胡曉靜

[摘要] 目的:早期發(fā)現(xiàn)健康人群乙型肝炎感染狀況,對疑似病例進行乙型肝炎病毒抗體檢測,為能夠更好更快地檢測HBsAg作出診斷。方法:金標法檢測后ELISA 法初、復檢檢測確認的陽性血液標本,并確定金標法漏檢病例。結果:對36例初、復檢HBsAg都為陽性。金標試紙條檢測出陽性34份,漏檢率為5.56%。而ELISA 法檢測出陽性36份,陽性率為100%。結論:從HBsAg金標法試紙的靈敏度看,HBsAg試紙只能作為初篩試劑,初檢和復檢試劑采用ELISA 法,以防止HBsAg 漏檢的發(fā)生,保證檢測結果的真實性,避免輸血與HBsAg攜帶者傳播疾病的發(fā)生。

[關鍵詞] 金標法;快速檢測HBsAg;漏檢分析;乙型肝炎病毒

[中圖分類號]R446.6 [文獻標識碼] B[文章編號] 1673-7210(2009)08(b)-069-02

目前檢測HBsAg一般采用ELISA法,其實驗條件要求較為嚴格, 操作程序較為復雜,費時較長?？焖貶BsAg 全血金標試條(簡稱金標法)具有較高的靈敏度和較好的特異性,且用血量少,操作簡便快速,結果便于觀察,是一種較理想的檢測HBsAg 初篩試劑,現(xiàn)發(fā)現(xiàn)金標法對36例患者進行HBsAg初篩,發(fā)現(xiàn)存在一定的漏檢。為了解漏檢原因,對ELISA 法確診的36份血液, 金標法進行檢測,ELISA 法復檢,根據(jù)檢測結果,并檢測HBsAg結果進行比較,觀察反應時間及準確性,但金標法與ELISA 檢測結果存在不相符現(xiàn)象,現(xiàn)報道如下:

1材料與方法

1.1研究對象

對36例初、復檢都為陽性,而一種金標法試紙檢測均為陰性的標本進行分析。

1.2試劑

HBsAg 金標試紙條,ELISA 試劑,均為廈門新創(chuàng)公司出品;HBsAg系列定值血清,購自衛(wèi)生部臨床檢驗中心。靈敏度分別為1 ng/ml和0.12 ng/ml。復檢ELISA試劑為北京萬泰藥業(yè)有限公司生產, 靈敏度為0.12 ng/ml。

1.3方法

HBsAg 金標法,取指尖末梢血60 μl 滴于試紙條箭頭下方的墊片上,觀察結果嚴格按說明書進行操作。ELISA 法嚴格按說明書進行操作。經兩次ELISA 法初、復檢檢測后確認的陽性血液標本,最后確系“金標法漏檢”確認漏檢的原因,進行分析。

2結果

對36例初、復檢HBsAg均為陽性病例。ELISA 法檢測出陽性36份,陽性率為100%。金標試紙條檢測出陽性34 份, 陽性率為94.44 %。再次用ELISA 法檢測均為陽性。如以ELISA法雙結果為準,金標法初篩HBsAg總漏檢率共2例,漏檢率為5.56%。同時金標法檢測樣本陽性反應時間,與溫度的影響等多方面因素影響,有1例患者被檢測出陽性。金標法HBsAg總漏檢率1例,漏檢率為2.78%,外界因素導致漏檢率同樣為1例。

3討論

我國是乙肝病毒的高流行區(qū),約10% 的人群為HBsAg 攜帶者, 廣西則達到15% 左右。金免疫層析試驗的原理是在玻璃纖維素膜上預包被金標抗HBsAg 抗體(Au2sAb1) ,硝酸纖維素膜上預包被金標抗HBsAg 抗體(sAb2) 和羊抗鼠IgG。檢測時,樣品血清中HBsAg 可與膠體金2抗體結合形成復合物,由于層析作用復合物沿紙條向前移動。如為陽性標本,則與檢測線預包被的抗體結合形成“Au2sAb12HBsAg2sAb2”夾心物而凝聚顯色。全血金標試紙在試紙條上加過濾膜以阻止血細胞的滲透。金標法檢測HBsAg,反應時間較短且只需30 μl末梢血,不必做靜脈血分離血清,減少血液離心提取血清的過程。金標試紙法與ELISA 法比較, 具有較高的符合率, 較好的特異性,無假陽性現(xiàn)象,且操作簡便快速, 結果易于觀察, 同時不受儀器設備及血樣限制,便于攜帶,出現(xiàn)假陰性率為2.78%,同時其他原因導致金標法存漏檢率為2.78%,現(xiàn)分析原因可能是:①試劑的靈敏度。全血金標試劑的靈敏度為1 ng/ml ,而ELISA 試劑的靈敏度可達0.5 ng/ml ,這可能是造成ELISA 法檢測為弱陽性的標本而金標法檢測為陰性的原因。②操作人員未能按照試劑說明書要求的時間報告結果,人為縮短了檢測時間,從而造成檢測線不明顯的弱陽性遺漏而誤判。③實驗人員操作不規(guī)范,如加樣過多或過少,未及時將沒用完的試紙條密封保存而導致潮解。④少數(shù)標本可能存在乙型肝炎病毒(HBV) 變異或亞型而不易檢出。⑤高溫、干燥、風吹均能影響實驗結果?，F(xiàn)報告其他原因導致金標法存漏檢率與金標法存漏檢率相同。因此, HBsAg 快檢的假陰性也可能由人為因素及環(huán)境因素造成[4],如判斷結果時間不夠、反應不充分、氣溫低(克服方法是冬天注意保溫或延長反應時間) ;加血量不足或過多;過濾膜破損, 血液滲出過濾膜使檢測線模糊,導致判斷失誤;判斷不仔細,對那些隱約可見的陽性線誤判為陰性; 缺乏經驗把強陽性結果(只有1條陽性線, 無陰性線) 判為陰性等。因此,工作人員應規(guī)范操作步驟,避免人為因素造成的假陰性結果,以減少初篩時的漏檢,減少血液浪費, 減少經濟損失。從目前HBsAg金標法試紙的靈敏度看,HBsAg 試紙只能作為初篩試劑,初檢和復檢試劑采用ELISA 法,以防止HBsAg 漏檢的發(fā)生,保證檢測結果的真實性,避免輸血與減少HBsAg攜帶者傳播疾病的發(fā)生。

[參考文獻]

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[2]周繼文.膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎病毒表面抗原[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,1998,21(1):30.

[3]徐進春.快速金標法檢測HBsAg漏檢原因的分析[J].中國輸血雜志,2001,14 (3):166.

[4]柏亮,鄭拉讓.寶雞市2次以上無償獻血金標法HBsAg初篩結果[J].臨床輸血與檢驗,2006, 8(1):50.

[5]吳海裘,潘明寬.斑點金免疫法檢測HBsAg[J].臨床檢驗雜志,1996,14 (3):1371.

(收稿日期:2008-12-12)