張建忠

（江蘇如東縣人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 如東 226400）

細菌性陰道病(Bacterial Vaginosis，BV)是一種育齡期婦女常見的、由正常陰道菌群與分泌物生化性質(zhì)改變而引起的一種陰道炎癥。感染率約15%～30%，而且易復(fù)發(fā)[1-2]。BV在細菌學(xué)上表現(xiàn)為陰道正常菌群(乳酸桿菌)減少，而加德納菌，擬桿菌屬、動彎桿菌等厭氧菌以及人型支原體大量增殖，通常易引起孕婦早產(chǎn)、盆腔炎癥、HIV獲得性感染等[3]。臨床上仍以經(jīng)典的Amsel法為診斷BV的金標準。但Amesl法檢測，操作繁瑣、干擾因素較多，本文對460例用Amesl法診斷的患者再行細菌性陰道病聯(lián)合檢測法進行檢測，旨在觀察其臨床適用價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源 臨床診斷為BV的患者460例作為觀察組；對照組為排除滴蟲、真菌等明確病原感染的非BV門診體檢人群，共500例。所有被檢查者要求就診前3d無性生活、陰道灌洗及用藥。樣本均采用無菌棉拭紙在陰道后穹隆處采集足夠量的陰道分泌物，每位受檢者同時采集3份樣本，立即送檢。

1.2 BV診斷標準 以Amsel法臨床判斷為主要依據(jù)[1]。

1.3 方法

1.3 .1金標準Amsel法 (1)用pH試紙檢測pH值， pH 值＞4.5；(2)陰道分泌物稀薄，有異味；(3)分泌物加入2～3滴KOH(10%～15%KOH)有腥臭味，即氨試驗陽性；(4)濕片鏡檢到線索細胞。以上4項中至少有3項符合即為細菌性陰道病陽性。

1.3 .2陰道清潔度分級，嚴格按文獻要求進行操作和報告[4]。即標本加生理鹽水一滴，涂片后高倍鏡檢查，根據(jù) 所見的上皮細胞、白細胞、陰道桿菌與雜菌的數(shù)量進行判斷，同時涂片，等干燥后經(jīng)劉氏染色液染色油鏡鏡檢以作對照。BASO劉氏染色液由武漢金宏生物科技發(fā)展有限責(zé)任公司提供。

1.3 .3用北京中生金域診斷技術(shù)有限公司提供的BV聯(lián)合測定試劑盒檢測陰道分泌物過氧化氫(H2O2)濃度、白細胞酯酶、唾液酸苷酶，具體操作方法為將取得的陰道分泌物用專用稀釋液0.5m l稀釋混勻并反復(fù)擠壓棉簽，用一次性塑料吸管將稀釋的陰道分泌物液分別滴1滴(約35μl)到檢測板反應(yīng)孔中，再在唾液酸反應(yīng)孔中加1滴唾液酸酶顯色液，將反應(yīng)板置于37℃恒溫干浴器15min后觀察和記錄結(jié)果：過氧化氫(H2O2)濃度(過氧化物酶法)：陰道乳酸桿菌標志物，≥2μmol/L顯紫色、 紅色為陰性，＜2μmol/L顯藍色為陽性；唾液酸苷酶(5溴-4氯-3吲哚苷唾液酸苷鹽法):陰道加德納菌等BV致病菌標志物，無顏色變化為陰性，變紫色、紅色為陽性；白細胞酯酶(5溴-4氯-3吲哚乙酸鹽法)：炎性細胞的標志物，無顏色變化為陰性，變?yōu)樗{色或綠色為陽性。以上項目操作嚴格按照我室SOP文件進行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗結(jié)果用Stata 7.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料采用χ2檢驗統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 BV組和對照組按照陰道清潔度分級 由表1可知，BV組在高倍鏡下鏡檢有37例被誤判為陰道清潔度Ⅱ級。

表1 BV組和對照組按照陰道清潔度分級

2.2 BV組和對照組聯(lián)合檢測試劑盒各單項試驗檢測結(jié)果 由表2可知，BV組與對照組比較3項試驗的差異均具統(tǒng)計學(xué)意義。BV患者陰道分泌物中H2O2、唾液酸苷酶、白細胞酯酶檢測敏感性分別為74.78%、93.91%、92.83%，特異性分別為 92.6%、99%、78.8%。陽性預(yù)測值分別為90.29%、99.31%、80.11%，陰性預(yù)測值分別為79.97%、94.65%、92.27%。

表2 BV組與對照組聯(lián)合檢測試劑盒3項試驗檢測結(jié)果

2.3 聯(lián)合檢測H2O2濃度、唾液酸苷酶、細胞酯酶的平行試驗[5]對BV的診斷價值 由表3可知H2O2濃度+唾液酸苷酶組合雖然特異性略有下降，但可達到94.64%，而聯(lián)合檢測診斷敏感性可大大提高，幾乎達到100%（98.46%），且亦具有很好的準確性（90.31%），因白細胞酯酶特異性欠佳，其他組合的特異性亦較差，見表3。

表3 聯(lián)合檢測H2O2、唾液酸苷酶、細胞酯酶對BV的診斷價值(%)

3 討論

BV感染的細菌能產(chǎn)生粘蛋白水解酶和唾液酸酶，破壞生殖道具有保護作用的粘蛋白外殼成分，導(dǎo)致其他病原微生物進入宮腔，并激發(fā)炎癥反應(yīng)[6]，故對于BV應(yīng)做到早診斷，早治療。診斷BV一般采用的金標準是Amesel標準，但該方法檢測結(jié)果因受主觀影響因素較多而影響了臨床診斷的準確性[7]。而BV聯(lián)合測定試劑盒是對陰道分泌物中H2O2濃度、白細胞酯酶、唾液酸苷酶進行聯(lián)合測定。其中陰道分泌物中H2O2濃度可了解患者陰道內(nèi)產(chǎn)H2O2乳酸桿菌的生態(tài)狀況，分析陰道微生態(tài)是否正常；唾液酸苷酶是由陰道菌群中引發(fā)的病原體分泌的，其活性與病原菌數(shù)量成正相關(guān)[8]，檢測唾液酸苷酶活性可了解病原體定居和繁殖的情況。白細胞酯酶陽性是陰道黏膜受損或已有炎癥的標志，上述三者變化與BV發(fā)生時陰道內(nèi)環(huán)境的改變相伴隨，可作為BV診斷的輔助實驗手段。雖然白帶三項檢測BV組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，但從3項檢測BV的實驗敏感性看依次為唾液酸苷酶、白細胞酯酶、H2O2濃度；白細胞酯酶的特異性較差，H2O2濃度敏感性不夠，而唾液酸苷酶有較好的敏感性、特異性(93.91%、99%)。聯(lián)合檢測的平行試驗顯示如H2O2濃度和唾液酸苷酶任一項陽性即診斷為BV可以大大提高其敏感性，幾乎為100%（98.46%），且同時具有較好的特異性（97.64%）和準確性(90.31%)。而白細胞酯酶特異性欠佳，陽性者可提示陰道粘膜受損或已并發(fā)炎癥，可用于對BV診斷時的輔助參考。故BV3項指標檢測相對于經(jīng)典的Amsel法具有操作簡便、指標更客觀等優(yōu)點。適用于快速診斷細菌性陰道病，從而使患者得以早期診斷和治療。

雖然文獻認為陰道清潔度Ⅰ、Ⅱ級均為正常，Ⅲ、Ⅳ級時多見于各種陰道炎[4]，但我們經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)占BV組8.04%（37/460）的病例經(jīng)常規(guī)濕片高倍鏡下陰道清潔度分級為Ⅱ級，而同時進行劉氏染色后油鏡下檢查卻為Ⅲ級就其原因我們分析一般是由于在高倍鏡下的陰道分泌物濕片背景中的少量雜菌不易辨認從而出現(xiàn)報告偏差，這一點應(yīng)引起臨床足夠的重視。

[1]豐有吉,沈 鏗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:270.

[2]馬玉楠.細菌性陰道病及其診斷[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志,2000,23(5):303-304.

[3]Fredricks DN,Fiedler TL,Marrazzo JM.Molecular identification of bacteria associated with bacterial vaginosis[J].N Engl JMed,2005,353(18):1899-1911.

[4]熊立凡,李樹仁.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].第3版,北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:267.

[5]楊振華.臨床實驗室質(zhì)量管理.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:119-120.

[6]袁江英,李琴芳.測定陰道唾液酸酶活性診斷細菌性陰道病.實用婦產(chǎn)科雜志,2001,17(2):75.

[7]熊海燕,張克霞,王 朔,等.微生態(tài)檢測在細菌性陰道病診斷中的評價[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗雜志,2008,23(1):18-19.

[8]Sabina C,Jennifer FC,Manuela D S,et al.Among pregnantwomen with bacterial vaginosis， the hydrolytic enzymes sialidase and prolidase are positively associated with interleukin-1β[J].Am JObstet Gynecol,2008,198(1):132.