摘 要：本研究旨在評價錦心口服液對人工感染雞大腸桿菌病治療效果。將800只21日齡科寶肉雞隨機分為4組，即空白對照組、模型組、抗生素對照組和錦心口服液組。除空白對照組外，其它各組雞只通過胸肌注射大腸桿菌菌液方式進行人工感染?？股貙φ战M和錦心口服液組肉雞通過每日集中飲水2次進行給藥，連續(xù)用藥7 d。結(jié)果顯示，經(jīng)抗生素或錦心口服液治療后，感染肉雞的死亡率顯著降低（Plt;0.05）。與抗生素對照組相比，錦心口服液組治愈率和保護率顯著升高（Plt;0.05），死亡率顯著下降（Plt;0.05）。錦心口服液組肉雞體重和日采食量均顯著高于模型組和抗生素對照組（Plt;0.05），顯著低于空白對照組（Plt;0.05）?？瞻讓φ战M肉雞肝臟和血液均未檢測出大腸桿菌，錦心口服液組肉雞肝臟和血液大腸桿菌相對含量顯著低于模型組和抗生素對照組（Plt;0.05），錦心口服液組肉雞治療后血清IgM、IgA、IgG含量均顯著高于模型組和抗生素對照組（Plt;0.05），顯著低于空白對照組（Plt;0.05）。綜上所述，錦心口服液對雞大腸桿菌病具有較好的治療效果，可有效改善病雞的生長性能、提高免疫力。

關(guān)鍵詞：大腸桿菌病；錦心口服液；生長性能；免疫因子

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：A 文章編號：1673-1085（2024）11-0005-06

致病性大腸埃希氏桿菌感染所引起的大腸桿菌病是全球禽業(yè)養(yǎng)殖所面臨的一個大問題，許多禽類疾病是由大腸桿菌病引發(fā)的[1-2]?，F(xiàn)階段西獸醫(yī)臨床主要以阿莫西林、新霉素、土霉素以及恩諾沙星類的抗生素治療雞大腸桿菌病，但抗生素治療不僅易產(chǎn)生耐藥性、治療效果差、治療周期長、存在藥物殘留等問題，而且病菌在被抗生素抑制過程中亦會滅殺大量有益微生物，從而降低患病雞體內(nèi)免疫能力[3-5]。中獸醫(yī)認為該病主要是因為雞體內(nèi)正氣不足而引起免疫力下降，致使致病性大腸桿菌快速繁殖，導致雞只患病。采用中藥治療，可以快速補充患病雞體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)，強化其體內(nèi)免疫能力，使患病雞能夠快速恢復健康狀態(tài)。中藥防治雞大腸桿菌病越來越受到重視[6-8]。武怡荷等[6]比較復方中藥藥液和氟苯尼考藥液治療雞大腸桿菌病的效果，發(fā)現(xiàn)復方中藥藥液治療雞大腸桿菌病治愈率顯著高于氟苯尼考藥液，且毒副作用更低，可能與復方中藥藥液在抑菌的同時可增強肉雞免疫功能有關(guān)。錦心口服液由穿心蓮、虎杖以及地錦草等數(shù)味中藥提取制備而成，已經(jīng)被證實具有抗炎、抗菌血癥以及防治輸卵管炎等功效[9-11]，但目前關(guān)于錦心口服液有效治療雞大腸桿菌病的臨床研究報道較少。本研究通過與阿莫西林、新霉素等抗生素作對照治療人工感染雞大腸桿菌病，進一步驗證錦心口服液的治療效果，為錦心口服液用于雞大腸桿菌病的治療提供參考依據(jù)。

1" 材料與方法

1.1" 材料

1.1.1" 試驗動物及藥品" 21日齡科寶肉雞800只，購自科寶（湖北）育種有限公司。大腸桿菌O78，編號CVCC1555，購自中國微生物菌種保藏中心。復方阿莫西林粉和硫酸新霉素可溶粉，購自保定冀中藥業(yè)有限公司。錦心口服液，由北京生泰爾科技股份有限公司提供。

1.1.2" 主要試劑及儀器" 磁珠法全血動物組織基因組DNA提取試劑盒、磁珠法動物組織基因組DNA提取試劑盒和大腸桿菌（O1）PCR檢測試劑盒，均購自天根生化科技（北京）有限公司；雞免疫球蛋白M（IgM）ELISA檢測試劑盒、雞免疫球蛋白A（IgA）ELISA檢測試劑盒和雞免疫球蛋白G（IgG）ELISA檢測試劑盒，均購自上海圓創(chuàng)生物科技有限公司；C1000/S1000 PCR儀，美國Bio-Rad公司；TDZ4A-WS低速自動平衡離心機，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司；HBS-1096A酶標分析儀，南京德鐵實驗設(shè)備有限公司。

1.2" 試驗方法

1.2.1" 動物分組與治療" 將21日齡健康科寶肉雞800只隨機分為空白對照組、模型組、抗生素對照組和錦心口服液組4個組，每組200只。除空白對照組外，其余3組肉雞采用胸肌注射大腸桿菌菌液的方式進行人工感染，注射劑量為大腸桿菌菌液0.6×109 CFU/mL，0.5 mL/只。待所有雞只攻菌后立即給藥，抗生素對照組按照每1 L水加入0.5 g復方阿莫西林粉和1.0 g硫酸新霉素可溶粉，錦心口服液組按照每1 L水加入2.0 mL藥液，分別每日集中飲水2次，每次2 h，連續(xù)治療7 d。空白對照組和模型組肉雞飲水中不添加任何藥物。4組肉雞均自由采食，飼料為顆粒料，治療期間保持雞舍溫度27～29 ℃，濕度控制在55%以上。

1.2.2" 臨床治療效果" 治療7 d后，記錄每組雞只精神狀態(tài)、飲食和糞便情況等臨床特征；記錄雞只死亡情況。用藥結(jié)束后，發(fā)病雞只的精神狀態(tài)、飲食欲、排糞恢復正常，臨床癥狀完全消失評定為臨床治愈。判定指標計算公式：

治愈率=各組治愈雞只數(shù)量/各組雞只

總數(shù)×100%

保護率=各組存活雞只數(shù)量/各組雞只

總數(shù)×100%

死亡率=各組死亡雞只數(shù)量/各組雞只

總數(shù)×100%

1.2.3" 肉雞生長性能測量" 所有肉雞在治療前和治療7 d后，稱量體重。治療6 d后，每組存活肉雞給予足量的飼料，記錄第7天每組飼料減少的量，除以每組存活的肉雞數(shù)量得到每組肉雞日采食量。

1.2.4" 免疫學指標測定" 4組肉雞治療7 d后，每組隨機選取20只治愈的肉雞，采集翅靜脈血，1 000 g離心10 min分離血清，分別使用雞IgM、IgA、IgG檢測試劑盒檢測血清IgM、IgA、IgG含量。

1.2.5" 大腸桿菌檢測" 4組肉雞治療7 d后，每組隨機選取20只臨床治愈的肉雞，采集肝臟和血液，分別使用磁珠法全血動物組織基因組DNA提取試劑盒和磁珠法動物組織基因組DNA提取試劑盒提取肉雞肝臟和全血基因組DNA，根據(jù)大腸桿菌（O1）PCR檢測試劑盒說明書對肉雞肝臟和雞血基因組DNA進行PCR檢測。

1.3" 統(tǒng)計學分析方法

研究數(shù)據(jù)使用SPSS20.0軟件進行記錄和統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料單位表示為百分比（%），結(jié)果以“均值±標準差”表示。采用卡方檢驗比較組間計數(shù)資料差異性，采用單因素方差分析對多組間計量資料進行統(tǒng)計分析，Duncan法對數(shù)據(jù)進行多重比較。Plt;0.05表示差異顯著，具有統(tǒng)計學意義。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 錦心口服液治療感染大腸桿菌肉雞的療效

試驗期間，空白對照組雞只精神狀態(tài)良好，飲食欲正常，糞便性狀無異常改變，未出現(xiàn)死亡雞只；其他試驗組雞只均有不同程度發(fā)病，雞只排灰白色或黃色稀水樣糞便，羽毛雜亂，呆立不動，嗜睡，飲食欲減少，個別雞只臥地不起，呼吸困難，甚至死亡。模型組雞只感染大腸桿菌后，48 h雞只出現(xiàn)大量死亡，病情嚴重，至試驗結(jié)束時，存活雞只仍有飲食欲差、精神沉郁、消瘦等臨床癥狀。

由表1可知，模型組大腸桿菌感染肉雞7 d死亡率為51.0%，經(jīng)抗生素或錦心口服液治療后，感染肉雞的死亡率顯著降低（Plt;0.05）。與抗生素對照組相比，錦心口服液組治療大腸桿菌感染肉雞的效果更好，治愈率和保護率顯著升高（Plt;0.05），死亡率顯著下降（Plt;0.05）。

2.2" 錦心口服液對感染大腸桿菌肉雞生長性能的影響

由表2可知，模型組感染大腸桿菌的肉雞體重和日采食量均較空白對照組顯著降低（Plt;0.05），而感染大腸桿菌的肉雞，經(jīng)抗生素治療后體重和日采食量顯著增加（Plt;0.05）；經(jīng)錦心口服液治療后，感染肉雞的體重和日采食量均顯著增加，治療效果明顯好于抗生素對照組（Plt;0.05）。

2.3" 錦心口服液對感染大腸桿菌肝臟和血液大腸桿菌含量的影響

由表3可知，模型組、抗生素組肉雞的肝臟和血液大腸桿菌檢出率均為100%，錦心口服液組肉雞肝臟和血液大腸桿菌檢出率分別為90%和35%，而且錦心口服液組在肝臟和血液大腸桿菌的相對含量顯著低于抗生素對照組（Plt;0.05），尤其在降低血液中大腸桿菌方面作用顯著。

2.4" 錦心口服液對感染大腸桿菌肉雞免疫指標的影響

由表4可知，空白對照組肉雞血清IgM、IgA、IgG含量均顯著高于大腸桿菌感染組（Plt;0.05）。經(jīng)抗生素或錦心口服液治療7 d后，感染肉雞血液中IgM、IgA、IgG含量均顯著上升（Plt;0.05），錦心口服液組肉雞血清IgM、IgA、IgG含量顯著高于抗生素對照組（Plt;0.05）。

3" 討論

雞大腸桿菌病是由于感染致病性大腸埃希氏桿菌而引起的一種細菌性傳染病，發(fā)病雞主要表現(xiàn)為精神萎靡、食欲下降、糞便呈灰白色或黃色稀水樣[1-2]。大腸桿菌作為雞大腸內(nèi)的常在菌群，其中約10%～15%為致病性大腸桿菌，所以在雛雞破殼時有可能感染致病性大腸桿菌，另外在隨后的飼養(yǎng)中一旦出現(xiàn)環(huán)境突變等應激因素極易誘發(fā)雞大腸桿菌病。本研究通過胸肌注射大腸桿菌菌液人工誘發(fā)雞大腸桿菌病，并通過集中飲水的方式給予藥物治療，保證發(fā)病模型和治療的一致性。結(jié)果顯示，錦心口服液治療大腸桿菌病感染肉雞的治愈率和保護率均顯著高于抗生素對照組、死亡率顯著低于抗生素對照組，這表明本次試驗中錦心口服液治療雞大腸桿菌病效果優(yōu)于抗生素。

抗生素治療是現(xiàn)階段雞大腸桿菌病的主要防治手段。然而，同一養(yǎng)雞場反復使用抗生素治療雞大腸桿菌病，極易引起耐藥性，導致抗生素用量逐漸加大卻不能達到預期治療效果[12-13]。因此，近年來越來越多的研究探討中草藥防治雞大腸桿菌病的可能性[14-15]。中獸醫(yī)理論認為，全封閉或半封閉的雞場養(yǎng)殖模式會導致雞舍內(nèi)濕度大，長時間則會引起濕邪入侵，進而引起疾病，所以雞大腸桿菌病被認為是“濕病”。因此，中醫(yī)對雞大腸桿菌病的治療以清熱解毒、涼血止津以及止痢燥濕為主[14]。錦心口服液內(nèi)含虎杖、穿心蓮、黃芩、土黃蓮以及地錦草等數(shù)種中藥，虎杖歸肝、膽、肺經(jīng)，具有祛風利濕之功效[16-17]；穿心蓮歸心肺、大腸、膀胱經(jīng)，具有清熱涼血之功效，已被現(xiàn)代藥理學證實具有抑制真菌、細菌和抗炎、解熱的功能[18-19]；黃芩歸肺、膽、脾、大腸、小腸經(jīng)，具有清熱燥濕和瀉火解毒的功效，對濕溫、暑濕、濕熱痞滿等癥具有較好的治療作用[20-21]；土黃蓮歸肝、胃、大腸經(jīng)，具有清熱燥濕、祛濕解毒、瀉火滋陰的功效[22-23]。綜上可知，錦心口服液多以祛濕解熱為主，輔以抑菌解熱抗炎，能對雞大腸桿菌病起到較好的治療功效。

另外，錦心口服液內(nèi)含的五種中草藥均已經(jīng)被證實具有抑菌和抗感染的功能。Dai等[18]在總結(jié)穿心蓮以及其主要活性化合物穿心蓮內(nèi)酯時指出，穿心蓮是傳統(tǒng)的抗炎和抗菌類中草藥，其主要成分穿心蓮內(nèi)酯被證實對溶血性乙型鏈球菌、肺炎雙球菌、金秋菌、大腸埃希氏桿菌以及傷寒桿菌等多種細菌具有抑制作用[24-25]。此外，地錦草的水煎提取物也被發(fā)現(xiàn)具有廣譜抗菌作用，能抑制金黃色葡萄球菌、白喉桿菌、大腸埃希氏桿菌、綠膿桿菌以及腸炎桿菌等多種細菌、真菌的生長繁殖。而在本研究中也已驗證錦心口服液對大腸桿菌的抑菌效果，不僅可以改善雞大腸桿菌病癥狀，而且抑菌效果也優(yōu)于抗生素組。

多成分、多靶點和多途徑是中草藥相較于只具有單一功能抗生素的顯著優(yōu)勢。本次試驗發(fā)現(xiàn)，錦心口服液組肉雞血清IgM、IgA、IgG含量顯著高于抗生素對照組。雞血清中免疫球蛋白含量與其免疫功能密切相關(guān)[26]，IgM是感染初期最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，其功能是激活補體系統(tǒng)；IgA是由雞腸系淋巴結(jié)產(chǎn)生主要在各腸道器官中發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用；IgG是機體被感染后合成最多、持續(xù)最久的免疫球蛋白，不僅具有抗菌活性，還可以中和細菌釋放到血液中的毒素。Chen等[27]研究指出，錦心口服液通過對SOCS1表達的調(diào)控在呼吸道合胞病毒（RSV）感染的不同階段調(diào)節(jié)小鼠免疫系統(tǒng)活性而增強對RSV的抵抗。

4" 結(jié)論

錦心口服液不僅對雞大腸桿菌具有抑制作用，還可以有效改善病雞的生長性能、提高免疫功能。相較于抗生素治療，錦心口服液對雞大腸桿菌病治療效果更優(yōu)。

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收稿日期：2024-05-30

第一作者：俞炳芳（1981—），大專，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要從事中獸藥在臨床生產(chǎn)上的應用工作，E-mail：920879555@qq.com

通信作者：黃雪利（1991—），碩士研究生，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師助理，主要從事獸用中藥新藥研發(fā)工作，E-mail：2529755607@qq.com