李得堂， 唐洪梅*， 蔡慶群， 張麗娟， 何嘉侖

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州510405;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院，廣東 中山528400;3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州510405)

療筋涂膜劑由大黃、兩面針、冰片、薄荷腦等中藥組成，具有活血祛瘀、消腫止痛的功效。主要用于外傷性疾病和風(fēng)濕性疾病。處方中冰片(合成龍腦)是一味常用藥，具有清熱、消腫、止痛等功效，薄荷腦可用于皮膚或黏膜產(chǎn)生清涼感以減輕不適及疼痛。且冰片、薄荷腦一定量可以增加涂膜劑中有效成分的透皮吸收［1］。冰片(合成龍腦)主要成分是互為異構(gòu)體的龍腦和異龍腦，其化學(xué)結(jié)構(gòu)無特征紫外吸收，薄荷腦為薄荷素油中得到的一種飽和的環(huán)狀醇，因此氣相色譜法是測(cè)定這類化合物較好方法。本實(shí)驗(yàn)建立GC法同時(shí)測(cè)定療筋涂膜劑中冰片，薄荷腦的含量，方法簡(jiǎn)便，雜質(zhì)無干擾，分離效果好，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為該制劑揮發(fā)性成分質(zhì)量控制的方法之一。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Angilent 6890N GC色譜儀;FID檢測(cè)器，載氣為高純氮?dú)?99.999%)Angilent Chemstation工作站(美國(guó)Angilent公司)，超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)，恒溫干燥箱(北京市朝陽區(qū)來廣營(yíng)醫(yī)療器械廠)，DK-S24型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司)，電子分析天平(SARTORIUS AG GOTTINGEN Germany BP211D)。

1.2 試藥 療筋涂膜劑(制劑室自制);水楊酸甲酯對(duì)照品供含量測(cè)定用(批號(hào):110707-200609，中國(guó)藥品生物制品檢定所);薄荷腦對(duì)照品供含量測(cè)定用(批號(hào):110728-200506，中國(guó)藥品生物制品檢定所);冰片對(duì)照品供含量測(cè)定用(批號(hào):110743-200504，中國(guó)藥品生物制品檢定所);其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:HP-5(0.53 mm×30 m×1 μm)石英毛細(xì)管色譜柱，柱溫:50℃(1 min)以10℃/min速率升到80℃(5 min)，再以10℃/min升到130℃(3 min)，載氣:氮?dú)?.0 mL/min;燃?xì)?氫氣30 mL/min為;助燃?xì)?空氣300 mL/min;尾吹氣:氮?dú)?5 mL/min，進(jìn)樣口溫度:230℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度:250℃。進(jìn)樣量:1 μL，分流進(jìn)樣，分流比10∶1，理論板數(shù)按龍腦峰計(jì)算應(yīng)不低于1 900;冰片、薄荷腦和水楊酸甲酯與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯1 000 mg，置50 mL的量瓶中，用乙酸乙酯定容。精密吸取1 mL置于5 mL量瓶中，用乙酸乙酯定容備用。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取五氧化二磷減壓干燥的冰片對(duì)照品58.915 mg、薄荷腦對(duì)照品25.495 mg，置于10 mL量瓶中，用乙酸乙酯定容，作為冰片、薄荷腦的混合對(duì)照品貯備液，再分別精密量取上述對(duì)照品貯備液各1 mL置于10 mL量瓶中，精密加入1 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用乙酸乙酯定容。

2.4 供試品溶液的制備 取本品約0.6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯10 mL，精密稱定重量，超聲10 min，放冷，再精密稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置10 min，濾過。精密量取續(xù)濾液2 mL，置5 mL量瓶中，精密加入1 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用乙酸乙酯定容。

2.5 方法的專屬性考察 按處方比例制成缺冰片、薄荷腦陰性對(duì)照，照供試品制備方法制備缺冰片、薄荷腦陰性樣品溶液，精密吸取溶液1 μL，照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果見圖1。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照色譜上在此保留時(shí)間無干擾。

圖1 對(duì)照品(A)、缺冰片陰性(B)、缺薄荷腦陰性(C)、缺冰片和薄荷腦陰性(D)、樣品(E)GC色譜圖

2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對(duì)照品貯備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，分別置于 5 mL 量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1 μL，注入氣相色譜儀測(cè)定，由對(duì)照品濃度(X)與對(duì)照品峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積之比值(Y)進(jìn)行回歸，得回歸方程，冰片:Y=0.333 4X－0.019 9，r=0.999 8;薄荷腦:Y=0.342 5X－0.004 9，r=0.999 7。結(jié)果表明冰片和薄荷腦依次在1.178 3～5.891 5 mg/mL，0.509 9～2.549 5 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，注:冰片峰面積以龍腦和異龍腦峰面積之和計(jì)算。

2.7 精密度試驗(yàn) 取同一批供試品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)行測(cè)定，分別計(jì)算冰片和薄荷腦的含量，結(jié)果RSD分別為1.17%和1.84%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液，按上述色譜條件，間隔一定時(shí)間(0、2、4、8、12、24 h)進(jìn)樣測(cè)定，分別計(jì)算冰片和薄荷腦的含量，結(jié)果RSD分別為1.52%和2.48%。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品5份，按照含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備5份供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，分別計(jì)算冰片和薄荷腦的含量，結(jié)果RSD分別為1.96%和2.49%。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批樣品約0.30 g，分別精密加入一定量的冰片和薄荷腦對(duì)照品，按上述樣品制備方法制備加樣回收供試品溶液，平行操作6份，按照上述2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算其回收率，結(jié)果見表1、2。

表1 冰片加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 薄荷腦加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.11 樣品的測(cè)定 取3批療筋涂膜劑按2.4項(xiàng)下篩選的方法制備供試品溶液，按上述2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，通過回歸方程計(jì)算，結(jié)果見表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

因冰片，薄荷腦具有揮發(fā)性，在常溫下不穩(wěn)定，生產(chǎn)過程中容易損失，因此含量測(cè)定中選用冰片，薄荷腦為指標(biāo)，故選用GC法對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。中國(guó)藥典已收載了冰片的含量測(cè)定方法，用此色譜條件測(cè)定冰片含量，冰片中龍腦峰和薄荷腦峰分離度達(dá)不到要求，本試驗(yàn)比較了不同柱溫:140℃恒溫(中國(guó)藥典2005版冰片含量測(cè)定方法)［2］、初始溫度110℃以7℃/min升溫至200℃、初始溫度80℃以10℃/min升溫至130℃、初始溫度80℃以10℃/min升溫至120℃，再以2℃/min升溫到130℃、初始溫度80℃(2 min)以10℃/min升溫至130℃(1 min)，再以2℃/min升溫到140℃(1 min)、初始溫度80℃(5 min)以10℃/min升溫至130℃(5 min)、初始溫度50℃(1 min)以10℃/min升溫至80℃(5 min)，再以10℃/min升溫到130℃(3 min)，分離效果以最后一個(gè)程序升溫方法最好，故選擇柱溫為初始溫度50℃(1 min)以10℃/min升溫至80℃(5 min)，再以10℃/min升溫到130℃(3 min)。

內(nèi)標(biāo)物篩選試驗(yàn)結(jié)果，以水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物較為理想，且陰性對(duì)照無干擾。

本制劑制法中冰片、薄荷腦為直接加入，本試驗(yàn)供試品制備中的提取方法選擇為超聲提?。?-4］，文獻(xiàn)報(bào)道超聲15 min測(cè)定含量最高，經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)，比較超聲提取時(shí)間 5、10、15、20、30 min，發(fā)現(xiàn)超聲提取5 min含量不再有增加的趨勢(shì)，為確保各個(gè)廠家產(chǎn)品冰片、薄荷腦均有良好溶出，故選擇超聲10 min。

冰片(合成龍腦)含有龍腦和異龍腦，2005年版中國(guó)藥典中冰片(合成龍腦)的含量以龍腦計(jì)，而其他文獻(xiàn)［5-7］也參照藥典方法，將冰片(合成龍腦)的含量以龍腦計(jì)，筆者認(rèn)為以此方法無法完全反映冰片質(zhì)量，應(yīng)以冰片計(jì)更為合理。有文獻(xiàn)報(bào)道［8］比較以龍腦和異龍腦的總量計(jì)與以冰片計(jì)的含量測(cè)定結(jié)果差異，發(fā)現(xiàn)具有一致性(CV=0.3%)，故本試驗(yàn)方法選用冰片為對(duì)照品，含量以冰片計(jì)。

［1］李得堂，唐洪梅，丘振文，等.促滲劑對(duì)療筋涂膜劑中芍藥苷經(jīng)皮滲透的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15(3):62-65.

［2］中國(guó)藥典［S］.一部.2005:98.

［3］管玉云，程 正.氣相色譜法測(cè)定婦炎靈膠囊中樟腦和冰片的含量［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(1):74-75.

［4］陸海濤，劉小紅.氣相色譜法測(cè)定馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏中龍腦的含量［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25(4):335-336.

［5］王愛民，黃 勇，王永林，等.大口徑毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定菊黃上清含片中龍腦的含量［J］.中國(guó)中藥雜志，2006，31(2):159-160.

［6］范 斌，柏 冬，劉 泓，等.氣相色譜法測(cè)定艾奇康膠囊中龍腦的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2009，15(6):15-17.

［7］薛東升，荊樹中，宋慶宏.氣相色譜法測(cè)定雙清注射液中冰片的含量［J］.中成藥，2008，30(5):780-782.

［8］阮 昊，林 斌，周 方，等.CGC測(cè)定五靈止痛膠囊中冰片的含量［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2009，26(4):326-328.