史喜菊，馬貴平，李冰玲，李炎鑫，劉全國(guó)

（北京出入境檢驗(yàn)檢疫局，北京 100026）

1 前言

國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）制定的動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)是WTO中SPS協(xié)定唯一認(rèn)可的動(dòng)物衛(wèi)生規(guī)則，作為技術(shù)法規(guī)和仲裁國(guó)際貿(mào)易糾紛的技術(shù)依據(jù)，得到了世界各國(guó)獸醫(yī)工作者的一致認(rèn)可。OIE的診斷標(biāo)準(zhǔn)體系完善、內(nèi)容科學(xué)，有分布于全球的150多個(gè)參考實(shí)驗(yàn)室作為技術(shù)后盾，這些診斷技術(shù)代表了全世界獸醫(yī)工作的最高水平，科學(xué)性、實(shí)用性和先進(jìn)性都很強(qiáng)，是世界各國(guó)在獸醫(yī)技術(shù)能力建設(shè)上所參照的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化進(jìn)程的加快，動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品的國(guó)際貿(mào)易也進(jìn)入了國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)時(shí)代，各國(guó)對(duì)動(dòng)物的健康狀況和衛(wèi)生水平以及動(dòng)物產(chǎn)品的安全性提出了更加苛刻的要求，一些國(guó)家借此設(shè)置各種貿(mào)易技術(shù)壁壘，限制別國(guó)的產(chǎn)品出口，以此實(shí)現(xiàn)貿(mào)易保護(hù)。

近幾年來(lái)，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)委和認(rèn)監(jiān)委的指導(dǎo)下，在各級(jí)動(dòng)物防疫和口岸檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)以及廣大制標(biāo)人員的共同努力下，我國(guó)動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作取得了一定的成績(jī)，但還沒(méi)有建立起與國(guó)際接軌的動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)體系，用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)衡量時(shí)，我們所制定的標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)水平和內(nèi)容的涵蓋范圍還有諸多不足，動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化工作還遠(yuǎn)不能適應(yīng)入世后的貿(mào)易和社會(huì)發(fā)展需要。為了應(yīng)對(duì)國(guó)際貿(mào)易的需要，促進(jìn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)家法規(guī)的協(xié)調(diào)性特別是與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的接軌，現(xiàn)以O(shè)IE規(guī)定的牛傳染性疾?。?8種）為例進(jìn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的比較，為動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作提供參考。

2 OIE規(guī)定的牛傳染性疾病診斷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的比較

2.1 牛無(wú)漿體病（Bovine anaplasmosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛無(wú)漿體病的OIE診斷標(biāo)準(zhǔn)包括涂片染色、核酸檢測(cè)、競(jìng)爭(zhēng)ELISA、卡片凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、間接ELISA、Dot ELISA以及間接熒光抗體試驗(yàn)，共計(jì)8個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)。其中涂片鏡檢適用于無(wú)漿體病急性感染期的檢測(cè)，一些國(guó)家有商品化試劑盒供應(yīng)；核酸檢測(cè)技術(shù)敏感性非常高，可以檢測(cè)帶菌牛，但套式PCR存在非特異性擴(kuò)增的問(wèn)題；競(jìng)爭(zhēng)ELISA可以檢測(cè)持續(xù)感染動(dòng)物，是無(wú)漿體病血清學(xué)診斷的首選方法，敏感性和特異性分別達(dá)到96%和95%，2.5h出結(jié)果，有商品化試劑盒供應(yīng)；卡片凝集試驗(yàn)可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)或者田間進(jìn)行，是無(wú)漿體病血清學(xué)診斷的首選方法，敏感，快速，幾分鐘出結(jié)果，但存在非特異性反應(yīng)，結(jié)果解釋帶有主觀性差異，批間或?qū)嶒?yàn)室間差異大；補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)敏感性波動(dòng)范圍比較大，重現(xiàn)性差，大部分病原攜帶者不能被檢出，不再推薦用于檢測(cè)感染動(dòng)物；間接ELISA是檢測(cè)陽(yáng)性血清的可靠工具，可以100%檢出感染長(zhǎng)達(dá)3年之久的陽(yáng)性血清；Dot-ELISA快速、容易操作，成本低，敏感性和特異性分別達(dá)到93%和96%；間接熒光抗體試驗(yàn)每天檢測(cè)的樣品數(shù)量有限，存在非特異性熒光反應(yīng)。牛無(wú)漿體病診斷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)只有一個(gè)快速凝集檢測(cè)方法，對(duì)應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)的卡片凝集試驗(yàn)，比較單薄，應(yīng)該加強(qiáng)制修訂工作。檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括涂片鏡檢、核酸檢測(cè)、競(jìng)爭(zhēng)ELISA、間接ELISA和Dot ELISA以及補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)操作方法，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)比較完善，除缺失的凝集試驗(yàn)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)充之外，只缺少了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的間接熒光抗體試驗(yàn)。

2.2 牛布氏桿菌?。˙ovine brucellosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

OIE有關(guān)布氏桿菌病的診斷標(biāo)準(zhǔn)很多，包括病原鑒定5個(gè)（染色技術(shù)、病原培養(yǎng)、鑒定和分型、核酸檢測(cè)、疫苗株鑒別）、血清學(xué)實(shí)驗(yàn)6個(gè)（玫瑰苯凝集、緩沖平板凝集、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、間接ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA、熒光偏振試驗(yàn)）及其他方法6個(gè)（皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)、血清凝集試驗(yàn)、天然半抗原和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白試驗(yàn)、牛奶間接ELISA、牛奶環(huán)狀試驗(yàn)、gamma干擾素試驗(yàn)），共計(jì)17個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法，其中6個(gè)血清學(xué)方法都是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法。染色技術(shù)（形態(tài)學(xué)或免疫特異性組織染色）是布氏桿菌病的假定證據(jù)，但對(duì)于病原數(shù)量低的牛奶和奶制品敏感性低，脂肪球?qū)Y(jié)果解釋也有干擾；病原培養(yǎng)是從病料中分離布氏桿菌，是本病的確診試驗(yàn)；鑒定要靠細(xì)菌形態(tài)學(xué)和生化特征等聯(lián)合應(yīng)用，菌落形態(tài)觀察對(duì)分型是必需的；核酸檢測(cè)可以檢測(cè)和鑒別布氏桿菌，進(jìn)行種屬鑒別和生物分型鑒定，區(qū)分疫苗株和感染株，是流行病學(xué)調(diào)查的工具，快速、簡(jiǎn)單、明確，解決了錯(cuò)誤鑒別的難題；疫苗株鑒別是根據(jù)不同疫苗株各自的生化特性進(jìn)行鑒別。玫瑰苯凝集是一種簡(jiǎn)單的斑點(diǎn)凝集試驗(yàn)，適合于快速篩選感染動(dòng)物或者對(duì)無(wú)布病畜群進(jìn)行無(wú)感染檢疫，非常敏感，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；緩沖平板凝集非常敏感，特別適用于檢測(cè)疫苗接種誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)使用很廣泛，是一般公認(rèn)的確診試驗(yàn)，但操作復(fù)雜，需要良好的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施和訓(xùn)練良好的操作人員，特異性強(qiáng)，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；間接ELISA有商品化試劑供應(yīng)，已經(jīng)經(jīng)過(guò)了廣泛的田間驗(yàn)證，敏感性高，但不能區(qū)分免疫抗體和感染抗體，在檢測(cè)感染動(dòng)物時(shí)其敏感性等于或高于BBAT，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；競(jìng)爭(zhēng)ELISA有商品化試劑供應(yīng)，特異性比間接ELISA強(qiáng)，但特異性降低了，在檢測(cè)感染家畜時(shí)其敏感性與BBAT和間接ELISA相當(dāng)，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；熒光偏振試驗(yàn)敏感性和特異性與競(jìng)爭(zhēng)ELISA相當(dāng)，非?？焖伲m合于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和田間使用，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法。皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)適用于篩選未免疫接種畜群，也可以輔助解釋血清學(xué)交叉反應(yīng)結(jié)果特別是在無(wú)布病地區(qū)，特異性非常高，但并不能作為單獨(dú)的診斷試驗(yàn)或用于國(guó)際貿(mào)易目的而推薦使用；血清凝集試驗(yàn)在牛布病的監(jiān)測(cè)和控制計(jì)劃中已經(jīng)成功應(yīng)用了很多年，但一般認(rèn)為用于國(guó)際貿(mào)易目的使用效果不理想；天然半抗原和細(xì)胞溶質(zhì)蛋白試驗(yàn)高度特異，與RBT快速篩選試驗(yàn)一起成功地用于布病根除計(jì)劃，最佳敏感性接近于CFT，但低于RBT和I-ELISA；牛奶間接ELISA敏感而特異，特別適用于大規(guī)模畜群的檢測(cè)，有幾種商品化試劑盒供應(yīng)，并且都已經(jīng)經(jīng)過(guò)了廣泛的田間試驗(yàn)驗(yàn)證，正在廣泛使用；牛奶環(huán)狀試驗(yàn)是ELISA的適當(dāng)替代方法，用于泌乳動(dòng)物畜群布病的篩查；gamma干擾素試驗(yàn)很有用，但是需要特異性較強(qiáng)的抗原，程序也要標(biāo)準(zhǔn)化。有關(guān)牛布病診斷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)屬于空白，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括4個(gè)，分別對(duì)應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、平板凝集試驗(yàn)、牛奶環(huán)狀試驗(yàn)和血清凝集試驗(yàn)，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的其余13個(gè)方法，與OIE標(biāo)準(zhǔn)差距比較大，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.3 牛生殖道彎曲桿菌?。˙ovine genital campylobacteriosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛生殖道彎曲桿菌病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病原分離、種屬鑒定、免疫學(xué)鑒定、生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定及ELISA，共計(jì)6個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病原分離和鑒定是確診方法，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；免疫學(xué)鑒定技術(shù)可以直接從樣品中鑒定抗原，對(duì)分離株進(jìn)行鑒定，但不能區(qū)分亞種，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；生化鑒定可以鑒定亞種，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；分子鑒定可以鑒定亞種，但比較耗時(shí)，而且需要昂貴的設(shè)備和專(zhuān)業(yè)知識(shí)；ELISA檢測(cè)抗原特異性分泌抗體和疫苗接種后的血清抗體。相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)屬于空白；檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括OIE標(biāo)準(zhǔn)中的病原分離、種屬鑒定和生化鑒定方法，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的免疫學(xué)鑒定和分子鑒定及ELISA試驗(yàn)，差距較大，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂任務(wù)。

2.4 牛海綿狀腦?。˙ovine spongiform encephalopathy）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛海綿狀腦病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括組織病理學(xué)檢查、免疫組織化學(xué)檢查、蛋白免疫印跡方法、快速篩選試驗(yàn)和SAF電鏡檢查，共計(jì)5個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)。其中組織病理學(xué)檢查適用于福爾馬林固定的牛腦組織，是牛海綿狀腦病診斷的基礎(chǔ)，可以加速疾病的診斷，但已經(jīng)不再是調(diào)查疑似動(dòng)物或?qū)】敌笕哼M(jìn)行快速篩選的首選方法；免疫組織化學(xué)檢查適用于福爾馬林固定的牛腦組織，是牛海綿狀腦病監(jiān)測(cè)和確診的黃金標(biāo)準(zhǔn)，在全世界廣泛使用；蛋白免疫印跡試驗(yàn)適用于未固定的新鮮牛腦組織，敏感性與免疫組織化學(xué)相當(dāng)，是確診本病的黃金標(biāo)準(zhǔn)，在全世界廣泛使用；全自動(dòng)快速蛋白免疫印跡和ELISA篩選試驗(yàn)適用于大量腦組織樣品的快速篩選，有商品化試劑供應(yīng)；SAF電鏡檢查成功地用于福爾馬林固定的腦組織，死后出現(xiàn)組織自溶無(wú)法進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè)時(shí)特別有用，動(dòng)物接種試驗(yàn)可用于檢測(cè)BSE的感染性，但不能用于常規(guī)診斷。牛海綿狀腦病診斷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)都包括組織病理學(xué)檢查和免疫組織化學(xué)檢查2個(gè)方法，缺少了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的蛋白免疫印跡試驗(yàn)和快速篩選方法，建議加強(qiáng)這些標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作。

2.5 牛結(jié)核病（Bovine tuberculosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛結(jié)核病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括顯微檢查、病原培養(yǎng)、核酸鑒別、皮內(nèi)結(jié)核菌素測(cè)試、gamma干擾素試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)，共計(jì)7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法。其中顯微鏡檢查可以對(duì)疾病做出假定診斷，病原培養(yǎng)適用于結(jié)核菌素或gamma干擾素檢測(cè)陽(yáng)性動(dòng)物在尸體剖檢時(shí)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)可見(jiàn)的病理變化，建議采集頭部和胸部的混合淋巴結(jié)樣品進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)特征性生長(zhǎng)模式和菌落形態(tài)進(jìn)行假定診斷；核酸鑒別對(duì)分離菌株進(jìn)行快速鑒別和基因分型，具有重要的流行病學(xué)價(jià)值，有商品化試劑盒供應(yīng)，但實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)還不充分；動(dòng)物接種是確診結(jié)核病的重要依據(jù)；結(jié)核菌素試驗(yàn)是檢測(cè)牛結(jié)核病的標(biāo)準(zhǔn)方法，可用于區(qū)分牛分支結(jié)核桿菌感染動(dòng)物和其他分枝桿菌感染動(dòng)物，但敏感性達(dá)不到100%，單靠結(jié)核菌素實(shí)驗(yàn)不可能從畜群中根除結(jié)核病，在大多數(shù)非?？坪头锹箍苿?dòng)物的應(yīng)用還沒(méi)有很好地確認(rèn)，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法；gamma干擾素試驗(yàn)具有檢測(cè)早期感染的能力，動(dòng)物只需要保定一次，已經(jīng)批準(zhǔn)用于很多國(guó)家的結(jié)核病根除計(jì)劃，在一些國(guó)家用作連續(xù)試驗(yàn)來(lái)增強(qiáng)特異性，用作平行試驗(yàn)來(lái)增強(qiáng)敏感性，有商品化試劑盒供應(yīng)，但經(jīng)過(guò)評(píng)價(jià)的應(yīng)用動(dòng)物種屬有限，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的替代試驗(yàn)；淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)比較耗時(shí)，實(shí)驗(yàn)室操作比較復(fù)雜，用于野生動(dòng)物和動(dòng)物園動(dòng)物是有用的，用于鹿結(jié)核桿菌病的檢測(cè)敏感性和特異性都很高，具有科學(xué)價(jià)值，但是不能用作常規(guī)診斷，試驗(yàn)成本相對(duì)較高，還未進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)。ELISA試驗(yàn)可用于檢測(cè)野生動(dòng)物，在缺乏gamma干擾素試驗(yàn)和皮膚試驗(yàn)不可靠的地區(qū)，ELISA用于動(dòng)物結(jié)核病的檢測(cè)非常有用，但用于牛時(shí)敏感性相對(duì)較低，USA目前已經(jīng)準(zhǔn)許該實(shí)驗(yàn)用于大象和非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，英國(guó)批準(zhǔn)用于獾；是最適當(dāng)?shù)目贵w檢測(cè)方法，是細(xì)胞免疫反應(yīng)試驗(yàn)的補(bǔ)充而不是替代，簡(jiǎn)單，但敏感性受限制。有關(guān)牛結(jié)核病的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)包括染色鏡檢、病原培養(yǎng)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，其中動(dòng)物接種試驗(yàn)是對(duì)OIE標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充，缺少了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的gamma干擾素試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)和ELISA，相關(guān)檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)仍屬空白，建議加強(qiáng)這方面標(biāo)準(zhǔn)的制修訂工作。

2.6 牛病毒性腹瀉黏膜?。˙ovine viral diarrhoea）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛病毒性腹瀉黏膜病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、ELISA檢測(cè)抗原、免疫組織化學(xué)、核酸檢測(cè)、病毒中和試驗(yàn)及ELISA，共計(jì)6個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病毒分離是國(guó)際貿(mào)易指定使用的試驗(yàn)，微量板免疫過(guò)氧化物酶方法用于血清樣品中病毒檢測(cè)的大量篩選，試管培養(yǎng)法用于組織或白細(xì)胞上清液或者精液樣品；ELISA抗原檢測(cè)適合于檢測(cè)持續(xù)感染動(dòng)物，不適合于急性感染的病毒檢測(cè)，在持續(xù)感染合并血清陽(yáng)性反應(yīng)的病例稀少地區(qū)是首選方法，最好的方法敏感性等同于病毒分離，有商品化試劑盒供應(yīng)，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法。免疫組織化學(xué)檢測(cè)組織切片上的病毒抗原，皮膚活檢特別是耳切樣品對(duì)于持續(xù)性感染的體內(nèi)診斷很有價(jià)值。RT-PCR適用于診斷目的的病毒檢測(cè)和懷疑有低水平病毒污染時(shí)的批量篩選，多重PCR用于從病毒培養(yǎng)物或者從血液中擴(kuò)增病毒并進(jìn)行病毒分型，原位雜交適用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織，可以進(jìn)行回顧性分析，也可用于系統(tǒng)進(jìn)化分析，核酸檢測(cè)容易污染，一定要設(shè)嚴(yán)格的對(duì)照。病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)血清抗體，沒(méi)有一個(gè)毒株可以滿足所有情況，應(yīng)該選擇能夠在本地牛中可以最高比例檢測(cè)到血清反應(yīng)的毒株。有間接和阻斷ELISA兩種，牛奶樣品中ELISA抗體檢測(cè)結(jié)果是畜群BVD地位的有用指示，有商品化試劑盒供應(yīng)。有關(guān)牛病毒性腹瀉黏膜病的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、鑒定與微量血清中和試驗(yàn)，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、病毒分離、微量血清中和試驗(yàn)以及反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，缺少OIE標(biāo)準(zhǔn)中的免疫組織化學(xué)技術(shù)和ELISA抗體檢測(cè)，與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比較接近。

2.7 牛傳染性胸膜肺炎（Contagious bovine pleuropneumonia）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛傳染性胸膜肺炎診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病原鑒定9個(gè)（病原培養(yǎng)、生化試驗(yàn)、核酸檢測(cè)、間接熒光抗體試驗(yàn)、熒光抗體試驗(yàn)、圓斑生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)和免疫組織化學(xué)試驗(yàn)）和血清學(xué)實(shí)驗(yàn)5個(gè)（補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、競(jìng)爭(zhēng)ELISA、免疫印跡試驗(yàn)、玻片凝集、乳膠凝集），共計(jì)14個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)。其中病原培養(yǎng)適于從活動(dòng)物或者尸體剖檢采樣進(jìn)行檢測(cè)，困難、耗時(shí)；生化試驗(yàn)用于免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)和PCR結(jié)果不確定的情況下，應(yīng)該由參考實(shí)驗(yàn)室實(shí)施；核酸檢測(cè)是鑒別病原的主要工具，可用于保存較差的樣品，敏感、快速，操作簡(jiǎn)單，容易污染，操作要小心。間接熒光抗體試驗(yàn)用于胸膜涂片效果良好，肺涂片效果不滿意，存在非特異性熒光染色；熒光抗體試驗(yàn)用于肉湯和瓊脂培養(yǎng)物，特異性不如間接熒光抗體染色；圓斑生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，但一些結(jié)果的解釋需要經(jīng)驗(yàn)；瓊擴(kuò)試驗(yàn)用于胸膜液、肺碎片或壞死骨片中的抗原，敏感性不夠，特異性未知，用作篩選試驗(yàn)；斑點(diǎn)免疫試驗(yàn)適用于實(shí)驗(yàn)室的日常鑒別，免疫組化只是對(duì)其他診斷的補(bǔ)充，陰性結(jié)果不具有確定性。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)被疫區(qū)國(guó)家廣泛用于本病的篩選和根除計(jì)劃，操作困難，需要經(jīng)過(guò)良好訓(xùn)練和有經(jīng)驗(yàn)的工作人員，更適合檢測(cè)急性發(fā)病動(dòng)物，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法，也適用于無(wú)疫病區(qū)的認(rèn)定。競(jìng)爭(zhēng)ELISA經(jīng)過(guò)了熱帶國(guó)家的評(píng)估可用于本病的篩選和根除計(jì)劃，敏感性與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)相當(dāng)，特異性更強(qiáng)，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法，有商品化試劑供應(yīng)，重復(fù)性好，任何國(guó)家都適用。免疫印跡試驗(yàn)具有診斷價(jià)值，田間評(píng)估顯示比補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)敏感性更高、特異性更強(qiáng)，主要用作確診試驗(yàn)。玻片凝集試驗(yàn)只在畜群基礎(chǔ)上使用有效，敏感性不夠，只能檢出急性發(fā)病動(dòng)物，乳膠凝集比玻片凝集更加容易解釋。牛傳染性胸膜肺炎診斷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)包括病原鑒定、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和微量凝集試驗(yàn)，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病原分離鑒定和補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，其中病原鑒定和補(bǔ)體結(jié)合是對(duì)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的對(duì)應(yīng)，微量凝集試驗(yàn)是對(duì)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充，缺失了OIE中的其余12個(gè)方法，與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)差距很大，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.8 牛地方流行性白血病（Enzootic bovine leukosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛地方流行性白血病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、PCR、ELISA和瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)，共計(jì)4個(gè)方法。其中PCR適于檢測(cè)個(gè)體動(dòng)物的白血病病毒，不適合于群體檢測(cè)，敏感性高，容易引起假陽(yáng)性，可用作血清學(xué)試驗(yàn)的輔助手段進(jìn)行確診。間接ELISA適合于檢測(cè)混合牛奶樣品中的抗體，阻斷ELISA適合于檢測(cè)單個(gè)或混合血清樣品中的抗體，都有商品化試劑盒供應(yīng)，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法。瓊擴(kuò)試驗(yàn)檢測(cè)個(gè)體動(dòng)物血清樣品中的抗體，敏感性不高，簡(jiǎn)單、容易操作，用于疾病的根除計(jì)劃非常有效，有商品化試劑盒供應(yīng)。目前還沒(méi)有關(guān)于牛白血病診斷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括PCR和瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)2個(gè)，分別對(duì)應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)的PCR和瓊擴(kuò)試驗(yàn)，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的病毒分離和ELISA，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.9 牛傳染性鼻氣管炎（Infectious bovine rhinotracheitis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛傳染性鼻氣管炎診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、抗原檢測(cè)、核酸檢測(cè)、熒光PCR、病毒中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，共計(jì)6個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)。其中從牛精液中分離病毒是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法，抗原檢測(cè)在組織涂片上進(jìn)行直接或間接熒光抗體試驗(yàn)，冷凍切片還可以確定抗原位置，不需要細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備，實(shí)驗(yàn)室診斷在1天內(nèi)可以完成，缺點(diǎn)是敏感性較低，如果需要進(jìn)行深入研究還需要再進(jìn)行病毒分離。核酸檢測(cè)主要用于人工或自然感染牛精液及其他臨床樣品中病毒 DNA檢測(cè)，敏感、快速，但易污染，需要采取防范措施預(yù)防假陽(yáng)性；熒光PCR從牛精液樣品中檢測(cè)病毒DNA已經(jīng)經(jīng)過(guò)了確認(rèn)，特異性更強(qiáng)，敏感性達(dá)到套式PCR的水平，污染的風(fēng)險(xiǎn)更低，可以進(jìn)行定量，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的試驗(yàn)。病毒中和試驗(yàn)是檢測(cè)血清抗體最敏感的方法，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的試驗(yàn)，ELISA檢測(cè)血清和牛奶樣品中的病毒抗體，有逐漸取代病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)抗體的趨勢(shì)，是國(guó)際貿(mào)易指定使用的方法，有很多商品化試劑供應(yīng)。目前還沒(méi)有關(guān)于牛傳染性鼻氣管炎的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、微量血清中和試驗(yàn)和ELISA 3個(gè)，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)包括病毒分離、核酸檢測(cè)、ELISA和病毒中和試驗(yàn)4個(gè)，分別對(duì)應(yīng)于OIE標(biāo)準(zhǔn)中的病毒分離、核酸檢測(cè)、病毒中和以及ELISA，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的抗原檢測(cè)和熒光PCR，建議加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.10 牛錐蟲(chóng)病（Trypanosomosis）的診斷標(biāo)準(zhǔn)及適用性評(píng)估

牛錐蟲(chóng)病診斷的OIE標(biāo)準(zhǔn)包括鮮血涂片、厚血涂片、薄血涂片、血細(xì)胞比容離心、暗視野/相差血沉試驗(yàn)、陰離子交換、體外培養(yǎng)、動(dòng)物接種試驗(yàn)、抗原檢測(cè)、DNA檢測(cè)、熒光抗體試驗(yàn)以及ELISA，共計(jì)12個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)。其中鮮血涂片簡(jiǎn)單、便宜，即刻出結(jié)果，但敏感性低；厚血涂片簡(jiǎn)單、便宜，但耗時(shí)長(zhǎng)；薄血涂片特異性強(qiáng)，可以進(jìn)行種屬鑒別。血細(xì)胞比容離心比直接檢測(cè)技術(shù)更加敏感，直接出結(jié)果，廣泛用于大批量篩選，種屬鑒別比較困難；暗視野/相差血沉試驗(yàn)檢測(cè)能運(yùn)動(dòng)的、有活力的錐蟲(chóng)，直接出結(jié)果，廣泛用于篩選大批量動(dòng)物，敏感性強(qiáng)，能夠更加準(zhǔn)確地進(jìn)行種屬鑒別和永久保存，但成本昂貴。陰離子交換技術(shù)敏感性很高，但比較繁瑣、昂貴、耗時(shí)，不適用于大批量檢測(cè)；體外培養(yǎng)技術(shù)非常高效和敏感，需要精密設(shè)備，耗時(shí)長(zhǎng)，不適合于大規(guī)模使用，不能進(jìn)行種屬鑒定；動(dòng)物接種試驗(yàn)比直接血涂片敏感，但比較昂貴，耗時(shí)長(zhǎng)，實(shí)用性差；抗原ELISA的田間評(píng)價(jià)是在受控條件下得出的，其敏感性和特異性都不適合于錐蟲(chóng)病的診斷；PCR方法是人類(lèi)和動(dòng)物感染非洲錐蟲(chóng)的診斷工具，敏感性強(qiáng)，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，不能識(shí)別所有分離株，成本高限制了該方法的常規(guī)使用；熒光抗體試驗(yàn)具有屬間特異性，可以檢測(cè)當(dāng)前或既往感染，對(duì)主動(dòng)感染只能提供假定診斷，需要昂貴的精密儀器和專(zhuān)家，只能在專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室使用，周期長(zhǎng)；ELISA可以自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化，適合于大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查。牛錐蟲(chóng)病診斷的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)包括鮮血涂片、薄血涂片、毛細(xì)管集蟲(chóng)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種、乳膠凝集試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)和ELISA共7個(gè)，檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)只有一個(gè)補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，其中5個(gè)方法與OIE標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)應(yīng)，乳膠凝集試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)及補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是對(duì)OIE標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充，缺失了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的厚血涂片、暗視野/相差血沉試驗(yàn)、陰離子交換、體外培養(yǎng)、抗原檢測(cè)和DNA檢測(cè)，建議加強(qiáng)和完善這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作。

2.11 與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)差距非常大的幾種牛病

OIE規(guī)定的牛傳染性疾病共有18種，除上述10種之外，還包括牛巴貝西蟲(chóng)?。˙ovine Babesiosis）、牛囊蟲(chóng)?。˙ovine Cysticercosis）、牛嗜皮菌?。―ermatophilosis）、牛出血性敗血病（Haemorrhagic septicaemia）、牛結(jié)節(jié)性皮疹（Lumpy skin disease）、牛惡性卡他熱（Malignant catarrhal fever）、牛泰勒焦蟲(chóng)?。═heileriosis）以及牛毛滴蟲(chóng)?。═richomonosis）8種，這8種傳染病的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)都屬于空白，而相應(yīng)的OIE標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容都很豐富、方法的先進(jìn)性和科學(xué)性都很強(qiáng)，一旦需要對(duì)這些疾病進(jìn)行檢疫，我們的工作就會(huì)陷入被動(dòng)，建議盡早做好技術(shù)儲(chǔ)備，加強(qiáng)這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作，以便能適應(yīng)國(guó)際貿(mào)易的需要。

3 比較結(jié)論與建議

通過(guò)比較與評(píng)估發(fā)現(xiàn)，我國(guó)的牛傳染性疾病檢疫技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)存在不同程度的差異。具體表現(xiàn)在:（1）有一些標(biāo)準(zhǔn)是OIE手冊(cè)中沒(méi)有提及的，如牛結(jié)核病動(dòng)物接種試驗(yàn)、牛傳染性胸膜肺炎微量凝集試驗(yàn)以及牛錐蟲(chóng)病微量凝集試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)等，這些標(biāo)準(zhǔn)都是我國(guó)相關(guān)科研單位根據(jù)國(guó)家牛傳染性疾病發(fā)生的實(shí)際情況而制定的。這樣做提升了標(biāo)準(zhǔn)的適用性，更加符合動(dòng)物疫病防控的迫切需要，是對(duì)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充，如果技術(shù)成熟，建議申請(qǐng)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)可。（2）有一些標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容比較全面，技術(shù)含量高，科學(xué)性強(qiáng)，具有一定的先進(jìn)性，與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比較接近，可以滿足國(guó)際貿(mào)易的需要，如牛無(wú)漿體病、牛病毒性腹瀉黏膜病。（3）有一些標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容不全面，只包括了OIE標(biāo)準(zhǔn)中的部分內(nèi)容，落后于國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，特別是OIE推薦的國(guó)際貿(mào)易規(guī)定要使用的方法在我國(guó)缺失，這類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)要加快修訂和更新，以便能適應(yīng)國(guó)際貿(mào)易的需要，如牛地方流行性白血病的ELISA試驗(yàn)。（4）有一些標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)差距很大，比較成熟的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)在我國(guó)還是空白，這種情況是最令人擔(dān)憂的，必須加快這方面的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作，如上述2.11所列疾病。

針對(duì)上述我國(guó)牛傳染性疾病檢疫標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)存在的差距，建議（1）從OIE參考實(shí)驗(yàn)室引進(jìn)重大牛病的診斷試劑和方法，選取國(guó)內(nèi)資質(zhì)條件好的實(shí)驗(yàn)室對(duì)目前我國(guó)已經(jīng)制定的牛病檢疫標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證和復(fù)核。驗(yàn)證合格者，推薦使用，并推薦申請(qǐng)OIE的國(guó)際認(rèn)可；驗(yàn)證有小幅差距者，暫停使用，待完善達(dá)標(biāo)后再推薦使用；不合格者，停止使用，撤消標(biāo)準(zhǔn)。這樣做有利于提高我國(guó)口岸動(dòng)物檢疫實(shí)驗(yàn)室的水平，有利于我國(guó)動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)同等地位的確立，可以推動(dòng)我國(guó)動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品的出口貿(mào)易，同時(shí)更好地防范外來(lái)動(dòng)物疫病入侵，更好地把好國(guó)門(mén)。（2）遵照OIE標(biāo)準(zhǔn)的要求，制定一個(gè)系統(tǒng)、完整的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定體系或框架，在該體系或框架的指導(dǎo)下，對(duì)現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行清理整合、特別是對(duì)于那些內(nèi)容交叉重復(fù)甚或矛盾的部分進(jìn)行徹底清理，內(nèi)容陳舊的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行更新修訂，過(guò)期或不適用的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行作廢處理，缺失的標(biāo)準(zhǔn)加緊制修訂，使我國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作逐步進(jìn)入一個(gè)有序狀態(tài)，按計(jì)劃進(jìn)行。