摘要：本研究以毛建草（Dracocephalum rupestre Hance）葉片為外植體，研究不同消毒處理和不同植物生長(zhǎng)激素配比對(duì)葉片愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化、增殖、生根的影響。結(jié)果表明：葉片最佳的消毒方式為75%乙醇浸泡30 s后，用0.1% HgCl2消毒4 min，污染率最低為11.11%；誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS（Murashige and Skoog）基本培養(yǎng)基+1.0 mg·L-16-芐氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA）+0.1 mg·L-1吲哚乙酸（Indole acetic acid，IAA）+1.0 mg·L-12，4-二氯苯氧乙酸（2，4-Dichlorophenoxyacetic acid，2，4-D），誘導(dǎo)率達(dá)84.51%；愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基為MS+3 mg·L-16-BA+0.50 mg·L-1噻苯?。═hidiazuron，TDZ）+0.50 mg·L-1IAA，不定芽分化率為66.37%;不定芽增殖最佳培養(yǎng)基為MS+2.0 mg·L-16-BA +0.05 mg·L-1萘乙酸（Naphthylacetic acid，NAA），增殖率為83.57%;適宜生根的培養(yǎng)基為1/2MS基本培養(yǎng)基（1/2MS）+0.1 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1吲哚丁酸（Beta-indolebutyric acid，IBA），生根率為86.97%。本研究建立了毛建草葉片離體培養(yǎng)與再生體系，為其種質(zhì)資源的保存和組培快繁提供理論與技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞：愈傷；不定芽；增殖；生根

中圖分類號(hào)：Q813.1""" 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A"""" 文章編號(hào)：1007-0435（2024）08-2523-08

Establishing Tissue Culture and Regeneration System of

Dracocephalum rupestre

YUE Kang-jie， KANG Hong-wei， LIU Hui-xin， WANG Jia-li， TIAN Xu-ping*

（College of Forestry， Shanxi Agricultural University， Taigu， Shanxi Province 030801， China）

Abstract：Using leaves of Dracocephalum rupestre as explants，in this study we explored the effects of different sterialization methods and varying combinations of plant growth hormones on the initiation of callus，development of adventitious buds，cell proliferation，and root formation on the leaf explants. The results indicated that the most effective sterialization approach for the leaves involved a 30-second immersion in 75% ethanol，followed by 4-minute treatment with 0.1% HgCl2，which resulting in a remarkably low contamination rate of 11.11%. The optimal culture medium for callus initiation consisted of Murashige and Skoog （MS）+1.0 mg·L-16-Benzylaminopurine （6-BA）+0.1 mg·L-1Indole acetic acid （IAA）+1.0 mg·L-12，4-Dichlorophenoxyacetic acid （2，4-D），achieving an induction rate of 84.51%. For callus differentiation，the best medium was MS+3 mg·L-16-BA+0.50 mg·L-1Thidiazuron （TDZ）+0.50 mg·L-1IAA，with an adventitious bud differentiation rate of 66.37%. The medium promoting shoot proliferation was MS+2.0 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1NAA，resulting in a proliferation rate of 83.57%. The suitable rooting medium was 1/2MS+0.1 mg·L-1Naphthylacetic acid （NAA）+0.1 mg·L-1Beta-indolebutyric acid （IBA），with a rooting rate of 86.97%. The study established an in vitro culture and regeneration system for the leaf explants of Dracocephalum rupestre，providing a theoretical and technical support for the conservation of its germplasm resources and tissue culture propagation.

Key words：Callus;Adventitious buds;Proliferation;Rooting

毛建草（Dracocephalum rupestre Hance）為唇形科多年生草本，主要分布于華北、西北及遼寧等海拔650 m～2400 m（青海省達(dá)3 100 m）的高山草原、草坡或疏林下向陽(yáng)處［1］。該植物可全草入藥，在清熱解毒、治療風(fēng)濕頭痛、延緩衰老等方面有一定作用［2］。在山西、河北、遼寧及青海等地有把毛建草制作成茶葉的習(xí)俗。在山西，毛建草茶是一個(gè)重要的藥茶產(chǎn)業(yè)，但是目前，資源產(chǎn)量成為制約產(chǎn)業(yè)規(guī)模的一個(gè)關(guān)鍵因素。因此，對(duì)毛建草種苗的繁育技術(shù)亟待研究。

在自然環(huán)境中，毛建草主要通過(guò)種子繁殖，在栽培中常用種子育苗、分株［3］及珠芽繁殖［4］，然而，這些繁殖方式局限和影響了良種的快速繁育。因此，近年來(lái)對(duì)毛建草組織快繁的研究逐漸增多，劉俊等［5］以毛建草帶腋芽的莖段為外植體建立無(wú)菌體系，發(fā)現(xiàn)適宜莖段的消毒方法是用75%乙醇浸泡30 s，后用HgCl2消毒7 min，適宜腋芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基是MS（Murashige and Skoog）培養(yǎng)基+0.5 mg·L-16-芐氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA）+0.1 mg·L-1萘乙酸（Naphthylacetic acid，NAA）+0.2 mg·L-1吲哚乙酸（Indole acetic acid，IAA），芽增殖培養(yǎng)基是MS+0.75 mg·L-16-BA+4.0 mg·L-1激動(dòng)素（Kinetin，KT）+0.01 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1赤霉素（Gibberellin，GA3），不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+0.2 mg·L-1NAA。李倩［6］發(fā)現(xiàn)適宜毛建草種子萌發(fā)的培養(yǎng)基是MS+0.5 mg·L-1NAA和MS+0.5 mg·L-1吲哚丁酸（Beta-indolebutyric acid，IBA）。宗越［7］以毛建草莖段和葉片為外植體誘導(dǎo)愈傷，發(fā)現(xiàn)適宜葉片消毒的方法是用75%乙醇浸泡30 s，后用HgCl2消毒7 min，誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基是MS+0.5 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA。桑曉霞［8］發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基適宜莖段愈傷組織誘導(dǎo)，培養(yǎng)基是MS+0.5 mg·L-16-BA +0.5 mg·L-1NAA，與宗越［6］研究一致。

以上研究中，毛建草愈傷組織僅分化出不定根［6-8］，分化不定芽的研究未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究以毛建草葉片為材料，探討激素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化、芽增殖及生根培養(yǎng)的影響，為毛建草種質(zhì)資源保存及組織培養(yǎng)快繁提供一定的技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料取自山西農(nóng)業(yè)大學(xué)林業(yè)站的毛建草葉片。試驗(yàn)內(nèi)所用的MS和1/2MS培養(yǎng)基內(nèi)均添加蔗糖30 g·L-1、瓊脂7 g·L-1，pH值調(diào)為5.8～6.0。培養(yǎng)室溫度為（25±1）℃，光照強(qiáng)度為3000 Lux，光周期16 h·d-1。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體消毒 在4—5月晴天上午采集毛建草花枝頂端幼嫩葉片，清水洗掉葉片表面灰塵，先用含有洗潔精的水溶液浸泡15 min，用流水沖洗30 min，然后置于超凈工作臺(tái)進(jìn)行下一步的表面消毒。用75%乙醇浸泡30 s后，接著用無(wú)菌水清洗3次，再用0.1% HgCl2分別浸泡消毒2 min，3 min，4 min和5 min，最后用無(wú)菌水沖洗5～6次。將消毒后的葉片切割成0.5 cm2左右，葉面朝上接入MS培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種20個(gè)葉片，重復(fù)3次。10 d后統(tǒng)計(jì)葉片褐化率、污染率和成活率。

1.2.2 葉片愈傷組織的誘導(dǎo) 在MS培養(yǎng)基中添加6-BA（0.5 mg·L-1，1.0 mg·L-1和2.0 mg·L-1），2，4-D（0 mg·L-1，0.1 mg·L-1，0.5 mg·L-1和1.0 mg·L-1）和IAA（0 mg·L-1，0.1 mg·L-1，0.5 mg·L-1和1.0 mg·L-1）組合，每個(gè)處理接種20個(gè)葉片，3次重復(fù)。30 d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率及生長(zhǎng)狀態(tài)。

1.2.3 愈傷組織分化 在MS培養(yǎng)基中添加6-BA（1 mg·L-1，2 mg·L-1和3 mg·L-1）、TDZ（0.5 mg·L-1，1.0 mg·L-1和2.0 mg·L-1）與IAA，NAA各（0.05 mg·L-1，0.50 mg·L-1和1.00 mg·L-1）組合。每個(gè)處理接種20塊愈傷組織，重復(fù)3次。30 d后統(tǒng)計(jì)愈傷組織不定芽、不定根分化率以及平均再生芽數(shù)。

1.2.4 不定芽增殖培養(yǎng) 在MS培養(yǎng)基中分別添加6-BA（0.5 mg·L-1，1.0 mg·L-1和2.0 mg·L-1）與NAA（0.01 mg·L-1，0.05 mg·L-1和0.10 mg·L-1）組合。每個(gè)處理接種15個(gè)不定芽，重復(fù)3次。30 d后統(tǒng)計(jì)不定芽的增殖情況，計(jì)算增殖率、增殖系數(shù)及株高。

1.2.5 不定芽生根誘導(dǎo) 在1/2MS培養(yǎng)基中分別添加NAA（0 mg·L-1，0.1 mg·L-1，0.5 mg·L-1和1.0 mg·L-1）和IBA（0 mg·L-1，0.1 mg·L-1，0.5 mg·L-1和1.0 mg·L-1）組合。每個(gè)處理接種15個(gè)芽苗，重復(fù)3次。30 d后觀察芽的生根情況，統(tǒng)計(jì)生根率、平均根數(shù)、平均根長(zhǎng)及株高。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析方法

褐化率/%=褐化數(shù)/接種數(shù)×100%；污染率/%=污染數(shù)/接種數(shù)×100%；成活率/%=（接種數(shù)－褐化數(shù)－污染數(shù)）/接種數(shù)×100%；愈傷組織誘導(dǎo)率/%=有愈傷的外植體數(shù)/接種數(shù)×100%；分化率/%=分化的愈傷數(shù)/接種數(shù)×100%；平均再生芽數(shù)/個(gè)=再生不定芽總數(shù)/再生外植體總數(shù)；芽增殖率/%=有增殖的芽數(shù)/接種數(shù)×100%；苗成活率/%=成活的苗數(shù)/接種數(shù)×100%；生根率/%=生根的苗數(shù)/成活的苗數(shù)×100%。

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和顯著性分析，采用Excel 2016統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)和制作圖表，數(shù)據(jù)均為 3次重復(fù)試驗(yàn)的平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 HgCl2消毒時(shí)間的比較

由表1可知，外植體褐化率隨消毒時(shí)間延長(zhǎng)而增加，褐化率在15.56%～60.00%之間；污染率隨消毒時(shí)間延長(zhǎng)而降低，成活率隨消毒時(shí)間延長(zhǎng)呈先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng)0.1% HgCl2消毒5 min時(shí)，污染率最低為8.89%，但褐化率達(dá)到60.00%，顯著高于其他處理（Plt;0.05）。0.1% HgCl2消毒4 min時(shí)，存活率最高為60.00%，與其他處理時(shí)間差異顯著（Plt;0.05）。葉片最好的消毒方法是75%乙醇浸泡30 s，后用0.1% HgCl2消毒4 min。

2.2 葉片愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基

葉片在接種后的第6 d開始膨大卷曲（圖1），由表2可知，葉片在含有不同激素配比的培養(yǎng)基中愈傷組織誘導(dǎo)率在25.77%～84.51%之間。當(dāng)6-BA濃度相同時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率隨IAA濃度增加逐漸下降。當(dāng)6-BA濃度在2.0 mg·L-1時(shí)，誘導(dǎo)率隨2，4-D濃度升高而降低，其余處理隨2，4- D濃度升高而增加。在含有6-BA，IAA和2，4-D的培養(yǎng)基中，22號(hào)處理組的誘導(dǎo)率最高為84.51%，此時(shí)愈傷組織呈黃綠色、疏松（圖1），24，25和26組合誘導(dǎo)率較高，但愈傷組織生長(zhǎng)狀態(tài)與22號(hào)處理相比較差，有水漬化現(xiàn)象發(fā)生。綜合比較，誘導(dǎo)葉片愈傷組織的最佳培養(yǎng)基是22號(hào)處理MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1IAA+1.0 mg·L-12，4-D。

2.3 葉片愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基

由表3可知，僅添加6-BA時(shí)，出芽率最高的是3號(hào)處理，為4.66%，其余兩組處理未分化出不定芽；僅添加TDZ時(shí)，愈傷組織未分化出不定芽。僅添加6-BA和TDZ時(shí)，愈傷組織都能生根，但生根率隨6-BA，TDZ濃度的增加逐漸降低。同時(shí)添加6-BA和TDZ時(shí)，出芽率最高的是13號(hào)處理，為16.71%，與其余各組差異顯著（Plt;0.05）。生根率最高的為9號(hào)處理，其生根率為12.43%。當(dāng)6-BA，TDZ，NAA三者同時(shí)添加時(shí)，18號(hào)和23號(hào)處理只分化不定芽，16，17和19號(hào)處理只分化不定根，其他四種處理呈現(xiàn)不同結(jié)果，有的產(chǎn)生不定根，有的產(chǎn)生不定芽。出芽率最高的是22號(hào)處理，出芽率為66.37%（圖1），生根率最高的是24號(hào)處理，為28.91%（圖1）。當(dāng)6-BA濃度在3 mg·L-1時(shí)，平均不定芽數(shù)均在4個(gè)以上，最多的是22號(hào)處理，為5.73個(gè)。

綜合比較，愈傷組織出芽率最高的培養(yǎng)基是22號(hào)處理MS+3 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1TDZ+0.5 mg·L-1IAA。生根率最高的培養(yǎng)基是24號(hào)處理MS+3 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-1TDZ+1.0 mg·L-1IAA。

2.4 不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基

將愈傷組織誘導(dǎo)的不定芽接到增殖培養(yǎng)基后，芽塊體積增大，20 d后在芽塊周圍增殖出不定芽（圖1）。由表4可知，不定芽增殖率在17.21%～83.57%之間，8號(hào)處理的芽增殖率最高，為83.57%，增殖系數(shù)平均在3倍以上。NAA濃度固定時(shí)，不定芽增殖率、增殖系數(shù)和株高隨6-BA濃度增加而增加。當(dāng)6-BA在0.5 mg·L-1時(shí)，隨NAA濃度增加，不定芽增殖率逐漸降低，增殖系數(shù)在1倍左右，株高逐漸增加。當(dāng)6-BA在1.0 mg·L-1時(shí)，隨NAA濃度增加，不定芽增殖率逐漸升高，株高逐漸降低。當(dāng)6-BA在2.0 mg·L-1時(shí)，不定芽增殖率和株高呈先升后降的趨勢(shì)。綜合比較，適宜不定芽增殖的培養(yǎng)基是8號(hào)處理MS+2.0 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1NAA。

2.5 不定芽生根誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基

將生長(zhǎng)至1 cm左右的不定芽接種至含有不同濃度激素的生根培養(yǎng)基中，在接種后的第8 d產(chǎn)生根系，20 d后逐漸伸長(zhǎng)（圖1）。由表5可知，生根率在21.19%～86.97%之間，生根率隨NAA，IBA（0～0.5 mg·L-1）濃度增加呈先升后降的趨勢(shì)。相同濃度下，NAA的生根率優(yōu)于IBA。單一添加0.5 mg·L-1NAA時(shí)，生根率最高，為73.63%；單一添加0.5 mg·L-1IBA時(shí)，生根率最高為53.21%。當(dāng)NAA和IBA濃度都為0.1 mg·L-1時(shí)，生根率最高為86.97%。

根長(zhǎng)隨NAA和IBA濃度的增加表現(xiàn)為先升后降，當(dāng)NAA和IBA組合時(shí)，根長(zhǎng)隨濃度增加而降低。NAA在 0.5 mg·L-1時(shí)，根長(zhǎng)最長(zhǎng)。

生根數(shù)隨NAA和IBA濃度的增加而增加，相同濃度時(shí)，NAA較IBA更能促進(jìn)根數(shù)增加。當(dāng)NAA和IBA組合時(shí)，根數(shù)隨濃度增加而降低。

株高隨NAA和IBA濃度增加表現(xiàn)為先升后降的趨勢(shì)，當(dāng)NAA和IBA組合時(shí)，隨濃度的升高而下降。株高在NAA和IBA濃度都為0.1 mg·L-1時(shí)最高。綜上所述，NAA對(duì)毛建草不定芽生根的影響優(yōu)于IBA，適宜不定芽生根的處理是8號(hào)處理1/2MS+0.1 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1IBA。

3 討論

3.1 外植體消毒的最佳時(shí)間

外植體表面消毒效果的好壞是離體培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵，植物種類及外植體的不同使得消毒劑種類和消毒時(shí)長(zhǎng)不同［9］。消毒時(shí)間短導(dǎo)致滅菌不徹底，消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則會(huì)降低植物的存活率［10］。唇形科常用75%乙醇與0.1% HgCl2組合進(jìn)行消毒［10］，適宜狹葉黃芩（Scutellaria regeliana）莖段消毒的組合為75%乙醇+0.1% HgCl2消毒5 min［12］，芡歐鼠尾草（Salvia Hispanica）種子適宜的HgCl2消毒時(shí)間是10 min［13］，‘雜花’薰衣草（Lavandula ‘Zahua’）葉片的HgCl2消毒時(shí)間為3 min［14］，由此可知，HgCl2消毒時(shí)間會(huì)隨植物種類改變。宗越以毛建草葉片為外植體時(shí)，適宜其消毒的組合為75%乙醇30 s+0.1% HgCl2 7 min［7］，存活率為48.00%，與本研究結(jié)論不同，這可能與采集時(shí)間、前期處理及部位選擇不同有關(guān)。

3.2 愈傷組織誘導(dǎo)及分化的最佳培養(yǎng)基

植物組織培養(yǎng)中，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的用量對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)及分化有重要的調(diào)節(jié)作用，過(guò)高或過(guò)低都不利于植物生長(zhǎng)［15-16］。常用6-BA，TDZ，2，4-D，IAA，NAA等激素誘導(dǎo)唇形科植物葉片產(chǎn)生愈傷組織［17-20］，適宜狹葉薰衣草（Lavandula angustifolia）［21］葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+2.0 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-12，4-D；百里香（Thymus mongolicus）［10］葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+2.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1IAA；北青蘭（Dracocep halum argunense）［22］葉片在MS+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA培養(yǎng)基中，其愈傷組織生長(zhǎng)狀態(tài)良好，顏色翠綠。宗越［7］發(fā)現(xiàn)適宜毛建草莖段、葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+0.5 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA，愈傷組織呈黃色，質(zhì)地緊密。桑曉霞［8］以組培苗莖段研究毛建草再生體系，其結(jié)論與宗越［7］的研究一致。宗越和桑曉霞的研究表明，愈傷組織在含有6-BA和NAA的培養(yǎng)基中較難分化不定芽，僅分化出不定根，這種現(xiàn)象可能因?yàn)槭?-BA和NAA組合不適宜愈傷組織不定芽分化。本研究中，毛建草葉片在6-BA與2，4-D或IAA組合時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率低、狀態(tài)差，不利于后期不定芽分化，同時(shí)添加6-BA，IAA，2，4-D的培養(yǎng)基，愈傷組織誘導(dǎo)率最高為84.51%，此時(shí)愈傷組織疏松，顏色呈黃綠色，培養(yǎng)效果較好。這與宗越［7］和桑曉霞［8］的研究不同，可能是多種激素協(xié)同作用遠(yuǎn)大于一種激素單獨(dú)使用，其效果與外植體及愈傷組織內(nèi)源激素的種類和濃度有重要關(guān)系［23-25］。劉俊等［5］以毛建草帶芽莖段經(jīng)消毒處理后直接誘導(dǎo)腋芽產(chǎn)生，未經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)及分化，研究發(fā)現(xiàn)IAA能促進(jìn)腋芽生長(zhǎng)，本研究中添加6-BA或TDZ時(shí)，不定芽分化率較低，添加IAA后分化率逐漸上升，本研究與劉俊等［5］研究結(jié)論相似。黃芩（Scutellaria baicalensis）［26］ 和狹葉黃芩［12］愈傷組織不定芽分化率隨6-BA濃度升高而增加。本研究中，IAA濃度一定時(shí)，愈傷組織不定芽分化率隨6-BA和TDZ濃度升高而增加。

3.3 不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基

常用6-BA和NAA組合對(duì)唇形科植物不定芽進(jìn)行增殖培養(yǎng)，芽增殖系數(shù)大且生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，其比例因植物不同而不同［27］。6-BA對(duì)一串紅（Salvia splendens）［28］芽叢的誘導(dǎo)起決定作用，但含量過(guò)高會(huì)抑制芽叢的形成，僅添加NAA或IBA的培養(yǎng)基中，一串紅不定芽增殖率低，芽生長(zhǎng)較弱，適宜其不定芽增殖的培養(yǎng)基是1/2MS+2.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA。本研究中，NAA濃度一定時(shí)，不定芽增殖率隨6-BA濃度升高而增加，但NAA濃度在0.1 mg·L-1時(shí)，6-BA濃度過(guò)高會(huì)降低不定芽的增殖系數(shù)，株高也隨之降低。這與前者的研究結(jié)論一致［28］，不定芽在MS+2.0 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1NAA培養(yǎng)基中增殖率最高，增殖系數(shù)在3倍以上，這說(shuō)明適宜的6-BA和NAA組合可以產(chǎn)生較高的增殖率和增殖系數(shù)。

3.4 不定芽生根的最佳培養(yǎng)基

NAA和IBA有助于不定芽生根［15］。濃度相同時(shí)，NAA對(duì)丹參（Salvia miltiorrhiza）［29］的生根效果優(yōu)于IBA，隨NAA和IBA濃度增加，丹參不定芽生根率表現(xiàn)為先升后降，適宜其生根的NAA濃度是0.4 mg·L-1。僅添加NAA或IBA不利于涼粉草（Platostoma palustre）［30］不定芽根系的誘導(dǎo)，同時(shí)添加NAA和IBA時(shí)，其生根率較高，植株生長(zhǎng)健壯，適宜其生根的培養(yǎng)基是MS+0.5 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1IBA。

本研究發(fā)現(xiàn)，添加NAA的組合整體比添加IBA的生根效果好，NAA和IBA同時(shí)添加時(shí)，生根率較高，不定芽生根率隨NAA和IBA濃度增加呈先升后降的趨勢(shì)，說(shuō)明高濃度的NAA和IBA抑制根系的形成，這與前人的研究結(jié)論一致［29-30］，適宜毛建草不定芽生根的培養(yǎng)基是1/2MS+0.1 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1IBA。

4 結(jié)論

適宜毛建草葉片表面消毒的方法是75%乙醇浸泡30 s后，再用0.1%HgCl2消毒4 min。適宜葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+1.0 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-12，4-D+1.0 mg·L-1IAA，誘導(dǎo)率達(dá)84.51%。愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基為MS+3 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1TDZ+0.5 mg·L-1IAA，適宜不定芽分化率為66.37%。適宜不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+2.0 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1NAA，增殖率為83.57%。適宜生根的培養(yǎng)基為1/2MS+0.1 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1IBA，生根率為86.97%。本研究以葉片為外植體建立了毛建草間接器官發(fā)生的組織培養(yǎng)再生體系，篩選出了適宜其各培養(yǎng)階段的培養(yǎng)基及激素組合，為毛建草的種苗快繁及種質(zhì)資源保存提供了一定的技術(shù)基礎(chǔ)，但仍需進(jìn)一步探討外源添加物、光照、溫度等因素對(duì)各階段培養(yǎng)的最佳條件。

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（責(zé)任編輯 閔芝智）