王璐璐

錦州市農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)研究中心，遼寧 錦州 121002

北冬蟲夏草亦稱蛹蟲草。為麥角菌科蟲草屬真菌，是我國一種名貴藥用真菌，同時也是國家二級保護(hù)物種。它生在夜蛾科等昆蟲的蛹上，從蟲的頭部或蟲體上長出子座，新鮮時橙黃色。北冬蟲夏草具有鎮(zhèn)靜、平喘、抗心率失常、抗疲勞等功效，且能增強(qiáng)免疫能力，因而在國內(nèi)外倍受歡迎，人工栽培北冬蟲夏草是解決野生蟲草來源不足的良好途徑。本研究從北冬蟲夏草生長的環(huán)境因子著手，探索北冬蟲夏草生長的最適環(huán)境條件。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 菌種來源:沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物研究室

1.1.2 培養(yǎng)基

1）母種斜面培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200g 蔗糖20g瓊脂 20g 水 1000ml）

2）2液體原種培養(yǎng)基：20%馬鈴薯提取液中加入1%葡萄糖，1%蛋白胨， 0.5%KH2PO4，0.3%MgSO4，VB1微量（10mg/1000 ml）,PH調(diào)至5.8，121℃高壓滅菌0.5h。

3）人工栽培固體培養(yǎng)基：小麥28g 水42ml

1.1.3 試驗儀器和設(shè)備

高壓濕熱滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱， 超凈工作臺，無菌室。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌種篩選

1）原種的制備 選取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、早熟的北冬蟲夏草子實體，用0.1%升汞溶液，或75%的酒精進(jìn)行表面消毒后，用無菌水清洗表面藥液，置于盛有PDA培養(yǎng)基容器上方懸空，在21℃～23℃下靜置培養(yǎng)，待培養(yǎng)基表面出現(xiàn)星芒狀蟲草菌落時，在接種箱內(nèi)挑取單個或多個菌落置試管斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)。待蛹蟲草菌絲布滿斜面后再提純。獲得的孢子母種須經(jīng)出草比較試驗后，選取優(yōu)質(zhì)蟲草子實體再進(jìn)行一次組織分離，經(jīng)篩選后方可用于轉(zhuǎn)擴(kuò)栽培種。

2）斜面菌種的制備：將保存的菌種在超凈工作臺上轉(zhuǎn)接到以制好的斜面培養(yǎng)基上，每管可轉(zhuǎn)接20管，放在恒溫培養(yǎng)箱中21℃培養(yǎng)幾天，待菌絲布滿整個斜面時從恒溫培養(yǎng)箱中取出。

3）液體菌種的制備:將以制備好的液體培養(yǎng)基分裝入250ml的滴流瓶中，每瓶100ml。按常規(guī)方法進(jìn)行高溫濕熱滅菌121℃滅菌30min。在超凈工作臺上將斜面菌種轉(zhuǎn)接到液體培養(yǎng)基中，每支轉(zhuǎn)接30～50瓶，接種后放入21℃恒溫培養(yǎng)箱12h，斜面菌種沉底的挑出。然后放入轉(zhuǎn)速為80～120r/min 搖床培養(yǎng)5～7d，待形成均勻小球后即可用于栽培種。注意：如果培養(yǎng)液變混，有兩種可能性，一是細(xì)菌污染應(yīng)予以淘汰；二是由于菌絲生長過分粘稠所致，進(jìn)行鏡檢后才能使用。

4）固體培養(yǎng)基的接種與培養(yǎng)：將固體培養(yǎng)基裝入750ml的栽培瓶中，用聚乙烯朔料薄膜封口，進(jìn)行高壓濕熱滅菌（方法同上），冷卻至室溫后，用接種搶在無菌室內(nèi)將液體菌種打入栽培瓶中，每瓶菌種接200瓶。將接完種的栽培瓶放入21℃無菌室進(jìn)行培養(yǎng)。

1.3 蛹蟲草栽培環(huán)境條件的研究

1）試驗 內(nèi)容分別以菌絲體和出菇兩個階段進(jìn)行設(shè)置，溫度 ：18℃、21℃、25℃、27℃ ；接種量 ：0.5ml、1ml、5 ml。

菌絲體培養(yǎng)時間：設(shè)起泡和菌絲倒伏兩個處理。

2）出草時設(shè)置溫度 濕度和光照3個項目來培養(yǎng)觀察。

2 結(jié)果分析

蛹蟲草栽培環(huán)境條件的研究結(jié)果。

2.1 菌絲體培養(yǎng)階段各個處理結(jié)果如下：

表1 蛹蟲草不同溫度培養(yǎng)菌絲體生長情況

由表可知，菌絲體在 21℃生長最快；18℃、25℃生長狀況較好， 27℃生長滯緩，18℃菌絲長的較粗壯。

1）不同接種量對菌絲體生長的影響：接種量大菌絲長滿和變黃速度較快。

2）菌絲體培養(yǎng)時間對菌絲體生長的影響：菌絲氣泡取出：菌絲轉(zhuǎn)色快、現(xiàn)蕾早；菌絲倒伏取出：轉(zhuǎn)色慢 現(xiàn)蕾晚；因此，菌絲長滿后應(yīng)從恒溫箱取出見光培養(yǎng)，以刺激轉(zhuǎn)色出草。

2.2 出菇階段環(huán)境因素

2.2.1 溫度影響

從出草期不同階段的3個試驗批次來看：室溫15℃以下，菌絲生長滯緩，菌絲由營養(yǎng)生長向生殖生長的轉(zhuǎn)化受到抑制。10℃以下，大多數(shù)瓶內(nèi)出現(xiàn)菌絲自溶現(xiàn)象，出草情況很差。平均室溫18℃，菌絲轉(zhuǎn)化快、現(xiàn)蕾早、子實體生長旺盛，產(chǎn)量高。平均室溫25℃，菌絲轉(zhuǎn)化快，現(xiàn)蕾早，但是如果溫度高達(dá)27℃，子實體生長滯緩，多以分叉，瓶內(nèi)有大量冷凝水，有的瓶內(nèi)出現(xiàn)雜菌。

2.2.2 濕度影響

瓶內(nèi)濕度大，出現(xiàn)大量的氣生菌絲影響出草質(zhì)量；濕度小其生長速度受到抑制。培養(yǎng)基濕度應(yīng)該控制在50～55% 塑料紙上有水滴而瓶璧上水珠不多為宜。菌絲培養(yǎng)時室內(nèi)濕度控制在65%～70%；子實體生長階段空氣濕度控制在75%～85%。

2.2.3 光照的影響

菌絲生長階段不需要光照，光照會使培養(yǎng)基顏色加深，易形成氣生菌絲，并使菌絲提早形成菌被。在轉(zhuǎn)色階段需要光照強(qiáng)度100～200勒克斯，光線過弱，原基分化困難，出草少，子實體呈淡黃色，產(chǎn)質(zhì)量低。并且北冬蟲夏草蟲草子實體有很強(qiáng)的向光性，在前排放置的蟲草比后排放置的蟲草子座生長速度快。在子實體生長期間，經(jīng)常轉(zhuǎn)動栽培瓶，可保持良好的草行。

3 結(jié)論

1）采用沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物研究室菌種，小麥固體培養(yǎng)基配方進(jìn)行栽培，滅菌20min，接種后，進(jìn)行栽培管理，保持適宜的環(huán)境因素方可培育出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的蛹蟲草。

2）北冬蟲夏草變溫結(jié)實型真菌。菌絲最適生長溫度為18～25℃，原基形成以18℃為宜，原基分化時需要較大溫差刺激（8～10℃）。子實體生長最適溫度20～25℃。

3）北冬蟲夏草培養(yǎng)基含水量要求為55%～60%，含水量菌絲生長緩慢，過高培養(yǎng)基易酸敗。子實體發(fā)生和生長階段要求空氣相對濕度達(dá)65%～85%。濕度過大，會引起子實體腐爛。

4）北冬蟲夏草菌絲生長時不需要光，但轉(zhuǎn)色期間原基分化需光照強(qiáng)度100～200勒克斯的散射光，北冬蟲夏草蟲草子實體有很強(qiáng)的向光性。

5）通風(fēng)方面：北冬蟲夏草子座發(fā)生期需要氧氣，通氣量會形成二氧化碳積累過多，子座不能正常分化或出現(xiàn)密度大、子座纖細(xì)的畸形蟲草。