李黛，曾燕玲，張仁波

（遵義師范學(xué)院生物系，貴州遵義563002）

百合屬植物除具有極高的觀賞價值外，還具食用和藥用價值，是我國衛(wèi)生部審批通過的首批藥食兩用植物,不僅臨床上有著廣泛的應(yīng)用，而且作為加工保健產(chǎn)品的原料也極具開發(fā)前景[1]。遵義地區(qū)務(wù)川縣生產(chǎn)的百合粉早在明代初期就成為皇室御膳供品，在1938年就獲貴州省輕工保健食品獎。1978年改革開放以來，務(wù)川縣境內(nèi)宣起了野生百合粉、百合干生產(chǎn)的高潮，其野生百合粉經(jīng)華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué)測定，富含鋅、磷、硒等11種微量元素和18種人體必需的氨基酸，產(chǎn)品供不應(yīng)求。由于原料的需求量大，加之務(wù)川縣境內(nèi)野生百合的資源利用與開發(fā)的情況基本上是處于簡單地收集百合鱗莖進行粗放型的初加工階段，為一種“掠奪式”的采集[2]，因此，對務(wù)川縣野生百合資源進行開發(fā)利用研究，將對務(wù)川以至整個貴州野生百合的可持續(xù)開發(fā)利用和經(jīng)濟的發(fā)展產(chǎn)生一定的影響。

文山百合（Lilium wenshanense L·J·Penget F.X.Li)作為培育百合新品種的種質(zhì)材料[3]，為多年生宿根草本植物，在貴州省務(wù)川縣有較多分布，其鱗莖白色，分節(jié)，淀粉含量較高，在務(wù)川縣被用作野生百合粉生產(chǎn)的原材料之一。目前百合的種球繁育技術(shù)雖日漸成熟，但因其速度慢，繁殖系數(shù)低等缺點還是制約了百合鱗莖和切花的大規(guī)模生產(chǎn)。百合組培苗的培育具有繁殖系數(shù)高、周期短等優(yōu)點，剛好彌補了種球繁育的不足。目前對百合組培快繁研究較多[4-9]，但對文山百合的組織培養(yǎng)研究僅見屈云慧等人在《植物生理學(xué)通訊》上有一篇報道[10]。本文介紹了筆者對文山百合鱗片誘導(dǎo)不定芽的研究。

1 材料與方法

1.1 材料

本實驗所用的文山百合采自貴州務(wù)川縣野生林下，種植于遵義師范學(xué)院植物園內(nèi)。將鱗莖用自來水沖洗干凈，然后從外到內(nèi)等量分成外、中、內(nèi)三層，再分別將外、中、內(nèi)三層鱗片的上節(jié)和下節(jié)分開，并將鱗片下節(jié)切成下部和上部兩部分后分放于不同的燒杯中，在自來水下流水沖洗60min左右，于超凈工作臺上用75%的酒精浸泡10s左右，然后用0.1%的升汞消毒15min，無菌水沖洗5次以上后備用。

1.2 方法

采用正交試驗篩選誘導(dǎo)鱗片形成不定芽的最佳培養(yǎng)基以及用鱗片誘導(dǎo)不定芽的最佳著生位置和部位。所用基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，正交實驗采用L9(3)4正交表，6－BA和NAA濃度、鱗片著生位置、鱗片部位四因素三水平的試驗設(shè)計見表1。

將上述供試材料按正交試驗方案接種到9種芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個處理共接4瓶，每瓶接3塊，每個處理重復(fù)3次，在溫度為24－26℃，光照12h/d，光照強度1500－2000lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)60天后進行統(tǒng)計。

表1 L9(3)4正交試驗表頭設(shè)計表

2 結(jié)果與分析

2.16 －BA、NAA濃度對鱗片誘導(dǎo)芽的影響

將文山百合鱗片接種到9組培養(yǎng)基后約一周，白色鱗片轉(zhuǎn)成了淺紫紅色，10天后鱗片基部出現(xiàn)乳白色小突起，30天后，鱗片上的乳白色突起轉(zhuǎn)成了綠色不定芽。50天左右長成1－2cm高的苗。文山百合鱗片誘導(dǎo)芽正交試驗L9(3)4結(jié)果見表2。

對實驗結(jié)果進行方差分析，結(jié)果見表3。

表2、表3顯示：6－BA濃度的差異對文山百合芽誘導(dǎo)的影響為：1.0mg/L＞0.5mg/L＞0.1mg/L，其中以1.0mg/L為最好，差異達(dá)極顯著水平，NAA濃度的影響為：0.5mg/L＝1.0mg/L＞0.1mg/L，但差異不顯著。從苗的生長情況看，1號、4號、6號、8號培養(yǎng)瓶中苗的生長較好，其中6號和8號生長最佳，但有玻璃化現(xiàn)象，特別是6號的玻璃化現(xiàn)象較嚴(yán)重，1號和4號雖然較前兩組稍差，但玻璃化現(xiàn)象不明顯。從這四組培養(yǎng)基的激素配比來看，1號和4號的激素濃度較低，6號和8號的激素濃度配比較高，且1號、4號、8號和6號培養(yǎng)基中NAA：6－BA的比值為別為0.1、0.2、0.5、2，這似乎說明，隨著激素濃度的增加，特別是NAA相對含量的增加，培養(yǎng)物玻璃化現(xiàn)象將逐漸加重。圖1－9為9組培養(yǎng)基中鱗片誘導(dǎo)芽及芽的生長情況。

表2 鱗片誘導(dǎo)不定芽L9(3)4試驗結(jié)果

表3 鱗片誘導(dǎo)芽試驗結(jié)果的方差分析

2.2 鱗片不同位置和部位對鱗片誘導(dǎo)芽的影響

從表2和表3的結(jié)果和方差分析可知：不同著生位置和部位的鱗片對其芽誘導(dǎo)有一定的影響，從著生位置來看，外層鱗片誘導(dǎo)的平均鱗莖數(shù)最多，中層次之，內(nèi)層最差；從部位來看，上節(jié)鱗片的下端誘導(dǎo)的平均鱗莖數(shù)最多，下節(jié)鱗片的上、下兩端誘導(dǎo)的平均鱗莖數(shù)一樣多，但差異均不顯著。

3 討論

從上述實驗結(jié)果和分析可以看出：誘導(dǎo)文山百合鱗片形成不定芽，6-BA濃度以1.0mg/L最為合適，NAA由于為1.0mg/L時形成的不定芽成苗極緩慢，加之從節(jié)省藥品考慮應(yīng)以0.5mg/L最佳，因此，文山百合芽增殖的最佳培養(yǎng)基應(yīng)為：

MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA，這與屈云慧等人[10]的結(jié)果相比稍有差異，其6-BA濃度由0.5mg/L提高到了1mg/L。文山百合由鱗片誘導(dǎo)不定芽，從本次實驗看，每片鱗片平均最多可形成2.54個不定芽，可能是因為6號和8號培養(yǎng)物的玻璃化現(xiàn)象較嚴(yán)重，盡管在不定芽的生長過程中，玻璃化現(xiàn)象逐漸減輕，但在鱗片分化形成不定芽時玻璃化現(xiàn)象較嚴(yán)重影響了不定芽的數(shù)量，因此，如何克服文山百合鱗片誘導(dǎo)不定芽的玻璃化現(xiàn)象以增加不定芽的數(shù)量是一個值得研究的問題。此外，9號培養(yǎng)基中形成的鱗莖數(shù)也相對較多，并且無玻璃化現(xiàn)象發(fā)生，但不定芽分化出來后，生長很慢，兩個月內(nèi)難以形成苗，三個月后才逐步發(fā)育成苗。圖9中已培養(yǎng)了三個月的9號培養(yǎng)中不定芽生長情況證實了這一點，從這組實驗的激素配比來看，雖然NAA︰6-BA的比值不是太高，僅為1，但NAA和6-BA的絕對濃度均較其它組為高，這是否說明較高的激素濃度對不定芽生長成苗有一定的抑制作用，還有待進一步研究。

[1] 楊林莎，孫艷紅，方曉艷.中藥百合的研究進展[J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2002，17（1）：74－75.

[2] 曾燕玲，李黛，魏福倫，等.遵義務(wù)川野生百合的資源現(xiàn)狀及發(fā)展前景[J].遵義師范學(xué)院學(xué)報，2006，8（5）：61-62.

[3] 彭隆金.百合資源與栽培[M].昆明:云南民族出版社,2002.

[4] 安利民，楊紅燕，李惠芝，等.利用組織培養(yǎng)對秦嶺百合屬植物的保種繁殖研究[J].西北植物學(xué)報，1996，16（5）：5-7.

[5] 阮少寧，楊華，梁一池，等.香水百合組織培養(yǎng)的試驗研究[J].福建林學(xué)院學(xué)報，2001，21（2）：142-145.

[6] 李標(biāo)，胡瓊?cè)A，何顯靜.紫紅花滇百合的組織培養(yǎng)[J].植物生理學(xué)通訊，2002，38（2）：40.

[7] 杭玲,蘇賓,陳麗新,等.龍芽百合組培快繁技術(shù)研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2001，（4）:183-184.

[8] 楊柏云，羅麗萍,蔡奇英.切花百合組織培養(yǎng)的研究[J].南昌大學(xué)學(xué)報(理科版)，2000，（4）：324-325.

[9] 王剛，杜捷，李桂英，等.蘭州百合和野百合組織培養(yǎng)及快速繁殖研究[J].西北師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2002，38（1）：69-71.

[10] 屈云慧，張婷，張藝萍，等.文山百合的離體培養(yǎng)及其試管籽球快速繁殖[J].植物生理學(xué)通訊，2007，43（5）：901.