王興龍，楊艷玲

（軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所，吉林省人獸共患病預防與控制重點實驗室，長春 130062）

布魯氏菌屬分為6個種19個生物型，除了綿羊附睪種布魯氏菌（B.ovis）和沙林鼠種布魯氏菌（B.neotomae）兩個種外，其余4個種包括羊種布魯氏菌（B.melitensi），牛種布魯氏菌（B.abortus），豬種布魯氏菌（B.suis），犬種布魯氏菌（B.canis）均可以感染犬［1］。這種由牛、羊、豬種布魯氏菌引起的犬布魯氏菌病，稱為轉(zhuǎn)移型。最早在1931年就報道了豬布魯氏菌（B.suis）感染犬的病例。1966～1967年，犬布魯氏菌病原體從犬流產(chǎn)組織和陰道分泌物中分離出來。這種由犬種布魯氏菌引起的犬布魯氏菌病稱為最適寄生型。犬布魯氏菌不僅能感染各種犬，而且能感染其它動物和人，是一種人獸共患的自然疫源性疾病。犬布魯氏菌與綿羊附睪種布魯氏菌具有相似的抗原物質(zhì)，后來該抗原物質(zhì)用于快速平板凝集試驗（RSAT）。犬布魯氏菌病多為接觸性感染，一般犬攝食了牛布魯氏菌感染家畜的流產(chǎn)胎兒或陰道分泌物而感染牛布魯氏菌，還可以通過與帶菌犬交配，口鼻接觸等方式感染犬布魯氏菌。感染后有的無明顯臨床癥狀，呈現(xiàn)隱形帶菌狀態(tài)。有的出現(xiàn)典型的臨床癥狀，如淋巴結(jié)炎、睪丸炎、附睪炎、死胎、流產(chǎn)以及睪丸萎縮等。在治療上單一的抗生素效果不明顯，要多種抗生素聯(lián)合應(yīng)用。然而該病在治療后還會復發(fā)，因此，對于犬布魯氏菌病的根除多采取撲殺的方法。對進出口犬的檢疫是至關(guān)重要的，在輸入和繁殖前進行血清學檢測，將會降低犬布魯氏菌病的發(fā)生［2-5］。我國上海口岸于1983年首次報道，從美國引進的32只小型獵兔犬（Beagle比格）中，發(fā)現(xiàn)血清學陽性1只，此后中國科學院流行病研究所從該只狗的血液及臟器中均分離到犬布魯氏菌。近幾年來，上?？诎队衷诔隹诘膶嶒炗萌?，時有發(fā)現(xiàn)血清學陽性。

1 流行病學

所有的犬都是犬布魯氏菌的寄生宿主，歷史上犬布魯氏菌是在70年代中期在美國比格犬中最早發(fā)現(xiàn)的，隨后我國于1983年尚德秋等在上海從1只進口的比格犬和1只中國草狗中也分離到了犬種布魯氏菌［6-9］。從此比格犬也成為了最重要的研究犬布魯氏菌病的實驗動物并用其進行臨床試驗。隨后犬布魯氏菌先后又在拉布拉多獵犬、德國牧羊犬、獅子犬等多個品種犬中發(fā)現(xiàn)。盡管純種犬具有很高的染病率，但是雜交犬或是性成熟犬以及具有繁殖能力的犬都是易感者［10-11］。流浪犬和野生犬也是主要的傳播宿主［12-16］。

一個最主要的傳播途徑是交配，因為布魯氏菌在生殖道分泌物里大量寄生。有研究發(fā)現(xiàn)同性別的犬即使在同一籠內(nèi)飼養(yǎng)也不會發(fā)生犬布魯氏菌的傳播［17］。然而還有的研究表明健康的雄性犬與患布魯氏菌病的雄性犬在一起飼養(yǎng)一段時間后卻發(fā)生犬布魯氏菌的感染［18，19］。尿雖然在布魯氏菌自然傳播過程中不是最主要的感染源，但是在感染后第1周到3個月內(nèi)尿中都可以檢測到少量的細菌［18，20，21］。從解剖學上講，尿是膀胱、前列腺和附睪等器官的感染載體。

犬布魯氏菌病在多個國家和地區(qū)暴發(fā)，已經(jīng)報道的有美國、墨西哥、英國、歐洲、巴西、加拿大、日本、俄羅斯、中國等。據(jù)中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所專家介紹，我國從南到北，犬群普遍存在布魯氏菌病，南方犬布魯氏菌病抗體陽性率可達20％左右，北方牧區(qū)陽性率可達90％以上。目前我國犬品種繁雜，來源廣泛，有來自本國的犬，也有非法入境的外國犬種，所以疫病較為復雜［22］。

無癥狀的犬是犬布魯氏菌的隱形攜帶者。細菌從感染到定居在生殖組織大約需要3周的時間，然后開始繁殖并不斷排泄，可以持續(xù)幾個月到幾年的時間。雄犬的前列腺和附睪被認為是布魯氏菌寄生和繁殖的最佳靶器官。對于具有生殖能力的雄性犬來說，這兩個組織是細菌廣泛傳播的病灶區(qū)。感染后的頭兩個月精液里能檢測到大量的細菌。

在犬飼養(yǎng)場，流產(chǎn)母犬是最主要的傳染源。流產(chǎn)后4～6周，在陰道分泌物和子宮內(nèi)容物仍可以分離到大量的布魯氏菌［20］。在感染的母犬乳汁中也能檢測到犬布魯氏菌［6，23］，這將會引起哺乳幼犬的感染。同時一些客觀因素也可以引起布魯氏菌的傳播，如輸血，陰道鏡檢查，人工受精以及污染的注射器等［6］。

2 病理學

布魯氏菌通過感染后，侵入組織，并在組織細胞內(nèi)增值，2～4周內(nèi)出現(xiàn)菌血癥。犬布魯氏菌靶向定居在繁殖相關(guān)的組織（皮質(zhì)類甾醇依賴的組織）。在雄性犬，主要定居的組織是前列腺、睪丸和附睪。在雌性犬，主要定居的組織是胎兒、妊娠子宮和胎盤。布魯氏菌在雌性犬的胎兒胃內(nèi)容物中也被發(fā)現(xiàn)［20］。

組織病理學表現(xiàn)主要是在淋巴結(jié)內(nèi)出現(xiàn)網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞異常增生，同時在皮膚、睪丸或其他器官形成肉芽腫［20］。流產(chǎn)的胎盤可見壞死灶、壞死性動脈炎，并且在滋養(yǎng)層上皮細胞內(nèi)可以檢測到大量的細菌。在發(fā)炎的睪丸，可見精子肉芽腫，促使抗原物質(zhì)移出，造成抗精子抗體形成［24，25］。

犬感染布魯氏菌后的自然恢復要在感染后1～5年的時間，此時病犬無癥狀，血清抗體滴度在1：25～1：50［20，26］。再次攻毒，抗體滴度也不再增加，并且不會發(fā)生再次感染。

在病理學上主要表現(xiàn)是淋巴結(jié)和脾臟腫大、陰囊水腫、皮炎、附睪炎、睪丸炎、睪丸萎縮等。

3 臨床癥狀

犬布魯氏菌感染一般多為隱性或僅表現(xiàn)為淋巴結(jié)炎，有的亦可潛伏2周或半年以后出現(xiàn)全身性的臨床癥狀。犬布魯氏菌病的臨床表現(xiàn)有多種，但共同癥狀是母犬流產(chǎn)和不育，公犬發(fā)生睪丸炎、附睪炎、陰囊炎。部分患病母犬在妊娠后45～55d出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀，但也有更早的出現(xiàn)流產(chǎn)，體溫不高。陰唇和陰道黏膜紅腫，陰道內(nèi)流出淡褐色或灰綠色分泌物。流產(chǎn)胎兒有皮下水腫、淤血、出血，部分組織發(fā)生自溶。部分感染母犬在懷孕早期即配種后10～20d，發(fā)生胚胎死亡并被吸收，不出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀，但出現(xiàn)子宮內(nèi)膜發(fā)炎，臨床表現(xiàn)屢配不孕。感染公犬出現(xiàn)睪丸炎、附睪炎、陰囊水腫及包皮炎等癥狀?；疾∪l(fā)生生殖器官疾病以外，還可能出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎等癥狀。犬布魯氏菌病的另一個重要特點是菌血癥期長，有的犬菌血癥期可持續(xù)1～2年之久。病犬偶爾出現(xiàn)腦膜炎、非化膿性病灶性腦炎。犬感染后還常伴有復發(fā)性眼葡萄膜炎，在眼前房液中?？煞蛛x到犬種布魯氏菌。

4 診斷

臨床癥狀不宜作為犬布魯氏菌病診斷的依據(jù)。但母犬有流產(chǎn)史或公母犬的繁殖機能低下時就應(yīng)考慮本病。流行病學、病理學也只能作為診斷的參考依據(jù)。唯一可靠的診斷方法是從血液中，或是從流產(chǎn)胎兒、陰道分泌物等材料中分離到布魯氏菌。但因分離菌陽性率低及技術(shù)條件所限，故常用的診斷方法是血清學方法。

4.1 細菌的分離培養(yǎng)鑒定

布魯氏菌感染后，對于疑似布魯氏菌感染的動物，做血液細菌分離培養(yǎng)是最具診斷性的檢測方法［32］。布魯氏菌感染后2～4周便出現(xiàn)菌血癥，可持續(xù)1～3年。白細胞中的細菌數(shù)量相對較少，因此需要采集全血樣本進行培養(yǎng)。也可采取流產(chǎn)胎兒、胎盤、陰道分泌物等進行分離培養(yǎng)。培養(yǎng)后，按常規(guī)方法進行鑒定，也可用PCR方法、定量PCR方法鑒定。

4.2 血清學診斷

犬布魯氏菌與牛、羊、豬布魯氏菌不同的是其抗原類型為粗糙型而不是平滑型［27］。常用的血清學檢測方法有快速平板凝集實驗（RSAT或ME-RSAT）、試管凝集試驗（TAT），其他方法，如間接免疫熒光（IFA）、瓊脂凝膠免疫擴散、ELISA等則較少應(yīng)用。

4.2.1 RSAT和ME-RSAT：快速平板凝集實驗（RSAT）是一種快速的檢測方法，1974年在美國就開始使用，并制成了商業(yè)化的檢測卡。檢測速度快，2分鐘就可以完成。感染后34周便可出現(xiàn)凝集現(xiàn)象［28］。ME-RSAT是在RSAT的基礎(chǔ)上做了改進，加入了2-巰基乙醇（2-ME），增加了試驗的特異性。ME-RSAT用來復檢RSAT檢出的陽性血清［29］。用RSAT檢查犬布魯氏菌病迄今無統(tǒng)一標準，墨西哥以1∶100++為陽性，美國采用1∶200++為判定標準，日本取1∶320++作為分離犬種菌的標準。我國由尚德秋提出以1∶80～100++為陽性標準。以≥1∶80++為標準剖殺犬分離菌的陽性率為47.6％，以≥1∶320++為準分離菌的陽性率為79.2％［30］。

4.2.2 試管凝集試驗（TAT）：試管凝集試驗也是用來復檢經(jīng)RSAT或ME-RSAT確定的犬布魯氏菌陽性血清。陽性反應(yīng)的抗體滴度出現(xiàn)在感染后的2～4周。抗原是加熱滅活的犬布魯氏菌?？贵w滴度在1∶200就可判定為陽性。當抗體滴度大于1∶200時，在血液培養(yǎng)時就可以檢測到細菌。當檢測的滴度低于1∶200時，2周后要進行一次復檢。TAT檢測是敏感的，但是不夠特異，可能會有假陽性的結(jié)果［33］。

5 治療

目前還沒有理想的犬布魯氏菌病治療的方法和藥物。布魯氏菌寄生在細胞內(nèi)，并周期性的繁殖，時常會出現(xiàn)菌血癥，從而給藥物治療帶來了困難。單一的抗生素治療效果不佳，也不被推薦使用［26，32］。最好的治療方法是四環(huán)素類抗生素與鏈霉素聯(lián)合使用。抗生素治療一般需要治療2～3個療程，大約需要1～2個月的時間?？股刂委煷嬖诘膯栴}是，細菌容易產(chǎn)生耐藥性，而且容易復發(fā)。

6 預防

在發(fā)情前期或發(fā)情期的血清學檢測是比較準確的，因為此時布魯氏菌數(shù)量在激素的影響下會上升。檢測出的所有布魯氏菌陽性犬應(yīng)撲殺。同時犬飼養(yǎng)場應(yīng)該至少隔離一個月以上［18，33］。檢測為布魯氏菌陽性的犬將不能用于繁殖。健康犬與感染的犬要嚴格分離［34］。感染布魯氏菌的母犬能夠?qū)⒉剪斒暇鞑ソo其后代?；疾∪鄶?shù)實施卵巢摘除或閹割手術(shù)，但是手術(shù)后的犬仍然可以帶菌多年。布魯氏菌病雖不能引起犬的死亡，但是因其引起的繁殖障礙，卻能帶來很大的經(jīng)濟損失。家養(yǎng)寵物犬可以通過散養(yǎng)犬或是野犬意外的交配而感染布魯氏菌。目前還沒有犬的疫苗可以應(yīng)用。種犬場需要每年檢測一次。犬舍內(nèi)一旦發(fā)現(xiàn)犬布魯氏菌病，所有的犬都要接受檢疫。布魯氏菌陽性犬要隔離，并且每月都要復檢一次，直到無陽性犬存在。處理死亡的動物或感染的組織時要帶手套并穿工作服。常用的消毒藥有季銨鹽、1％次氯酸鈉或漂白粉、強力碘溶液、70％的乙醇或甲醛。當前預防和控制犬布魯氏菌病應(yīng)做好如下工作：（1）淘汰全部陽性犬（以血清學檢測為標準）；（2）加強國內(nèi)狗肉市場的監(jiān)管力度，做好監(jiān)督和管理工作；（3）加強對進口犬和種犬的檢疫；（4）做好伴侶犬的定期檢疫工作；（5）相關(guān)的職業(yè)人群加強個人防護。

7 公共衛(wèi)生安全

自60年代末期，人們分離到犬布魯氏菌以來，全世界已經(jīng)報道了30多例犬布魯氏菌引起人布魯氏菌病的病例［2-5］。人和其他靈長類動物對犬種布魯氏菌有相對的抗力。感染犬種布魯氏菌者主要是專業(yè)實驗室人員、動物管理技術(shù)人員、將犬作為伴侶動物的飼養(yǎng)者、以及其他與犬有密切接觸的職業(yè)人群。

人感染犬布魯氏菌發(fā)病后的癥狀是多種多樣的，主要表現(xiàn)為波浪熱、寒戰(zhàn)、不適、體重減輕。其他癥狀有頭痛、惡心、肌肉以及關(guān)節(jié)酸痛、淋巴結(jié)腫大等。還可引起人的眼睛損傷和心內(nèi)膜炎。所有的病人凝集素抗體效價高于1∶100，在病人發(fā)燒期間可從血液中分離到犬種布魯氏菌［35］?；加忻庖呷毕莶〉膫€體更容易感染布魯氏菌，如癌癥病人、HIV患者以及接受移植的患者，同時兒童、孕婦等都容易感染布魯氏菌病。由此看來，犬布魯氏菌病對人的影響一時難以消除，檢疫、凈化是項長期而艱巨的工作。

8 展望

一是加強布魯氏菌病的基礎(chǔ)研究。未來很長的一段時間內(nèi)，布魯氏菌病仍將是世界性的公共衛(wèi)生問題，我國的布魯氏菌病防制仍面臨著巨大的挑戰(zhàn)。客觀技術(shù)條件的制約以及細菌的特殊性和復雜性，導致布魯氏菌的基礎(chǔ)研究嚴重滯后。有關(guān)防制實踐的一系列重大問題長期懸而未決，包括：不同種屬感染宿主的遺傳基礎(chǔ)和分子機制；同種屬內(nèi)不同菌株間生物學表型高度多樣性的分子遺傳基礎(chǔ)及其機制；毒力相關(guān)基因及其功能機制；弱毒（疫苗）株的致弱分子基礎(chǔ)及其機制；病原與宿主間互動機制，包括病理發(fā)生的分子機制，布魯氏菌在體內(nèi)巨噬細胞內(nèi)存活、增殖及逃避免疫攻擊的分子機制；免疫保護機制及保護性免疫原基因和功能蛋白等等。伴隨著基因組—蛋白組相關(guān)技術(shù)、基因芯片技術(shù)和基因組隨機、定向突變技術(shù)的成熟與突破，以及細菌“毒力島”、“代謝島”相關(guān)功能基因組和功能蛋白組比較研究的興起，特別是布魯氏菌基因組工作的相繼完成，為這些基礎(chǔ)問題的解決提供了重大契機。

二是加強我國犬布魯氏菌病的流行病學調(diào)查，開展犬布魯氏菌病監(jiān)測和預防研究。由于犬飼養(yǎng)數(shù)量的增多以及與人類的密切接觸，使得犬布魯氏菌病將成為未來人類感染布魯氏菌病的主要傳播方式之一。我國對犬布魯氏菌病的分布、流行情況還不是十分了解，缺乏有效的監(jiān)測手段，疫苗研究幾乎為零，這樣既不利于犬的繁殖和飼養(yǎng)，也影響了人和家畜布魯氏菌病的防控。因此，加大投入力度，廣泛開展犬布魯氏菌病流行病學調(diào)查，研究簡便快速、高通量的監(jiān)測技術(shù)，研制適合犬應(yīng)用的疫苗，對于犬、家畜和人類布魯氏菌病的防控均具有重要的意義。

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