關鍵詞：人參皂苷；白血??；細胞增殖；凋亡；分化
　　中圖分類號：R733.7
　　文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349(2008)02-0044-02
　　
　　人參始載于《本經》，味甘、苦，性平，入脾、肺、心經，傳統(tǒng)中醫(yī)學認為人參具有大補元氣、補脾益肺、生津止渴、安神益智、補氣生血的作用。在祖國醫(yī)學中應用廣泛，歷史悠久，《神農本草經》把人參列為上品，有“主補五臟、安精神、止驚悸、除邪氣、明目、開心益智”的記述。人參在臨床上有重要功能，在很多方劑中列為君藥。人參的主要有效成分為人參皂苷，按單體皂苷元所含羥基量不同分為人參二醇和人參三醇兩大類。近年來已有研究報道人參皂苷能抑制白血病細胞增殖、促進凋亡、誘導分化、增加化療藥物的敏感性和逆轉耐藥等作用，本文就近年來該方面的研究進展作一綜述。
　　
　　1、抑制白血病細胞增殖、促進凋亡、誘導分化
　　
　　高瑞蘭等采用白血病祖細胞集落形成(CFU-AML)培養(yǎng)法，觀察不同濃度人參總皂苷對HL-60、Meg-01白血病細胞株和急性髓細胞白血病患者的骨髓細胞集落形成的影響，并以正常粒單祖細胞(CFU-GM)作比較，結果示TSPG對白血病祖細胞的影響不同于正常的細胞，不同的濃度顯示為增殖或抑制的雙向作用。陳地龍等采用細胞體外培養(yǎng)技術，MTT法檢測細胞增殖抑制，光鏡和電鏡觀察細胞形態(tài)變化；聯(lián)苯胺、糖原染色、過氧化物酶、非特異性脂酶細胞化學染色分別檢測K562細胞向紅系、粒系、巨核系分化的特征；免疫細胞化學檢測細胞表面分化抗原及因子表達；FAS及FAS-L等檢測細胞凋亡情況。證明人參多糖(GPS)能明顯抑制K562細胞增殖并能誘導其凋亡并使K562細胞向成熟方向分化。戴勤等采用造血細胞體外培養(yǎng)形態(tài)學觀察免疫細胞化學流式細胞術等實驗血液學技術證明GPS可能通過阻止HL～60細胞從靜止期GO期進入增殖周期S/G+M期抑制DNA的合成等途徑進而抑制細胞的增殖，提示GPS有可能成為既能促進正常造血又能抑制人白血病等腫瘤細胞增殖的天然誘導劑。李勇等通過四唑鹽比色法觀察細胞生長，蛋白印跡法和反轉錄一聚合酶鏈反應分析G-Rb1對細胞的GR蛋白和GRa mRNA的改變。發(fā)現(xiàn)G-Rb1可上調HL-60細胞GRa mRNA及GR蛋白的表達并抑制細胞生長。李世輝等利用MTT法檢測細胞增殖抑制作用；流式細胞術檢測SP2/0細胞凋亡率及細胞周期；常規(guī)Giemsa染色和DAPI熒光染色后觀察SP2/0凋亡細胞的形態(tài)學變化；酶聯(lián)免疫吸附法測定藥物干預前后細胞上清液中腫瘤壞死因子、巨噬細胞炎癥蛋白-let的水平。結果示G-Rh對SP2/0骨髓瘤細胞有明顯的增殖抑制和誘導凋亡作用，且這種作用有周期特異性。曹唯希等采用圖像分析術、流式細胞術、形態(tài)學觀察與免疫細胞化學等方法，研究人參總皂苷誘導K562細胞凋亡。發(fā)現(xiàn)人參總皂苷對K562細胞有增殖抑制作用，并可誘導K562細胞凋亡明顯增加，同時細胞Fas表達升高。且推論人參總皂苷能誘導K562細胞凋亡，其機制可能與調控Fas表達升高有關。牛泱平等取不同濃度的GS處理HL-60細胞，通過觀察細胞形態(tài)學的變化；流式細胞術分析細胞DNA含量的改變，并進行DNA片段分析；Annexin V-FITC試驗法分析細胞凋亡百分率。結果示人參皂苷能夠抑制HL-60細胞生長，在一定劑量和時間范圍內可引起細胞凋亡，可為臨床應用人參皂苷作為化療藥物的輔助劑治療白血病提供實驗依據。李朝暉采用MTT法測定藥物對細胞的抑制率，細胞形態(tài)學觀察細胞分裂及凋亡，流式細胞儀進行細胞周期分析，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1呈劑量依賴性的將細胞阻滯于G1期，使G1期不能運行到S期，從而影響了腫瘤細胞的有絲分裂，并且在低于GO/G1期出現(xiàn)典型的凋亡峰。細胞形態(tài)學觀察可見分裂細胞以及凋亡細胞。陳小紅等選用人T淋巴細胞株(Jurkat細胞)作靶細胞，采用MTT法和半固體集落培養(yǎng)法觀察不同濃度的GS對Jurkat細胞增生的抑制效應；用Annex-inV-FITC試驗法分析Jurkat細胞的凋亡百分率，并進行DNA片段分析。證明GS在一定濃度范圍內可抑制Jurkat細胞增生，并能夠誘導其凋亡，為臨床應用提供理論依據。陳地龍等采用細胞體外培養(yǎng)技術，光鏡和電鏡觀察細胞形態(tài)變化；聯(lián)苯胺染色、POX染色、α-NAE細胞化學染色發(fā)現(xiàn)TSPG協(xié)同細胞因子對K562細胞的誘導作用與TSPG單獨作用相比，K562細胞形態(tài)學更趨向于成熟；血紅蛋白、過氧化物酶的表達明顯增加；細胞表面分化抗原CDl5、HIR2、EPO-R、GM-CSF-R的表達明顯增強。方美云等應用光學和電子顯微鏡觀察細胞的形態(tài)學特征，單克隆抗體標記流式細胞術檢測細胞表型，用ELISA法測定L-60-DC培養(yǎng)上清液中的IL-12及INF-7的量，用流式細胞儀檢測凋亡率。結果HL-60細胞在組合細胞因子并分別加入TSPG及As2o3后，均可誘生出不同比例的DC。光鏡及電鏡下均有典型的樹突狀細胞的形態(tài)學特征，細胞表達DC的表面分化抗原，誘生的DC培養(yǎng)上清液中可測出不同量的IL-12及IFN-7。聯(lián)合中藥各組的凋亡率、樹突狀細胞的特異性抗原表達均高于GM-CSF與IL-4組。誘生后的DC具有抗白血病細胞作用，與HL-60細胞共培養(yǎng)后可使白血病細胞凋亡明顯增強。
　　
　　　2、對白血病細胞的其他作用
　　
　　高瑞蘭等ElZ3采用白血病組細胞集落形成(CFU-MAL)藥敏試驗法。選用4種化療藥物：高三尖杉酯堿、阿糖胞苷、阿霉素和足葉乙苷。通過觀察其集落生長情況發(fā)現(xiàn)人參總皂苷可使常規(guī)的化療藥物對白血病細胞的抑制作用增強。王一等采用PCR-ELISA法檢測端粒酶性，Southern blot法檢測端粒長度，觀察到經人參皂苷、三氧化二砷及β欖香烯作用后，K562細胞株端粒酶活性下降，下降程度呈濃度、時間依賴性，在一定濃度及作用時間后端粒酶呈陰性；細胞的存活率下降；并推論抑制端粒酶活性可能是其抗腫瘤作用的機制之一；其后王一等用不同濃度的三氧化二砷、人參皂苷及β欖香烯單獨及聯(lián)合環(huán)磷酰胺與人類白血病細胞株K562共培養(yǎng)，采用PCR-ELISA法檢測端粒酶活性、Southern雜交法檢測端粒長度。觀察到三氧化二砷、人參皂苷、β欖香烯及環(huán)磷酰胺均能抑制K562細胞株的生長及端粒酶活性，抑制端粒酶活性可能是其抗腫瘤作用的機制之一；三氧化二砷、人參皂苷、β欖香烯與環(huán)磷酰胺聯(lián)合應用后抑制作用增強；聯(lián)合環(huán)磷酰胺可望降低上述藥物的給藥濃度。周燁等運用基因芯片技術研究人參總皂苷(TSPG)作用后K562細胞基因表達譜的變化，結果示TSPG刺激K562細胞后共有362個基因表達發(fā)生變化，與對照組K562細胞比較，表達上調的基因有20個，主要有代謝相關基因，信號轉導相關基因，細胞受體相關基因等；表達下調的有342個，包括免疫防御相關基因，DNA結合與轉錄因子，代謝相關基因，細胞周期相關基因等。RT-PCR技術驗證了FOSL1、E2F2、CCNE2和ODZ14個基因表達的變化。證明TSPG刺激K562細胞后，影響了細胞內一系列基因的表達。這些基因可能與TSPG的抗腫瘤機制有關。陳小紅等選用K562/V CR、K562/Adr兩耐藥細胞株作為靶細胞，液體培養(yǎng)和半固體集落培養(yǎng)法及MTT法觀察到GS通過提高耐藥細胞對化療藥物的敏感性而與化療藥物起協(xié)同作用，同時在一定濃度下，能直接抑制白血病耐藥細胞增殖。立彥等通過細胞毒試驗、藥敏試驗、RT-PCR方法與流式細胞術了解中藥人參皂苷Rb1的毒性、細胞對藥物的敏感性及在細胞水平和分子水平對多藥耐藥的逆轉作用。結果顯示人參皂苷Rb1能部分逆轉耐藥；RT-PCR結果顯示，對照組和給藥組均有明顯的擴增片段區(qū)帶，流式結果顯示Pgp的表達無明顯差異。說明可以通過人參皂苷Rb1抑制Pgp的功能，從而提高腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，對于今后研究和發(fā)展腫瘤治療來說有十分重要的意義。
　　
　　3、結語
　　
　　白血病是一種造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，化療是治療白血病的主要手段，但化療藥物的毒副反應及其耐藥性仍然是目前難以解決的問題。某些中藥具有抗白血病作用，而對正常細胞的損傷小的優(yōu)點，因此，國內外研究者們正在尋找抗白血病的中藥，并提取和分離出其中的有效成分，進行藥效學及其作用機理研究，試圖開發(fā)高效低毒的治療白血病的潛在或輔助藥物，有助于提高療效、減少化療毒副反應、改善生活質量、延長生存期等。綜上所述近年來已有研究表明人參皂苷能抑制白血病細胞增殖、促進凋亡、誘導分化、能增加化療藥物的敏感性和逆轉耐藥等作用，但其作用途徑和機制還需進一步的研究，為臨床應用提供依