應(yīng)，但可以與禽腺病毒1型陽(yáng)性血清反應(yīng)；國(guó)紀(jì)壘[18]等使用禽腺病毒I亞群中12個(gè)血清型參考毒株的抗血清進(jìn)行雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，對(duì)分離株的血清型進(jìn)行鑒定。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)對(duì)象可以是抗原也可以是抗體，操作方便、成本低，常用于血清型的檢測(cè)，但是速度慢、敏感度較低。

2.2.2 "間接免疫熒光試驗(yàn) "間接免疫熒光試驗(yàn)（Indirect Immunofluorescence assay，IFA）是將熒光染料與抗體相連，與樣品中相應(yīng)的抗原結(jié)合形成熒光標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，可用熒光顯微鏡觀察進(jìn)行定性和定位。國(guó)紀(jì)壘[20]成功制備出FAV-I不同血清型的兔抗I群FAdV-1 IgG，并建立了間接免疫熒光快速檢測(cè)FAdV-I的方法。羅乃杰等[21]制備了雞抗FADV-4陽(yáng)性血清，通過(guò)間接免疫熒光檢測(cè)FAdv-4。IFA檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，操作繁瑣，不適合大批量檢測(cè)。

2.2.3 "病毒中和試驗(yàn) "中和試驗(yàn)（Neutralization test，NT）是將病毒和待檢測(cè)的血清在合適的條件下進(jìn)行孵育，然后將其接種于易感宿主或細(xì)胞上，通過(guò)中和作用檢測(cè)對(duì)機(jī)體或細(xì)胞的保護(hù)作用，常被應(yīng)用于血清型診斷等方面。中和試驗(yàn)有兩種方法，一種是固定病毒稀釋血清法，另一種是固定血清稀釋病毒法。Mu Y等[22]采用中和試驗(yàn)檢測(cè)接種重組病毒FAdV4-RFP_F1前、接種21 d后的雞血清，結(jié)果顯示感染FAdV4-RFP_F1重組病毒21 d后的雞可以產(chǎn)生高水平的中和抗體，平均滴度約為7.4log2，而在對(duì)照組中無(wú)法檢測(cè)到中和抗體。Guo Y等[23]使用表達(dá)EGFP-fiber-2融合蛋白的重組病毒FA4-EGFP來(lái)開(kāi)發(fā)檢測(cè)感染或接種后FAdV-4特異性中和抗體（NAbs）的滴度，它簡(jiǎn)化了NAbs的檢測(cè)過(guò)程，可以快速檢測(cè)疫苗接種后的免疫狀態(tài)，并且可以節(jié)省資金。

2.2.4 "酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) "酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一種在聚苯乙烯等固相載體上與可溶性抗原或抗體偶聯(lián)，與特殊標(biāo)記物結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對(duì)抗原或抗體的定性或者定量分析的檢測(cè)技術(shù)。常見(jiàn)ELISA檢測(cè)方法可分為間接ELISA、夾心ELISA和競(jìng)爭(zhēng)ELISA；根據(jù)檢測(cè)目的分為檢測(cè)抗原的ELISA和檢測(cè)抗體的ELISA。ELISA相比間接免疫熒光試驗(yàn)、中和試驗(yàn)更敏感、更快速。目前已有針對(duì)純化的病毒粒子作為包被抗原來(lái)檢測(cè)抗體的研究，Qing Pan等[24]使用高純度和高濃度的FAdV-4病毒粒子，建立了可以檢測(cè)12種血清型的抗體的通用ELISA方法。也有研究構(gòu)建重組蛋白作為抗原包被的，Xie S等[25]用FAdV-4的22K非結(jié)構(gòu)蛋白的66～88aa區(qū)作為包被抗原，建立了能有效區(qū)別感染FAdV-4后的雞和接種疫苗的雞。

2.2.5 "膠體金檢測(cè)方法 "膠體金（Immune colloidal gold technique，GICT）是一種常用的標(biāo)記技術(shù)，膠體金能夠利用抗原抗體特異性結(jié)合，使標(biāo)記物在相應(yīng)位置大量聚集，能夠通過(guò)肉眼進(jìn)行觀察。該檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)便、時(shí)間短、效率高等優(yōu)點(diǎn)，但靈敏度較差且無(wú)法進(jìn)行定量。Xie等[26]采用兩種單克隆抗體對(duì)抗FAdV-4的Fiber2，開(kāi)發(fā)了可以用于檢測(cè)FAdV-4的快速膠體金試紙條，其檢測(cè)限可低至0.1 μg/0.1 mL GST-Fiber-2蛋白和1×105TCID50/0.1 mL 的 FAdV-4；劉娜等[27]通過(guò)其制備的抗六鄰體蛋白1D3和3C2抗體作為檢測(cè)抗體和標(biāo)記抗體，制備了檢測(cè)FAdV-4的膠體金免疫層析試紙，具備良好的穩(wěn)定性、敏感性和特異性。

2.3 "分子生物學(xué)方法

目前主要通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、核酸探針?lè)ǖ确肿由飳W(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)禽腺病毒。它們的優(yōu)缺點(diǎn)以及應(yīng)用范圍，見(jiàn)表3。

2.3.1 "PCR技術(shù) "聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymer Chain Reaction，PCR）是在體外進(jìn)行已知基因擴(kuò)增的一種方法。PCR主要包括三個(gè)基本的反應(yīng)：變性、退火、延伸。肖躍強(qiáng)等[28]針對(duì)FAdV-1的保守區(qū)域基因進(jìn)行分析，建立了FAdV-1通用PCR檢測(cè)方法，檢測(cè)限為2.8×10 2 拷貝/μL。PCR技術(shù)具有檢測(cè)快、靈敏度較高、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)檢測(cè)環(huán)境要求較高，并且敏感性有限。PCR可與其他方法結(jié)合建立檢測(cè)方法，以提高PCR檢測(cè)的靈敏度。王利麗等[29]針對(duì)FAdV-4的Penton基因序列，建立了檢測(cè)FAdV-4的納米PCR方法，F(xiàn)AdV-4 的最低檢測(cè)限為54.0 拷貝/μL，靈敏度比普通PCR高10倍。Hou L等[30]通過(guò)結(jié)合PCR和斑點(diǎn)雜交，建立了檢測(cè)FAdV的方法，有效提高了靈敏度，是常規(guī)PCR的100倍。

2.3.2 "實(shí)時(shí)熒光定量PCR "實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time quantitative PCR，RT-qPCR）是在PCR基礎(chǔ)上添加熒光標(biāo)記的染料或探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記追蹤的檢測(cè)方法。qPCR相對(duì)于普通PCR更敏感、特異性更強(qiáng)。盧清俠等[31]通過(guò)對(duì)FAdV-4 Hexon 的基因序列進(jìn)行分析，針對(duì)其保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，構(gòu)建了SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法，最低檢測(cè)限為7.1×102拷貝/μL，與常規(guī)PCR相比，縮短了檢測(cè)時(shí)間，靈敏度提高。Pan Q[32]針對(duì)FAdV-4 Hexon L1區(qū)域建立探針實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)方法，與常規(guī)PCR相比靈敏度更高[32]。RT-qPCR技術(shù)特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高，但成本高。

2.3.3 "環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù) "環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增技術(shù)（LOOP-mediated isothermal amplification，LAMP）是以待測(cè)樣品核酸為模板，針對(duì)目的基因的六個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)四條引物，利用Bst-DNA聚合酶在恒溫條件下即可進(jìn)行擴(kuò)增，可以通過(guò)肉眼觀察目的基因是否存在（焦磷酸鎂白色沉淀）或加入核酸染料觀察是否有綠色熒光。薛曉巖等[33]針對(duì)FAdV-4 Hexon基因高度保守的區(qū)域設(shè)計(jì) LAMP 引物，并對(duì)反應(yīng)體系和反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了針對(duì)禽腺病毒4型環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增的檢測(cè)方法，可以檢測(cè)DNA最低限為7.5×10-8 ng/μL，靈敏度較常規(guī) PCR提高了100倍；Qing Fan等[34]根據(jù)ChPV NS、CIAL VP1和FAdV-4 Hexon基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)了三個(gè)引物組和復(fù)合探針，其復(fù)合探針用不同熒光基團(tuán)進(jìn)行標(biāo)記，建立了基于多重?zé)晒獾沫h(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，與先前PCR檢測(cè)結(jié)果一致。LAMP具有操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但其反應(yīng)所需的引物復(fù)雜，而且容易產(chǎn)生氣溶膠污染，后續(xù)的基因測(cè)序難度也較大，還需進(jìn)一步完善。

2.3.4 "核酸探針技術(shù) "核酸探針技術(shù)是基于核苷酸堿基順序互補(bǔ)的原理，通過(guò)特異的基因探針（可以識(shí)別特異性堿基序列并且?guī)в袠?biāo)記的單鏈DNA或者RNA分子）與待測(cè)定的靶序列互補(bǔ)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)序列的定性或定量分析[35]。根據(jù)探針的不同，分為放射性探針和非放射性探針。核酸探針技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)，但具有存放時(shí)間短、穩(wěn)定性小及放射性污染等缺點(diǎn)。侯力丹等[36]以12個(gè)血清型的I群FAdV參考毒株模板合成了12種Digoxigenin標(biāo)記核酸探針，并進(jìn)行了核酸斑點(diǎn)雜交檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其具備較高的靈敏度。

3 "禽腺病毒疫苗

禽腺病毒疫苗主要包括全病毒滅活疫苗、弱毒活疫苗、亞單位疫苗、基因疫苗等。I亞群禽腺病毒疫苗優(yōu)缺點(diǎn)及其應(yīng)用見(jiàn)表4。

3.1 "全病毒滅活疫苗

全病毒滅活疫苗是指將培養(yǎng)的病毒進(jìn)行加熱或使用化學(xué)試劑（通常使用β-丙內(nèi)酯或福爾馬林）使病毒失活制成的疫苗。疾病暴發(fā)后使用感染病毒的雞肝臟勻漿制作的滅活疫苗，能有效控制疫情的發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)15～18日齡進(jìn)行一次免疫接種或10日齡首次免疫，21日齡加強(qiáng)免疫，可以獲得很好的保護(hù)作用。Afzal M等[37]對(duì)10～12 日齡的雞群使用感染禽類的肝臟制成的疫苗單次免疫，結(jié)果表明接種疫苗雞群的死亡率比未接種的死亡率低，同樣疫情時(shí)接種疫苗的雞群比未接種的死亡率低；Chandra R等[38]通過(guò)給10～15日齡的禽類皮下注射感染禽類肝臟制備的疫苗（0.25 mL/羽）或滅活細(xì)胞培養(yǎng)的疫苗（10 3.5 LD 50 /羽），在疫情暴發(fā)時(shí)降低了死亡率[38]。

肝臟勻漿滅活疫苗雖然能夠防治病毒感染，但是使用肝臟勻漿容易混雜或引發(fā)細(xì)菌及其它污染，并且疫苗中抗原含量不一，其免疫效果不穩(wěn)定。有研究表明，細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和SPF雞具有嚴(yán)格的生物安全性和較高的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，是開(kāi)發(fā)滅活疫苗的更好選擇。Pan Q等[39]用甲醛對(duì)新型基因型的毒株滅活處理，開(kāi)發(fā)了一種新型基因型FAdV-4油乳劑滅活疫苗，免疫SPF雞可以產(chǎn)生高水平的抗體，為感染新基因型的FAdV-4提供了全面的保護(hù)。

3.2 "弱毒活疫苗

弱毒活疫苗是通過(guò)物理、化學(xué)或生物手段對(duì)病毒進(jìn)行多次傳代，使其毒力減弱，但保留了較好的免疫原性和遺傳特性，可用于疫苗研制。與肝組織勻漿滅活苗相比，該疫苗具有較強(qiáng)的免疫保護(hù)作用，損傷更小，效果更好。MansoorM K等[40]開(kāi)發(fā)了一種針對(duì)HPS的弱毒疫苗，用第16代HSV弱毒疫苗或商業(yè)化肝勻漿滅活疫苗免疫14日齡、無(wú)HSV（單純皰疹病毒）母源抗體的肉雞，免疫后24 d，弱毒疫苗組肉雞獲得了94.73%的保護(hù)，而肝臟勻漿滅活疫苗組肉雞獲得55%的保護(hù)，結(jié)果說(shuō)明弱毒疫苗對(duì)雞群保護(hù)效果更好。Quan Xie等[41]針對(duì)重組病毒FA4-EGFP制備的弱毒活疫苗，對(duì)于FAdV-4致死攻擊提供了有效的保護(hù)，與滅活疫苗相比更早產(chǎn)生了高滴度的中和抗體[41]。雖然弱毒疫苗免疫效果良好，但是可能會(huì)面臨毒株毒力返強(qiáng)、強(qiáng)毒株重組的危險(xiǎn)，并且在生產(chǎn)過(guò)程中，有些毒株毒力強(qiáng)，可能造成生物安全隱患。

3.3 "亞單位疫苗

滅活疫苗和弱毒疫苗盡管可以有效預(yù)防病毒的感染，但是存在病毒滅活不充分、毒株毒力返強(qiáng)、強(qiáng)毒株重組的危險(xiǎn)等，基因工程亞單位疫苗的優(yōu)勢(shì)在于它可以消除這些危險(xiǎn)，無(wú)病毒核酸，無(wú)致病性且不需要滅活，安全性能更高。亞單位疫苗是從病毒、細(xì)菌中分離出的特定蛋白，采用化學(xué)分解或控制蛋白質(zhì)水解的方式，從中篩選出具有一定免疫作用的片段，從而制成疫苗。Hexon、Penton和Fiber都是禽腺病毒的重要結(jié)構(gòu)蛋白，Wang X等[42]選擇FAdV-4的衣殼蛋白Fiber 1、Fiber 2、五鄰體蛋白和六鄰體蛋白在大腸桿菌或桿狀病毒表達(dá)體系中進(jìn)行表達(dá)，不同劑量接種，比較其免疫保護(hù)效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Fiber 2免疫保護(hù)效果最佳，當(dāng)疫苗劑量增加時(shí)保護(hù)作用增強(qiáng)。袁楓等[43]通過(guò)畢赤酵母表達(dá)FAdV-4 Fiber2蛋白制備的亞單位疫苗免疫21日齡SPF雞，發(fā)現(xiàn)對(duì)FAdV-4強(qiáng)毒株GD616產(chǎn)生100%的保護(hù)[43]。雖然亞單位疫苗能夠彌補(bǔ)滅活疫苗和弱毒疫苗的缺點(diǎn)，也能夠產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)，但是蛋白表達(dá)和純化比較復(fù)雜，其抗原性受到所選的表達(dá)系統(tǒng)影響，在大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)會(huì)受到限制。

3.4 "基因疫苗

基因疫苗也被稱為DNA疫苗，免疫應(yīng)答是將一種外源性基因通過(guò)真核表達(dá)載體直接接種到動(dòng)物體內(nèi)，以激發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)特異性的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。龐洪澤等[44]將FAdV-4的Hexon和Penton基因串聯(lián)，成功構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a-HP，并制備成核酸疫苗，免疫7日齡和14日齡雛雞，發(fā)現(xiàn)其能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生FAdV-4特異性抗體，抗體水平在免疫后28日齡最高，免疫劑量為100 μg較好。張曉歡等[45]將Fiber2與真核表達(dá)載體pcDNA3.1+進(jìn)行連接，并且加入了雞細(xì)胞因子IL-2作為基因佐劑，成功構(gòu)建了pcDNA3.1-Fiber2重組質(zhì)粒、pcDNA3.2-IL2重組質(zhì)粒和pcDNA3.1-Fiber2IL2融合重組質(zhì)粒，對(duì)14日齡SPF雞進(jìn)行免疫，結(jié)果表明均能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生FAdV-4抗體，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)，并且細(xì)胞因子IL-2能夠增強(qiáng)免疫效果?；蛞呙缗c傳統(tǒng)疫苗相比，具有無(wú)生產(chǎn)性感染風(fēng)險(xiǎn)、毒力不返強(qiáng)、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

3.5 "禽腺病毒卵黃抗體

卵黃抗體是禽類通過(guò)免疫適量特定抗原后產(chǎn)生的特異性抗體，具有敏感性好、特異性強(qiáng)、制備簡(jiǎn)便和成本低等優(yōu)點(diǎn)。卵黃抗體不僅可以用于治療，還可以用于預(yù)防。楊曉偉[46]制備的卵黃抗體，接種劑量0.3 mL/只，能對(duì)15日齡肉雞產(chǎn)生100%保護(hù)而不發(fā)??；按照0.8 mL/只和1 mL/只注射病雞，治愈率分別為86.7%和96.7%。魏若瑤等[47]使用禽腺病毒三價(jià)油乳劑滅活疫苗接種蛋雞，研制出一種防治FAdV-2、FAdV-4和FAdV-8b的卵黃抗體；杜東穎等[48]通過(guò)誘導(dǎo)FAdV-4的Fiber2蛋白的表達(dá)、純化后制備免疫原，免疫產(chǎn)蛋雞獲得卵黃抗體，將其接種SPF雞進(jìn)行免疫效果評(píng)估，結(jié)果表明接種7 d后對(duì)感染4型禽腺病毒的雞群產(chǎn)生90%～100%的保護(hù)。

4 "展望

隨著I 亞群FAdV流行趨勢(shì)的逐漸擴(kuò)大，它對(duì)禽類成活率以及養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益產(chǎn)生很大的影響。FAdV血清型眾多且彼此之間交叉保護(hù)性弱，導(dǎo)致其廣泛傳播，未來(lái)在多血清型FAdV檢測(cè)技術(shù)、預(yù)防多種血清型高效價(jià)的FAdV滅活疫苗、基因工程疫苗以及卵黃抗體等相關(guān)有潛力的控制策略上需加大研發(fā)力度，為有效防控FAdV提供可靠的保障。

參考文獻(xiàn)：

[1] 程小果， 王慧， 王成舉. 雞重要疫病流行預(yù)測(cè)與防控策略[J]. 北方牧業(yè)， 2022（08）：26-27.

[2] 劉吉山， 孫培姣， 于雪， 等. Ⅰ群禽腺病毒及其疫苗研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)， 2020，28（01）：108-116.

[3] MO K K， LYU C F， CAO S S， et al. Pathogenicity of an FAdV-4 isolate to chickens and its genomic analysis[J]. Journal of Zhejiang University-Science B， 2019，20（9）：740-752.

[4] 林婷婷， 張翔， 朱偉民. 我國(guó)Ⅰ群禽腺病毒流行趨勢(shì)和防控要點(diǎn)[J]. 家禽科學(xué)， 2021，324（10）：17-19.

[5] 田甜， 劉琳敏， 路文彬， 等. 2015-2022年我國(guó)部分地區(qū)Ⅰ群禽腺病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)， 2023，53（01）：57-63.

[6] ZHUANG Q， WANG S， ZHANG F， et al. Molecular epidemiology analysis of fowl adenovirus detected from apparently "healthy birds in eastern China[J]. BMC Veter Research， 2023，19（1）：5.

[7] 朱慶賀， 張鵬宇， 王觀悅， 等. 血清4型禽腺病毒研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)獸藥雜志， 2018，52（11）：80-85.

[8] Benk? M， Aoki K， Arnberg N， et al. ICTV Virus Taxonomy Profile： Adenoviridae 2022[J]. Journal of General Virology， 2022，103（3）：001721

[9] 萬(wàn)云云， 王增賢. 星形膠質(zhì)細(xì)胞的永生化研究[J]. 泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2006（08）：764-766.

[10] BURNETT R M， Grütter M G， WHITE J L. The structure of the adenovirus capsid. I. An envelope model of hexon at 6 A "resolution[J]. Journal of Molecular Biology， 1985，185（1）：105-123.

[11] HESS M， CUZANGE A， RUIGROK R W， et al. The avian adenovirus penton： two fibres and one base[J]. J Mol Biol， 1995，252（4）：379-385.

[12] FUSCHIOTT P， SCHOEHNG， FENDER P， et al. Structure of the dodecahedral penton particle from human adenovirus type 3[J]. Journal of Molecular Biology， 2006，356（2）：510-520.

[13] 張騰. 禽4型腺病毒的分離鑒定及其華中地區(qū)分子流行病學(xué)調(diào)查[D]. 鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2018.

[14] 王瀚. I群禽腺病毒血清4型GX-1株全基因組序列分析與致病性研究[D]. 廣州：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2022.

[15] 楊秉樺. Ⅰ群禽腺病毒的分離鑒定和三價(jià)卵黃抗體的制備及應(yīng)用[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2023.

[16] 魏鳳， 張文通， 苗立中， 等. 一株雞源禽腺病毒4型的分離鑒定及免疫原性研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)， 2021（08）：88-91.

[17] 趙蕾， 張建偉， 李林， 等. Ⅰ群4型禽腺病毒DC株滅活苗對(duì)流行毒株的保護(hù)力試驗(yàn)[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展， 2019，40（09）：34-37.

[18] 國(guó)紀(jì)壘， 刁有祥， 薛聰， 等. Ⅰ群禽腺病毒山東株的分離鑒定及Hexon基因的克隆與分析[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2012，32（12）：1773-1777.

[19] 智海東， 解生亮， 楊志， 等. 禽腺病毒Ⅰ型瓊脂擴(kuò)散抗原的研制及應(yīng)用[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)， 2009，39（08）：718-722.

[20] 國(guó)紀(jì)壘. I群禽腺病毒山東株的分離鑒定及其致病性研究[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2012.

[21] 羅乃杰， 賴漢漳， 劉玲， 等. Ⅰ群4型禽腺病毒感染雞陽(yáng)性血清的制備及其在IFA中的應(yīng)用[J]. 家禽科學(xué)， 2021（08）：45-49.

[22] MU Y， XIE Q， WANG W， et al. A Novel Fiber-1-Edited and Highly Attenuated Recombinant Serotype 4 Fowl "Adenovirus Confers Efficient Protection Against Lethal Challenge[J]. Frontiers in Vetinart Science， 2021（08）：759418.

[23] GUO Y， XIE S， XU Z， et al. An Efficient and Rapid Assay for Detecting Neutralizing Antibodies Against "Serotype 4 Fowl Adenovirus[J]. Frontiers in Vetinart Science， 2022，9：867697.

[24] PAN Q， WANG J， GAN Y， et al. Development and application of a novel ELISA for detecting antibodies against "group I fowl adenoviruses[J]. Applied Microbiol and Biotechnolgy， 2020，104（2）：853-859.

[25] XIE S， SHEN Q， ZHANG W， et al. An efficient peptide-based ELISA for differentiating fowl adenovirus 4-infected "chickens from vaccinated chickens[J]. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation， 2021，33（4）：762-766.

[26] XIE S， ZHANG J， CHEN H， et al. Development of colloidal gold-based test strip for rapid detection of serotype 4 "fowl adenovirus[J]. Journal of Virological Methods， 2021，296：114231.

[27] 劉娜. 血清4型禽腺病毒五鄰體和六鄰體蛋白單克隆抗體的制備及膠體金試紙的研制[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2018.（10）.27244

[28] 肖躍強(qiáng)， 于雪， 劉吉山， 等. Ⅰ亞群禽腺病毒通用PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2018，40（03）：206-210.

[29] 王利麗， 鄭麗， 李富強(qiáng)， 等. 禽腺病毒血清4型納米PCR檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2019，41（07）：701-704.

[30] HOUL， SU Q， ZHANG Y， et al. Development of a PCR-based dot blot assay for the detection of fowl adenovirus[J]. Poultry Science， 2022，101（1）：101540.

[31] 盧清俠， 金前躍， 馮麗麗， 等. 禽腺病毒血清4型SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2022，51（12）：131-138.

[32] PAN Q， YANG Y， SHI Z， et al. Different Dynamic Distribution in Chickens and Ducks of the Hypervirulent， Novel "Genotype Fowl Adenovirus Serotype 4 Recently Emerged in China[J]. Frontiers in Microbiology， 2017（08）：1005.

[33] 薛曉巖， 張振興， 季佳， 等. 禽腺病毒4型環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法的建立[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)， 2022：1-8.DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0038.

[34] FAN Q，XIE Z，ZHANG Y ， et al. A multiplex fluorescence-based loop-mediated isothermal amplification assay for identifying chicken parvovirus， chicken infectious anaemia virus， and fowl aviadenovirus serotype 4.[J]. Avian pathology ： journal of the W.V.P.A， 2023，52（2）：1-9

[35] 崔楊.雞包涵體肝炎病毒部分血清型DNA探針的制備及其流行病學(xué)調(diào)查[D]. 揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)， 2012.

[36] 侯力丹， 張亞文， 蘇奇， 等. 應(yīng)用多重Digoxigenin標(biāo)記探針在核酸斑點(diǎn)雜交檢測(cè)中識(shí)別Ⅰ群禽腺病毒的感染[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2020，40（12）：2305-2310.

[37] AFZAL M， AHMAD I. Efficacy of an inactivated vaccine against hydropericardium syndrome in broilers[J]. Veterinary Record， 1990，126（3）：59-60.

[38] CHANDRA R， SHUKLA S K， KUMAR M. The hydropericardium syndrome and inclusion body hepatitis in domestic fowl[J]. Tropical Animal Health and Production， 2000，32（2）：99-111.

[39] PAN Q， YANG Y， GAO Y， et al. An Inactivated Novel Genotype Fowl Adenovirus 4 Protects Chickens against the "Hydropericardium Syndrome That Recently Emerged in China[J]. Viruses， 2017，9（8）.216-216

[40] MANSOOR M K， HUSSAIN I， ARSHAD M， et al. Preparation and evaluation of chicken embryo-adapted fowl adenovirus serotype 4 "vaccine in broiler chickens[J]. Tropical Anim Health and Production， 2011，43（2）：331-338.

[41] XIE Q，WANG W，KAN Q，et al. FAdV-4 without Fiber-2 is a Highly Attenuated and Protective Vaccine Candidate.[J]. Microbiology spectrum， 2022，（01）：143621

[42] WANG X， TANG Q， CHU Z， et al. Immune protection efficacy of FAdV-4 surface proteins fiber-1， fiber-2， hexon and "penton base[J]. Viruses Reseach， 2018，245：1-6.

[43] 袁楓， 宋慧琦， 侯磊， 等. 禽腺病毒血清4型Fiber-2蛋白在畢赤酵母中的優(yōu)化表達(dá)及其免疫原性分析[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2022，27（02）：132-142.

[44] 龐洪澤. 禽腺病毒4型核酸疫苗的構(gòu)建及免疫效果初步評(píng)價(jià)[D]. 秦皇島：河北科技師范學(xué)院， 2019.

[45] 張曉歡. FAdV-4 pcDNA3.1-Fiber2-IL2重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其免疫效果的初步評(píng)價(jià)[D]. 沈陽(yáng)：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2020.

[46] 楊曉偉， 楊萬(wàn)秋， 陸婧， 等. 禽腺病毒Ⅰ群血清4型的分子鑒定及其卵黃抗體的防控效果[J]. 畜牧與獸醫(yī)， 2018，50（01）：113-117.

[47] 魏若瑤. 雞Ⅰ群禽腺病毒三價(jià)滅活苗及卵黃抗體的研制[D]. 揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)， 2020.

[48] 杜東穎， 黃曉靜， 劉武杰， 等. 禽腺病毒（C種，4型）精制卵黃抗體研制及免疫效果評(píng)價(jià)[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2021，41（05）：895-899.

Current Status and Research Progress of Fowl Adenovirus Group I

Xiao Yaqing1，2， Dong Wenwen2， Yuan Xiaoyuan2， Li Guiming2， Liu Mingchao1 " " ， Meng Kai2

（1.School of Agricultural University of Hebei animal medicine，Baoding "071000，China;

2.Poultry Institute;Shandong Academy of Agricultural Sciences，Jinan "250100，China）

Abstract： In recent years， fowl adenovirus "group I "has been reported in many places， and its propagation speed and range are on the rise， causing huge losses to the global poultry industry. In this paper， the overview， detection methods and vaccine research of avian adenovirus were reviewed in order to provide reference for the poultry industry on the disease.

Keywords： Fowl Adenovirus Group I; Epidemiology; Detection method;Vaccine