陳 琦,丁 娜,張振武,曹振杰,何智麗

鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院小兒外科鄭州 450052

△男,1963年生,碩士,主任醫(yī)師,研究方向:小兒胃腸道畸形

先天性腸閉鎖是新生兒常見(jiàn)的胃腸道畸形,目前病因尚不明確,手術(shù)效果也不甚理想。近年發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10(fibroblast growth factor 10, FGF10)與小鼠的胃腸道發(fā)育密切相關(guān),FGF10基因缺陷的小鼠存在胃腸道畸形,如十二指腸閉鎖[1]和結(jié)腸閉鎖[2]等。同時(shí)有研究[3]證實(shí)骨形成蛋白 4 (bonemorphogenetic protein 4,BMP4)在神經(jīng)修復(fù)中起重要作用,可能與腸神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育成熟有關(guān)。作者觀察了先天性腸閉鎖近端腸壁不同部位組織中FGF10和BMP4蛋白的表達(dá)情況,探討2者與先天性腸閉鎖的關(guān)系,為臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 選擇 2008年 7月至 2009年3月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院經(jīng)病理檢查確診并行手術(shù)治療的先天性腸閉鎖患兒 20例,患兒父母均知情同意,術(shù)中留取腸閉鎖處、閉鎖處近端5和10 cm處腸壁全層組織。該組患兒中,男 12例,女 8例,年齡1～6 d,均為足月兒,為單發(fā)閉鎖,術(shù)中未發(fā)現(xiàn)其他腸道合并畸形。同時(shí)取無(wú)病理改變的腸管組織 10例,取自相同年齡的非胃腸道畸形部分腸管切除患兒及非胃腸道畸形死亡足月兒,其中男 6例,女 4例,年齡1～6 d。

1.2 正常腸管組織和腸閉鎖處組織 FGF10及BM P4蛋白檢測(cè) 所有標(biāo)本均經(jīng)中性甲醛溶液固定,石蠟包埋,4μm厚連續(xù)切片,免疫組織化學(xué)染色采用SP法,嚴(yán)格按照試劑盒(購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。光鏡下觀察肌間神經(jīng)叢和黏膜下層神經(jīng)叢及周?chē)?xì)胞的染色情況。FGF10及BMP4蛋白的免疫組織化學(xué)染色以腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下層神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色至棕褐色顆粒為陽(yáng)性。采用Biosens Digital Imaging System圖像分析系統(tǒng)對(duì)所有標(biāo)本的圖像進(jìn)行定量分析,取平均灰度值為FGF10及BMP4蛋白表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0對(duì)正常腸管組織和腸閉鎖處組織FGF10及BMP4蛋白表達(dá)量行t檢驗(yàn),對(duì)閉鎖處、閉鎖近端5和10 cm處組織FGF10及BMP4蛋白表達(dá)量行重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

FGF10、BMP4蛋白定位于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞胞質(zhì)中,組織中陽(yáng)性細(xì)胞分布呈異質(zhì)性(圖1)。腸閉鎖處腸管組織FGF10及BMP4蛋白表達(dá)量均低于正常組織,見(jiàn)表1;且腸閉鎖處組織FGF10及BMP4蛋白表達(dá)量與閉鎖近端5和10 cm處組織的表達(dá)量比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表 2。

圖1 不同腸管組織中FGF10及BM P4蛋白的表達(dá)情況(SP)A:FGF10蛋白(×200);B:BMP4蛋白(×400);1:正常腸管組織;2:腸閉鎖處組織;3:閉鎖近端5 cm處組織;4:閉鎖近端10 cm處組織。

表1 正常腸管組織與閉鎖腸管組織FGF10及BM P4蛋白表達(dá)量的比較

表2 閉鎖腸管組織與閉鎖近端5和10 cm腸管組織FGF 10及BMP4蛋白表達(dá)量的比較

3 討論

先天性腸閉鎖是常見(jiàn)的先天性消化道畸形,目前病因不明,是造成先天性消化道梗阻的原因之一[4]。先天性腸閉鎖主要臨床癥狀為嘔吐、腹脹和便秘,往往伴有吸入性肺炎,全身情況迅速惡化。先天性腸閉鎖常伴發(fā)其他畸形,可見(jiàn)先天性腸閉鎖與胚胎期全身發(fā)育缺陷也有關(guān)。而部分腸閉鎖患兒在術(shù)后吻合口通暢、無(wú)其他腸道機(jī)械性梗阻的情況下,仍出現(xiàn)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的腸道動(dòng)力功能紊亂,提示術(shù)后腸功能障礙的發(fā)生可能與閉鎖近端腸管的嚴(yán)重?cái)U(kuò)張有關(guān)。

FGFs是一類(lèi)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)的多功能肽類(lèi)生長(zhǎng)因子,由150～200個(gè)氨基酸組成,它們通過(guò)結(jié)合相應(yīng)的受體在多種器官的發(fā)育過(guò)程中起調(diào)控作用[5]。FGF10是FGFs家族的成員之一,在消化道、肺及甲狀腺等的胚胎發(fā)育中發(fā)揮重要作用。BMPs又稱骨形態(tài)發(fā)生蛋白,是一組具有類(lèi)似結(jié)構(gòu)的高度保守的功能蛋白[6]。Goldstein等[7]使用受體阻斷劑阻斷BMP4在雞胚腸道的表達(dá),結(jié)果導(dǎo)致腸神經(jīng)嵴細(xì)胞聚集形成神經(jīng)節(jié)的速度變緩,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞減少。這提示BMP4與腸神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育成熟有關(guān)。

作者采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)先天性腸閉鎖處、腸閉鎖近端5和10 cm處腸管組織和正常腸管組織中FGF10和BMP4的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,正常腸管和先天性腸閉鎖近端10 cm處FGF10和BMP4蛋白均有表達(dá)且表達(dá)較強(qiáng),而閉鎖處和閉鎖近端5 cm處FGF10和BMP4蛋白表達(dá)較弱,尤其距離閉鎖端越近FGF10和BMP4的表達(dá)越弱,這提示先天性腸閉鎖近端腸管的FGF10和BMP4表達(dá)異常。FGF10和 BMP4的減少將影響FGFs、BMPs信號(hào)通路的正常傳遞,從而影響多種器官的胚胎發(fā)育包括腸管的發(fā)育。研究[8]證實(shí)直腸末端畸形,如肛門(mén)閉鎖、肛門(mén)狹窄等與FGF10的缺失有關(guān),并且畸形的位置越高基因表達(dá)越弱。而B(niǎo)MP4也已經(jīng)被證實(shí)在很多胃腸道先天性畸形,如先天性巨結(jié)腸組織中表達(dá)異常,BMP4的異常表達(dá)會(huì)進(jìn)一步影響下游信號(hào)分子的表達(dá),從而影響神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)與成熟[9]。

小腸閉鎖術(shù)后常出現(xiàn)腸道功能不良,發(fā)病原因尚不明確,但普遍認(rèn)為是由于閉鎖近端切除范圍不夠引起的。作者發(fā)現(xiàn)在腸閉鎖處、腸閉鎖近端 5 cm處, FGF10和BMP4的表達(dá)均減少,這就能解釋為什么腸閉鎖近端切除范圍過(guò)短會(huì)出現(xiàn)腸動(dòng)力障礙,而腸閉鎖近端腸管10 cm處FGF10和BMP4的表達(dá)接近正常腸管,這提示在腸閉鎖的手術(shù)中為了保證術(shù)后腸功能順利恢復(fù),腸管的切除范圍應(yīng)該超過(guò)10 cm。

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