何 峰,陳 珺

(1天津醫(yī)科大學(xué)研究生院,天津市第四中心醫(yī)院,天津 300140；2天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院)

急性心肌梗死(AMI)后,梗死心肌纖維化可致細(xì)胞間分離,使心室肌發(fā)生重構(gòu),心律失常發(fā)生率升高。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)可通過抑制心室重塑,抑制神經(jīng)內(nèi)分泌激活,明顯改善 AMI患者的預(yù)后。目前,心肌間縫隙連接蛋白 43(Cx43)與AMI后心律失常是臨床研究的熱點,關(guān)于 ACEI對AMI后心肌 Cx43表達的影響尚不清楚。2003年 3～9月,本文通過制作大鼠 AMI模型,研究了 ACEI雷米普利對 AMI后心肌 Cx43表達的影響。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑 雷米普利購自北京安萬特公司,兔抗鼠 Cx43一抗購自美國 Zymed公司,PV-9000二步法免疫組化試劑盒為北京中杉金橋公司產(chǎn)品。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物模型制備 雄性大鼠 24只,體質(zhì)量(230±15)g,隨機分成對照組、AMI組和治療組。三組均行開胸手術(shù),其中術(shù)后 AMI組結(jié)扎冠脈左前降支；對照組(假手術(shù)組)只穿線不結(jié)扎冠脈；治療組結(jié)扎冠脈左前降支,同時用雷米普利 1.86 mg/(kg?d)分次灌胃,連續(xù) 8周；對照組、AMI組均以等量生理鹽水灌胃,時間同治療組。用 20%烏拉坦1 g/kg行腹腔淺麻醉,氣管切開后接呼吸機(潮氣量 3 ml/100 g,頻率 60次,呼吸比 2∶1)。于左側(cè)第2、3肋間打開胸腔暴露心臟,在左心耳與肺動脈圓錐間找到與左冠脈伴行的心大靜脈,用 3-0絲線結(jié)扎冠脈左前降支,以肢體導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn) ST段弓背上抬 ＞0.2 mV、持續(xù) 30 min以上作為模型成功的標(biāo)志。術(shù)畢恢復(fù)胸腔負(fù)壓后關(guān)閉胸腔,撤除呼吸機,恢復(fù)自主呼吸。

1.2.2 心肌 Cx43檢測 取各組新鮮心肌組織,在10%甲醛液中固定 24 h,AMI組及治療組分別取左室心肌梗死(MI)區(qū)、邊緣帶及非缺血區(qū)心肌組織作為標(biāo)本,其中 MI中心和邊緣帶取自左室側(cè)壁,非缺血區(qū)取自左室后壁。對照組取左室側(cè)壁和后壁,組織塊包括心肌全層,常規(guī)脫水、石蠟包埋,用于免疫組化樣品制備。免疫組化染色按試劑盒要求操作,在 Olympus顯微鏡下,每張切片隨機選取 5個視野,用圖像分析系統(tǒng)在 40×光鏡下對各組心肌 Cx43切片進行分析,測定每個視野下陽性物質(zhì)的平均光密度,取 5個視野的平均值。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件,數(shù)據(jù)以±s表示,組間數(shù)據(jù)比較行單因素方差分析和q檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 心肌 Cx43分布 對照組心肌 Cx43分布密集,排列規(guī)律,主要呈簇狀分布于與心肌纖維長軸垂直的細(xì)胞端—端連接部位；其分布密度在左室前壁和左室后壁,兩部位比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。AMI組 MI區(qū)心肌 Cx43完全消失,邊緣帶絕大部分消失,僅極少數(shù)分布于心肌細(xì)胞側(cè)—側(cè)連接處,或呈點狀分布于細(xì)胞表面；心肌 Cx43消失從 MI區(qū)→邊緣帶→非缺血區(qū)呈逐漸移行性變化,越靠近 MI區(qū)其消失越明顯。治療組 MI區(qū)及邊緣帶分布不均一性改善。

2.2 心肌 Cx43表達 AMI組 MI邊緣區(qū)、非缺血區(qū)心肌 Cx43分別為(0.253±0.023)、(0.409±0.018),治療組分別為(0.357±0.020)、(0.433±0.025),對照組(左室側(cè)壁、后壁)分別為(0.415±0.019)、(0.430±0.021)。與治療組比較,AMI組MI邊緣區(qū)、非缺血區(qū)心肌 Cx43表達均明顯降低(P均 ＜0.01)。

3 討論

雷米普利屬于 ACEI,其能抑制 AMI后心肌重塑,改善血流動力學(xué),減少心肌細(xì)胞凋亡,縮小 MI范圍,保護心肌,改善患者預(yù)后。心肌 Cx43是閏盤中相鄰兩細(xì)胞的功能接觸區(qū),是相鄰細(xì)胞電學(xué)耦聯(lián)的基礎(chǔ),是導(dǎo)致心肌細(xì)胞各向異性傳導(dǎo)的重要決定因素[1]。研究表明,正常心肌 Cx43端—端連接結(jié)構(gòu)形成低電阻通道,使電流易于越過 Cx43至鄰近細(xì)胞,有利于維持動作電位傳導(dǎo),減少電流損失,使心臟在電學(xué)上形成一個有序、同步活動的整體；其分布改變可致通道電阻增加,使局部發(fā)生傳導(dǎo)緩慢和傳導(dǎo)阻滯,誘發(fā)折返性心律失常發(fā)生[2]。心肌 Cx43的正常分布及其含量對維持心臟傳導(dǎo)具有重大意義。

本研究發(fā)現(xiàn),雷米普利具有保護心肌間隙連接結(jié)構(gòu)的作用。正常情況下,Cx43呈簇狀分布于與心肌纖維長軸垂直的細(xì)胞端—端連接部位[3]。本文AMI組梗死 8周后 MI區(qū)心肌 Cx43完全消失,MI區(qū)邊緣帶絕大部分消失,僅極少數(shù)分布于心肌細(xì)胞側(cè)—側(cè)連接處或呈點狀分布于細(xì)胞表面；且心肌Cx43消失從 MI區(qū)→邊緣帶→非缺血區(qū)呈逐漸移行性變化,越靠近 MI區(qū)消失越明顯。治療組 MI區(qū)邊緣帶的分布不均一性改善。表明雷米普利對左室AMI后心肌具有保護作用,其可使心肌電活動趨于同步,減少心律失常發(fā)生。

本研究中大鼠 AMI后心肌 Cx43分布明顯不均,雷米普利可改善其在不同區(qū)域的表達,改善 AMI的預(yù)后,減少心律失常發(fā)生。據(jù)此推論,AMI后雷米普利保護結(jié)構(gòu)的作用使得細(xì)胞間這種有益的信息傳導(dǎo)得以正常進行,保護了相鄰缺血細(xì)胞的安全電擴布,從而減少 AMI后各種心律失常發(fā)生,改善 AMI大鼠的預(yù)后。本研究為雷米普利抑制 AMI后心律失常發(fā)生的臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

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