江 波綜述 趙金奇審校

肺癌是目前全球范圍內(nèi)死亡率最高的惡性腫瘤,在確診的患者中,約有 80%為非小細胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)。NSCLC的化療藥物以吉西他濱(gem citabine,GEM)、紫杉醇(paclitaxel,PTX)、多西紫杉醇(docetaxel,TXT)等為主,患者總體 5年生存率仍低于 15%。導致化療失敗的主要原因之一,就是腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性。核苷酸還原酶M 1(ribonucleotide reductase subunit l,RRM 1)是最近被廣泛關(guān)注的1個基因,在 NSCLC吉西他濱治療中所起的作用,尤其在耐藥方面,已經(jīng)越來越受到重視。我們就此對 RRM 1與非小細胞肺癌吉西他濱化療耐藥的相關(guān)性研究進展情況作一綜述。

1 RRM 1及其作用機制

作為吉西他濱作用靶點之一的核苷酸還原酶(ribonucleotide reductase,RR)是 DNA合成通路中的限速酶,它能使二磷酸核苷酸轉(zhuǎn)化為二磷酸脫氧核苷酸,后者是DNA合成和修復(fù)所必不可少的原料。因此,RR是細胞存活的關(guān)鍵酶。RR包括 2個亞單位:RRM 1和 RRM 2。RRM 2是 1個金屬結(jié)合位點,有攜帶接觸抑制區(qū),控制底物轉(zhuǎn)化的功能;RRM 1是核苷酸結(jié)合位點,控制底物的特異性和整個酶的活性,同時也是核苷類似物系的化療藥物的結(jié)合位點[1]。RRM 1基因編碼核糖核苷酸還原酶 M亞單位,是腫瘤抑制因子,也是Gem的分子靶點[2]。RRM 1基因定位于染色體 11q15.5區(qū)域,這是 1個可出現(xiàn)于多種惡性腫瘤的雜合子丟失(loss of heterozygosity,LOH)區(qū)域,稱為LOH 11A,該區(qū)域與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān),75%的NSCLC患者有這樣的雜合性缺失,其中 88%的非小細胞肺癌、57%的鱗癌和40%的腺癌存在這種雜合性缺失。有研究表明[3],這種缺失與預(yù)后有一定相關(guān)性,沒有 LOH的患者要比具有 LOH的患者能有更好的預(yù)后及更長的生存期。

臨床和細胞生物學研究均證實 LOH 11A存在腫瘤抑制基因。許多研究[4]證實該基因為 RRM1,其編碼核苷酸還原酶亞組 M1,人類 RRM 1包括 19個外顯子,在腫瘤形成中,人類RRM 1并沒有發(fā)生突變,因此,RRM1最有可能作為腫瘤抑制基因發(fā)揮作用。1個動物模型顯示 RRM1能夠影響DNA化學損傷修復(fù)的有效率[5]。RRM 1過表達的轉(zhuǎn)基因小鼠修復(fù)DNA的速度比非轉(zhuǎn)基因動物快。這表明,RRM 1通過及時有效地修復(fù)致癌物誘導的基因組破壞,在腫瘤易感性方面扮演著關(guān)鍵的角色[6]。

2 吉西他濱的作用機制

吉西他濱是嘧啶類抗代謝藥物,為核苷酸還原酶抑制劑。在細胞內(nèi)經(jīng)過核苷激酶的作用轉(zhuǎn)化成具有活性的二磷酸核苷(dFdCDP)及三磷酸核苷(dFdCTP),通過抑制DNA合成而發(fā)揮細胞毒作用[7]。首先,dFdCDP抑制 RR的活性,使合成 DNA所必需的三磷酸脫氧核苷(dCTP)產(chǎn)生受抑制,減少了 DNA合成的原料。其次,dFdCTP與 dCTP競爭摻入至 DNA鏈中,DNA聚合酶ε不能去除摻入的吉西他濱及修復(fù)延長的DNA鏈,從而引起DNA鏈斷裂最終導致細胞凋亡。

3 RRM 1表達與吉西他濱耐藥的關(guān)系

吉西他濱干擾了核苷酸還原酶的功能而減少脫氧核苷酸的產(chǎn)生,最終影響 DNA的合成。在對GEM耐藥的人的口咽癌的KB細胞克隆體中可以檢測到 RR高表達[8]。因此可推測RRM 1的表達可能與吉西他濱耐藥有關(guān)。近來一些研究[9]顯示:當吉西他濱作為 1種影響因素作用于腫瘤細胞時,RRM 1的表達水平增高會使腫瘤細胞對吉西他濱的耐藥性增加。有些學者[10,11]通過將細胞連續(xù)暴露于逐漸擴大的藥物劑量的培養(yǎng)基中培育了 2個吉西他濱耐藥細胞株。寡核苷酸表達芯片檢測發(fā)現(xiàn)RRM1是這兩個細胞株中表達水平改變超過 5倍的唯一基因。這個結(jié)果被RT-PCR、免疫印跡和功能測定所證實。另1個重要結(jié)果是 RR的催化亞基 RRM 2、脫氧核苷酸激酶、胞嘧啶脫胺酶水平和RR的活性沒有隨著吉西他濱耐藥的出現(xiàn)而明顯改變。這些實驗還顯示:RRM 1在判斷患者預(yù)后方面起了重要的作用。一些研究結(jié)果還帶來了新的研究方向,包括根據(jù) RRM 1的藥物基因組學的檢測結(jié)果判斷是否可以提高治療效果和生存期及是否可以減輕患者不良反應(yīng)[12]。

4 RRM 1在非小細胞肺癌中的表達與吉西他濱耐藥的臨床關(guān)系

一項手術(shù)前接受吉西他濱/鉑類新輔助化療的患者參與的臨床研究表明,RRM 1水平最低的患者中位生存期相對較好[13]。另來自于 75例非小細胞肺癌患者腫瘤活檢組織的RRM 1的表達水平顯示:低水平 RRM 1表達的患者在經(jīng)過吉西他濱/順鉑聯(lián)合化療后療效會更好;RRM1水平也會影響疾病進展和生存時間,但這種預(yù)測價值在應(yīng)用長春瑞濱/順鉑或者紫杉醇/順鉑方案化療的患者身上看不到[14]。在 Rosell等[15]有關(guān)吉西他濱/順鉑方案治療晚期非小細胞肺癌的大規(guī)模隨機臨床對照試驗中,可以很明顯的觀察到:RRM 1過度表達與生存期的顯著縮短有獨立相關(guān)性,但在長春瑞濱/順鉑治療組沒有。該研究首次報道了RRM 1表達在吉西他濱/順鉑治療的Ⅳ期非小細胞肺癌患者生存方面的獨特效應(yīng)。隨后的臨床研究也顯示:高水平表達 RRM 1的 NSCLC患者預(yù)后較差。Gautam等[16]采用定量 PCR方法檢測了 22例接受健擇/順鉑化療的 NSCLC患者的腫瘤組織中 RRM 1mRNA的表達,發(fā)現(xiàn)低水平表達 RRM 1mRNA的患者對化療反應(yīng)較好,而且對疾病進展時間也有影響,甚至可提高生存率。Bep ler等[11]在一組Ⅱ期臨床試驗接受吉西他濱/卡鉑化療的局部晚期 NSCLC患者的研究中,RRM 1RNA表達與腫瘤縮小程度呈負相關(guān),也就是說,瘤內(nèi)RRM 1RNA低表達患者化療療效好于高表達者。一些回顧性的研究[17]也顯示,接受過吉西他濱和順鉑化療的 NSCLC患者,低表達 RRM 1mRNA的患者生存期更長。近來有研究[18]證明:DNA修復(fù)能力是腫瘤易感性和腫瘤化療敏感性密切相關(guān)的雙刃劍。DNA修復(fù)能力越強,腫瘤的易感性就越低,而對化療的抵抗作用就越強。RRM 1的兩面性恰恰與這種理論相符:RRM 1的高表達能夠使機體對理化因素導致的 DNA損傷有較強的修復(fù)能力,減少了人類患腫瘤的危險,而且早期的NSCLC患者單獨接受手術(shù)治療時,RRM 1高表達者預(yù)后較好;同時 RRM 1的高表達也導致含吉西他濱/順鉑化療產(chǎn)生的腫瘤細胞DNA損傷修復(fù)能力增強,其結(jié)果表現(xiàn)為耐藥現(xiàn)象,晚期的 NSCLC患者接受吉西他濱/順鉑化療時,RRM 1高表達預(yù)后較差。

總而言之,體內(nèi)外研究一致表明 RRM1是吉西他濱療效的重要細胞決定因子。RRM 1高表達的患者比低表達的患者較難從吉西他濱/順鉑化療中獲益。那么 RRM 1表達水平高低是否可以成為篩選化療方案的一項指標,通過對RRM1的檢測,預(yù)測不同人群對吉西他濱的敏感程度以制定個體化化療方案,從而提高藥物治療的有效率。通過分析,目前國內(nèi)外的各項研究中,患者例數(shù)相對較少,所得到的腫瘤標本多為早期,而對于晚期NSCLC患者 RRM 1表達水平的檢測還需要大量可靠的樣本。未來吉西他濱的臨床試驗應(yīng)該考慮如何選擇患者和基于 RRM 1表達的分層分析,這對于化療的患者而言是非常重要的。

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