劉滿紅　王如陽

摘要：目的：研究蘆薈多糖、野甘草多糖、鳳尾荼多糖、抗壞血酸清除羥自由基的作用。方法：采用分光光度法測定羥自由基清除率，并對抗氧化性進(jìn)行了比較。結(jié)果：植物活性多糖與抗壞血酸相比，其抗氧化能力的順序?yàn)椋阂案什荻嗵?蘆薈多糖>鳳尾茶多糖>抗壞血酸。結(jié)論：所研究的3種植物活性多糖都有很強(qiáng)的清除羥自由基的能力。

關(guān)鍵詞：羥自由基；植物多糖；分光光度法

中圖分類號：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1007-2349(2009)06-0057-02

羥自由基(·OH)是一種氧化能力很強(qiáng)的自由基，能很容易地氧化各種有機(jī)物和無機(jī)物，氧化效率高，反應(yīng)速率快，是造成生物組織脂質(zhì)過氧化、核酸斷裂、蛋白質(zhì)和多糖分解的重要活性氧。因而對羥自由基的研究和探討，對揭示生物體的生命過程及有毒有機(jī)污染物控制和對機(jī)體抗衰老、腫瘤等形成的了解，尋找清除羥自由基及降解有毒物質(zhì)具有十分重要的意義。因此，對羥自由基的研究在生命科學(xué)及環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域中引起了廣泛的興趣，抗自由基生物學(xué)、醫(yī)藥學(xué)與功能食品科學(xué)的研究成為一個(gè)十分活躍的研究領(lǐng)域。

多糖是存在于植物中的主要供能物質(zhì)，隨著膜的化學(xué)功能、免疫物質(zhì)的化學(xué)研究與發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識到多糖不僅作為能量資源和結(jié)構(gòu)材料，更重要的是參與了生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng)，具有抗衰老、抗腫瘤、抗病毒等多種作用。

本文主要考察了野甘草多糖、蘆薈多糖、風(fēng)尾茶多糖這3種植物活性多糖清除羥自由基的抗氧化活性，并與常用的抗氧化劑抗壞血酸(V_c)做比較，為開發(fā)和利用植物活性多糖提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1儀器和試劑UV-9200型紫外一可見光譜儀(北京瑞利分析儀器公司)；FeSO₄溶液(0.4 mmol／L)；H₂O₂溶液(0.3％)；H₂SO₄溶液(0.02mol／L)；羅丹明B溶液(0.05％)；抗壞血酸(2mmol／L)。以上所用試劑均為分析純試劑，水為純化水。野甘草多糖(傣藥)3.5g／L)；鳳尾茶多糖(6.6g／L)；蘆薈多糖(2.6g／L)均為粗提取物。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基的測定原理Fenton反應(yīng)是以過氧化氫為氧化劑，以亞鐵鹽為催化體系的氧化反應(yīng)方法，其反應(yīng)機(jī)理如下：Fe²+H₂O₂→Fe³+·OH＋OH^－，然后，再利用其產(chǎn)生的羥自由基氧化羅丹明B使其吸光度發(fā)生變化，從而間接地測定羥自由基的產(chǎn)生量。

1.2.2羥自由基檢測取兩支10mL刻度試管，分別加入羅丹明B1.8mL和H₂SO₄0.5mL，其中一支再加入FeSO₄,1.2mL、H₂O₂0.6mL，加純化水稀釋至刻度，反應(yīng)5min，以1cm比色皿在554nm波長測定吸光度，計(jì)算二者之差△A。

1.2.3抗氧化劑清除羥自由基作用在上述體系中加入一定量抗氧化劑，測定加入抗氧化劑的A_加抗，只有指示劑和酸存在的空白參比液A_參比羥自由基反應(yīng)體系的A_羥，羥自由基清除率R的計(jì)算方法如下：

R＝A_加抗－A_羥／A_參比－A_羥×100％

1.2.4蘆薈多糖的提取原料清洗→去皮稱重(200g)→打漿→按比例加水(1:1)→超聲浸提(1h)→過濾→清液保留，殘?jiān)偬崛。喜⑻崛∫骸鷿饪s→加95％的乙醇沉淀(1:2)→抽濾→低溫真空干燥→蘆薈粗多糖0.26g→加水定容至100mL。其他粗提物多糖提取方法也與此相同。

2結(jié)果與討論

2.1試驗(yàn)條件的選擇

2.1.1酸度羅丹明B無論在酸性介質(zhì)中，還是在堿性介質(zhì)中均顯紅色，在H₂SO₄介質(zhì)中羅丹明B可被氧化劑氧化褪色。硫酸的用量太少，反應(yīng)慢，用量太多時(shí)，體系不穩(wěn)定，當(dāng)硫酸用量為0.5mL時(shí)，△A最大且體系穩(wěn)定，選擇硫酸用量為0.5mL。

2.1.2羅丹明B用量于體系中加入不同體積0.05％的羅丹明B溶液，測定其吸光度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨著羅丹明B用量的增大，△A值增大，羅丹明B用量1.8mL時(shí)，△A最大，用量再增加則A₀超出正常讀數(shù)范圍，故選擇羅丹明B用量為1.8mL。

2.1.3過氧化氫用量于體系中加入不同體積0.3％的H₂O₂溶液，反應(yīng)后測定其吸光度A，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，開始隨著用量加大，△A增大，繼續(xù)增至0.6mL時(shí)，△A值變化緩慢，呈穩(wěn)定狀態(tài)，故本實(shí)驗(yàn)過氧化氫用量為0.6mL。

2.1.4硫酸亞鐵用量于體系中加入不同體積0.4 mmol／L的硫酸亞鐵溶液，反應(yīng)后測定其吸光度A。實(shí)驗(yàn)表明，隨著硫酸亞鐵用量的增加，△A逐漸增加，增加到1.2mL后，△A增加緩慢。取0.4mmol／L的硫酸亞鐵溶液用量為1.2mL。

2.1.5反應(yīng)時(shí)間按上述用量配制產(chǎn)生羥自由基的溶液體系，每隔1min測定一次吸光度值。結(jié)果表明，1～5min范圍內(nèi)，吸光度下降迅速，反應(yīng)5min后，A基本無變化。選擇反應(yīng)時(shí)間為5min。

2.2植物活性多糖清除羥自由基的作用在Fenton反應(yīng)體系中加入含10mg對應(yīng)體積的抗氧化劑溶液，反應(yīng)5min后，測定加入抗氧化劑的A_加抗，只有指示劑和酸存在的空白參比液A_參比，羥自由基反應(yīng)體系的A_羥，計(jì)算羥自由基的清除率R，以抗壞血酸為陽性對照。結(jié)果見表1。

結(jié)果表明：所有的粗提植物活性多糖均具有抗氧化性。植物活性多糖與抗壞血酸相比，其抗氧化活性順序?yàn)椋阂案什荻嗵?蘆薈多糖>鳳尾茶多糖>抗壞血酸(Vc)。

3結(jié)論

3種植物活性多糖均具有清除羥自由基的能力，且都比抗壞血酸(Vc)強(qiáng)。植物活性多糖可清除溶液中的羥自由基(·OH)，這說明植物活性多精有抗氧化作用，能增強(qiáng)機(jī)體防御毒性自由基損傷的能力，因而具有抗衰老作用。所以植物活性多糖具有抗氧化、抗衰老作用的保健食品開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。

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