孟祥軍,齊杰,田莉

(沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室,遼寧 沈陽(yáng) 110034)

鹽酸法舒地爾 (Fasudil Hydrochloride,Fasudil,HA1077,AT877)其化學(xué)名為:六氫-1-(5-磺酰基異喹啉)-1(H)-1,4-二氮雜鹽酸鹽,英文名:Hexahydro-1-(5-isoquinolinesulfonyl)-1H-1,4-diazepine hydroch loride,分子式為:C14H17N3O2S?HCl,是日本 Asahi Chemical公司 1994年上市的商品名為 Eril的新型的鈣拮抗的血管擴(kuò)張劑,臨床用于治療腦血管痙攣引發(fā)的蛛網(wǎng)膜下出血。本品用于治療急性缺血性中風(fēng)、腦血管病和心絞痛后遺癥的功效正在臨床試驗(yàn)中[1-4]。

1 國(guó)內(nèi)外的研究開發(fā)進(jìn)展[5]

1.1 國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)狀況 自上世紀(jì) 90年代后期,心血管病已經(jīng)逐漸成為我國(guó)城鄉(xiāng)居民的第一位死因,目前已占死亡人數(shù)的近 40%。該領(lǐng)域的疾病主要是由于動(dòng)脈硬化、糖尿病、不良的脂血癥、高血壓和肥胖癥等因素造成的。隨著國(guó)外幾個(gè)主要產(chǎn)品專利的到期,結(jié)合幾種新產(chǎn)品的即將上市,將使該市場(chǎng)發(fā)生突破性的大變革。生產(chǎn)廠家越來(lái)越偏愛復(fù)合治療劑,特別是它們的開發(fā)被認(rèn)為是延長(zhǎng)成熟藥品的產(chǎn)品壽命和擴(kuò)大整個(gè)市場(chǎng)增長(zhǎng)的途徑。而且,消費(fèi)者也偏愛復(fù)合型的治療劑,因?yàn)橄朔迷S多藥片的不方便,改善了患者痊愈的可能性。據(jù) Datamonitor的最新報(bào)告,2007年世界心腦血管藥物市場(chǎng)的價(jià)值將超過(guò) 520億美元,我國(guó)心血管系統(tǒng)藥物市場(chǎng)狀況見表1。

由表1可知,鈣通道阻滯劑占據(jù)了心臟病治療用藥的最大市場(chǎng)份額,而鹽酸法舒地爾作為首個(gè)抑制肌球蛋白輕鏈磷酸化的藥物,與鈣離子拮抗劑不同,法舒地爾不是單純阻斷鈣離子內(nèi)流,而是作用于細(xì)胞內(nèi)。它不僅能抑制細(xì)胞內(nèi)鈣離子活動(dòng),還能抑制 MLCK和 PKC等多個(gè)蛋白酶,即抑制血管平滑肌收縮最終階段肌球蛋白輕鏈磷酸化和自由基的產(chǎn)生,使已經(jīng)痙攣的血管平滑肌松弛起到擴(kuò)張血管的作用,市場(chǎng)前景十分廣闊。

表1 我國(guó)心血管系統(tǒng)用藥各亞類的市場(chǎng)狀況表

1.2 國(guó)內(nèi)外有關(guān)該品的生產(chǎn)、使用情況 鹽酸法舒地爾是一種新型的 5-異喹啉磺胺衍生物,是首個(gè)抑制肌球蛋白輕鏈磷酸化的藥物。本品通過(guò)阻斷血管收縮過(guò)程的最終階段,肌球蛋白輕鏈磷酸化,來(lái)擴(kuò)張血管,抑制血管痙攣。由日本旭化成株式會(huì)社和名古屋大學(xué)聯(lián)合開發(fā)的新藥,于 1995年6月在日本被正式批準(zhǔn)上市,用于防治蛛網(wǎng)膜下腔出血后的腦血管痙攣及伴隨的腦缺血癥狀。2001年8月在我國(guó)獲得進(jìn)口注冊(cè)批準(zhǔn),開始在我國(guó)上市銷售,商品名 “依立盧”。2001年天津市藥物研究院和天津紅日藥業(yè)股份有限公司合作開發(fā)鹽酸法舒地爾及其注射液,2004年3月 17日我國(guó)批準(zhǔn)了天津紅日藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的鹽酸法舒地爾原料藥 (國(guó)藥準(zhǔn)字 H20040355)和規(guī)格為 2 ml:30 mg鹽酸法舒地爾注射液 (國(guó)藥準(zhǔn)字H20040356),商品名 “川威”。用于改善和預(yù)防蛛網(wǎng)膜下腔出血術(shù)后的腦血管痙攣及引起的腦缺血癥狀。

2 合成研究進(jìn)展

2.1 5-異喹啉磺酰氯鹽酸鹽的合成綜述[5-13]5-異喹啉磺酰氯,我們檢索得到的文獻(xiàn)全部使用氯化亞砜和 5-異喹啉磺酸反應(yīng)制備得到,不同的文獻(xiàn)使用的催化劑和氯化亞砜以及原料的量不同,詳見表2。

表2 合成參數(shù)對(duì)比

2.2 法舒地爾游離堿的制備綜述 法舒地爾游離堿的制備各個(gè)文獻(xiàn)大部分使用 5-異喹啉磺酰氯和高哌嗪進(jìn)行縮合反應(yīng),不同的是使用的溶劑,主要溶劑為二氯甲烷和三氯甲烷,考慮到毒性,應(yīng)首選二氯甲烷。

國(guó)外有一篇專利文獻(xiàn)使用四氫呋喃為溶劑直接用 5-異喹啉磺酰氯鹽酸鹽進(jìn)行縮合,得到收率41%的法舒地爾游離堿。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道后處理比較麻煩,產(chǎn)率不高,我們對(duì)此工藝進(jìn)行了探索性研究,經(jīng)過(guò)幾次研究,得到的產(chǎn)品質(zhì)量和收率均不理想,因此沒(méi)有深入研究。

2.3 鹽酸法舒地爾制備綜述 法舒地爾游離堿制備鹽酸法舒地爾的所參考的文獻(xiàn)均使用色譜方法,利用硅膠為填料用氯仿-甲醇為溶劑進(jìn)行洗脫得到高純度的法舒地爾游離堿。

我們從工業(yè)實(shí)際生產(chǎn)考慮計(jì)劃通過(guò)使用良好的原料和工藝,然后用重結(jié)晶的方法得到符合質(zhì)量要求的產(chǎn)品,而去除色譜分離的方法使生產(chǎn)成本大幅降低。

2.4 鹽酸法舒地爾精制方法綜述 以往文獻(xiàn)重結(jié)晶有兩種處理方法,一種為水-甲醇,另一種為甲醇-乙醚。我們對(duì)以上溶劑均進(jìn)行過(guò)研究,結(jié)果認(rèn)為前一種混合溶劑更適合我們的工藝。

2.5 化學(xué)反應(yīng)式

3 藥理毒理研究總結(jié)

3.1 藥物的有效性[15]法舒地爾通過(guò)抑制多種蛋白激酶發(fā)揮作用,如 Rho激酶、肌球蛋白輕鏈激酶 (MLCK)、蛋白激酶 A、G、C、Ki值分別為0.33,36,1.6,1.6,3.3 μmol/L。根據(jù) Ki值,可以推斷法舒地爾主要通過(guò)抑制 Rho激酶而發(fā)揮藥理作用。由于 Rho激酶參與了多種細(xì)胞功能,如平滑肌收縮、應(yīng)力纖維的形成、細(xì)胞骨架的重構(gòu)、細(xì)胞分化與遷移、細(xì)胞凋亡等,故法舒地爾通過(guò)阻斷 Rho激酶可以影響多種細(xì)胞功能,發(fā)揮其廣泛的藥理作用。

3.1.1 抑制鈣敏化效應(yīng),擴(kuò)張血管 現(xiàn)已證實(shí),在平滑肌的收縮過(guò)程中,肌球蛋白輕鏈 (myosin lightchain,MLC)的磷酸化水平是決定平滑肌收縮程度的一個(gè)重要因素,MLC的磷酸化水平受到依賴 Ca2+/鈣調(diào)蛋白 (calmodulin,CaM)的肌球蛋白輕鏈激酶 (myosin light chain kinase,MLCK)和 Ca2+非依賴的肌球蛋白輕鏈磷酸酶 (myosin light chain phosphase,MLCP)的雙重調(diào)節(jié)。MLCK磷酸化 MLC的 Ser19位點(diǎn),引起肌動(dòng)蛋白 -肌球蛋白系統(tǒng)的活化,導(dǎo)致平滑肌收縮;MLCP的抑制可以使 MLC的磷酸化和平滑肌的收縮進(jìn)一步增強(qiáng),即增加了收縮或調(diào)節(jié)裝置對(duì) Ca2+的敏感性,這種現(xiàn)象被稱之為 “鈣敏化”(Ca2+sensitization)。近年來(lái)有關(guān)鈣敏化機(jī)制的研究進(jìn)展迅速,一系列證據(jù)顯示這種鈣敏化機(jī)制主要是通過(guò)三聚體 G蛋白 (Gq和 G12/13)、RhoA及其底物 Rho激酶(Rho kinase,ROK)介導(dǎo)。法舒地爾通過(guò)阻斷Rho激酶對(duì) MLCP的抑制作用,抑制鈣敏化效應(yīng),介導(dǎo)血管平滑肌舒張,擴(kuò)張血管。

Hydroxy fasudil(法舒地爾的羥化活性代謝產(chǎn)物)可以劑量依賴性的抑制氯化鉀 (KCl)(20 mmol/L)、前列腺素 F2α(1μmol/L)及血栓素受體的激動(dòng)劑 U46619(0.1μmol/L)誘導(dǎo)的狗基底動(dòng)脈和大腦中動(dòng)脈片段的持續(xù)收縮。

Watanabe等將自體動(dòng)脈血或人工腦脊液注入兔的枕大池,并相應(yīng)的將動(dòng)物分為蛛網(wǎng)膜下隙出血組 (SAH組)和對(duì)照組,2 d后分離基底動(dòng)脈并記錄動(dòng)脈環(huán)的張力。發(fā)現(xiàn)用 5-羥色胺刺激動(dòng)脈可以誘導(dǎo)動(dòng)脈的收縮,在 SAH組尤為明顯,其肌張力為對(duì)照組的 4倍 (P＜0.O1)。法舒地爾 (3 mmol/L)可以顯著的抑制 5-羥色胺誘導(dǎo)的收縮。

Hydroxy fasudil可在 1 nmol/L內(nèi)皮素-1(ET-1)和 20 mmol/L KCl預(yù)處理的完整兔基底動(dòng)脈中引起濃度依賴性的伴有 MLC去磷酸化的動(dòng)脈舒張,而對(duì)細(xì)胞內(nèi)的 Ca2+濃度沒(méi)有明顯的影響;對(duì)于剝除內(nèi)膜的基底動(dòng)脈,Hydroxy fasudil可抑制由ET-1、硫代三磷酸核苷 (GTP gamma S)或Rho激酶催化亞基所誘導(dǎo)的血管收縮,但在 MLCP受制的條件下不能抑制 Ca2+誘導(dǎo)的血管收縮,且 ATP水平下降時(shí)其舒張效應(yīng)增強(qiáng)。

可見,法舒地爾通過(guò)解除 Rho激酶對(duì) MLCP的抑制作用,抑制鈣敏化效應(yīng),可以拮抗多種物質(zhì)誘導(dǎo)的血管收縮,有效擴(kuò)張血管。

3.1.2 抑制炎細(xì)胞的遷徙和浸潤(rùn),減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,減輕炎癥反應(yīng) 肌動(dòng)蛋白 -肌球蛋白系統(tǒng)不僅參與了平滑肌的收縮,在非肌肉細(xì)胞的遷徙和形態(tài)改變過(guò)程中也發(fā)揮了重要作用,如白細(xì)胞的化學(xué)趨化性和形態(tài)改變就受到這一系統(tǒng)的調(diào)控。由于肌動(dòng)蛋白 -肌球蛋白系統(tǒng)受到 Rho激酶介導(dǎo)的鈣敏化效應(yīng)的調(diào)節(jié),法舒地爾通過(guò)拮抗 Rho激酶就可有效的抑制炎細(xì)胞的遷徙和浸潤(rùn)。另外,法舒地爾通過(guò)拮抗 Rho激酶和其他蛋白激酶,可以減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,從而減輕炎癥反應(yīng),發(fā)揮組織保護(hù)作用。

在由血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的載脂蛋白 apoE基因缺陷小鼠的腹主動(dòng)脈瘤中,可見大量 Mac-3陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞,同時(shí)伴有瘤壁的增厚、中膜平滑肌的脫失、彈性蛋白的破壞及外膜的纖維化,局部組織的基質(zhì)金屬蛋白酶和 caspase-3的活性增高。在小鼠的飲水中加入法舒地爾 [136或 213 mg/(kg/d)]可以減少局部浸潤(rùn)的 Mac-3陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞,減輕上述各種病理組織學(xué)改變,降低組織中基質(zhì)金屬蛋白酶和 caspase-3的活性?？梢?法舒地爾通過(guò)拮抗巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的血管炎癥反應(yīng),可以抑制細(xì)胞凋亡和蛋白水解,減輕組織的破壞。

Satoh等的實(shí)驗(yàn)證實(shí),法舒地爾可抑制由 N-甲?；?甲二磺酰基-亮氨酰-苯基丙氨酸 (fMLP)誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞遷徙,將其應(yīng)用于大鼠腦微梗死模型中,可降低腦組織中的髓過(guò)氧化物酶 (myeloperoxidase,MPO)活性,縮小梗死灶面積,改善大鼠的神經(jīng)功能,說(shuō)明法舒地爾可通過(guò)抑制中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)而發(fā)揮對(duì)腦缺血組織的保護(hù)作用。

心肌梗死模型小鼠飲用加有法舒地爾的自來(lái)水 [100 mg/(kg?d)]可以抑制非梗死心肌中炎性細(xì)胞因子的表達(dá),如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β2和 β3(TGF-β2和 TGF-β3)及巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子,降低非梗死心肌中的 Rho激酶活性,抑制心肌梗死后的左心室重構(gòu)。

用法舒地爾處理人類中性粒細(xì)胞,可以濃度依賴性地抑制 NADPH氧化酶的活化及由佛波酯十四烷酸醋酸鹽 (PMA)和 fMLP誘導(dǎo)的 O2產(chǎn)生。另外,在培養(yǎng)基中加入法舒地爾可以減少 1,25-二羥維生素 D3處理的HL-60細(xì)胞產(chǎn)生的 O2,而這種細(xì)胞最終會(huì)分化為巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞。

Breslin等報(bào)道,法舒地爾可抑制 C5a活化的中性粒細(xì)胞所誘導(dǎo)的牛冠狀靜脈內(nèi)皮細(xì)胞肌動(dòng)蛋白重構(gòu)及內(nèi)皮屏障功能的紊亂,降低內(nèi)皮的通透性。

可見,法舒地爾通過(guò)抑制炎細(xì)胞的浸潤(rùn),減少炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,可以拮抗炎癥反應(yīng),減輕組織的損傷。

3.1.3 增加內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 (eNOS)的表達(dá),促進(jìn)一氧化氮 (NO)生成 eNOS的表達(dá)受到 Rho激酶的調(diào)控,但具體機(jī)制不詳。法舒地爾通過(guò)拮抗 Rho激酶可以增加 eNOS的表達(dá),提高eNOS的活性及 NO的產(chǎn)量,發(fā)揮其藥理作用。

Rikitake等的實(shí)驗(yàn)證實(shí),法舒地爾可以增加eNOS的 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá),提高 eNOS的活性及 NO的產(chǎn)量;將法舒地爾應(yīng)用于小鼠的腦梗死模型,可以增加腦組織的血流量,縮小梗死面積,改善神經(jīng)功能評(píng)分;但是在 eNOS基因缺陷型小鼠中,法舒地爾并沒(méi)有顯示出以上的神經(jīng)保護(hù)功能,說(shuō)明法舒地爾的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制是增加 eNOS的表達(dá),促進(jìn)內(nèi)皮來(lái)源的 NO生成。

在乏氧環(huán)境中 (3%O2)培養(yǎng)人的隱靜脈和肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,可以誘導(dǎo)其 Rho激酶的表達(dá)提高50%,活性提高 74%,使 eNOS的 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)降低,eNOS的活性降低,eNOS的半衰期縮短。用 Hydroxy fasudil處理細(xì)胞可以逆轉(zhuǎn)上述缺氧對(duì) eNOS的效應(yīng),但是對(duì) eNOS的基因轉(zhuǎn)錄沒(méi)有影響。

將法舒地爾應(yīng)用于野生型小鼠的缺血 -再灌注模型,可以抑制白細(xì)胞的募集和對(duì)腸系膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附,而將其應(yīng)用于 eNOS基因缺陷型小鼠不能發(fā)揮同樣的作用。另外,將法舒地爾應(yīng)用于大鼠心肌梗死模型,可以使心肌梗死面積縮小 38%,同時(shí)應(yīng)用 eNOS的拮抗劑 L-NAME可以逆轉(zhuǎn)法舒地爾的心肌保護(hù)作用。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,法舒地爾通過(guò)抑制 Rho激酶,可以增加 eNOS的表達(dá),促進(jìn) NO的生成,發(fā)揮對(duì)組織損傷的保護(hù)作用。

3.1.4 抑制細(xì)胞增殖,減輕器官重構(gòu) 近年來(lái)的研究提示,Rho/Rho激酶通路參與了對(duì)細(xì)胞增殖和器官重構(gòu)的調(diào)控。因此,法舒地爾通過(guò)抑制 Rho激酶可以有效抑制細(xì)胞增殖,減輕器官重構(gòu)。

Shirotani等通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察了法舒地爾對(duì)培養(yǎng)的牛動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的作用,證實(shí)法舒地爾可以抑制由胎牛血清、血小板源性生長(zhǎng)因子及胰島素誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖和 DNA合成。Wang等報(bào)道,將法舒地爾應(yīng)用于由血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的載脂蛋白apoE基因缺陷小鼠的心臟肥大模型,可以減輕心肌肥大,抑制冠狀血管周圍的纖維化,抑制心房利尿肽和膠原Ⅲ基因表達(dá),改善心功能,提示法舒地爾可以有效的減輕血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心血管重構(gòu)。

Matsnrnoto等報(bào)道,法舒地爾可以有效抑制支架植入術(shù)后豬冠狀動(dòng)脈新內(nèi)膜的形成和再狹窄的發(fā)生,減輕冠狀動(dòng)脈的重構(gòu),其機(jī)制包括增加新內(nèi)膜中 TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量,減少其中溴脫氧尿苷陽(yáng)性的增生細(xì)胞的數(shù)量,抑制膠原的沉積等。

對(duì)于農(nóng)吉利堿誘導(dǎo)的大鼠致命性肺動(dòng)脈高壓模型,法舒地爾長(zhǎng)時(shí)間口服給藥可以增加大鼠的存活率。通過(guò)抑制血管平滑肌細(xì)胞增生、促進(jìn)平滑肌細(xì)胞凋亡、拮抗內(nèi)皮功能紊亂等機(jī)制,法舒地爾可以降低肺動(dòng)脈壓力,減輕右心室肥大及肺血管病變。這一研究成果提示,法舒地爾可以有效減輕肺循環(huán)系統(tǒng)重構(gòu),為法舒地爾應(yīng)用于肺動(dòng)脈高壓的治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3.1.5 法舒地爾的其他藥理作用 Shah等報(bào)道法舒地爾通過(guò)降低血液中葡萄糖和同型半胱氨酸的濃度、拮抗氧化應(yīng)激,可以防治糖尿病和高同型半胱氨酸血癥大鼠的血管內(nèi)皮功能紊亂。

另有學(xué)者報(bào)道,將法舒地爾應(yīng)用于胰島素抵抗的 Zucker肥胖大鼠,可以降低血壓,糾正葡萄糖和脂質(zhì)代謝紊亂,抑制胰島素受體底物 (IRS-1)的絲氨酸磷酸化及胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路的紊亂,恢復(fù)乙酰膽堿和硝普納對(duì)血管的擴(kuò)張作用。

法舒地爾除了可以抑制壓力誘導(dǎo)的大鼠腦動(dòng)脈收縮和部分抑制動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度的升高外,還可以抑制酪氨酸的磷酸化,降低蛋白酪氨酸激酶 pp60src的活性。

用法舒地爾處理培養(yǎng)的未受刺激的大鼠皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞,可以使其由多邊形的扁平細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂胸S富突起的衛(wèi)星形細(xì)胞,說(shuō)明法舒地爾通過(guò)拮抗 Rho激酶可以影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)。

將法舒地爾應(yīng)用于大鼠腦局部缺血 -再灌注模型,可以劑量依賴性地逆轉(zhuǎn)缺血誘導(dǎo)的血液高粘滯性。

法舒地爾通過(guò)拮抗 Rho激酶可以完全抑制新斯的明和吡啶新斯的明誘導(dǎo)的大鼠氣管收縮,對(duì)于乙酰膽堿誘導(dǎo)的收縮有部分抑制作用。另外,法舒地爾可以抑制新斯的明誘導(dǎo)的[3H]單磷酸肌醇在氣管壁中的積聚。

用 Hydroxy fasudil處理培養(yǎng)的成骨細(xì)胞,可以增加骨形成蛋白-2(BMP-2)和骨鈣素的,mRNA表達(dá),逆轉(zhuǎn)地塞米松對(duì)這兩種蛋白 mRNA表達(dá)的抑制作用,提示法舒地爾通過(guò)抑制 Rho激酶可能對(duì)骨質(zhì)疏松有治療作用。

以上研究成果增進(jìn)了我們對(duì)法舒地爾的認(rèn)識(shí),拓展了其臨床應(yīng)用研究的方向。

3.2 藥物的安全性[15]

3.2.1 急性毒性 小鼠、大鼠口服給藥的 LD50分別為:小鼠雄性為 273.9 mg/kg;雌性為 277.3 mg/kg;大鼠雄性為 335mg/kg;雌性為 348 mg/kg。小鼠靜脈給藥的 LD50為 69.5mg/kg。

亞急性毒性:以大鼠、猴靜脈內(nèi)給藥 1個(gè)月,無(wú)毒性劑量為:大鼠 12.5 mg/kg,猴 3.125 mg/kg。

3.2.2 長(zhǎng)期毒性 大鼠、猴分別靜脈內(nèi)給藥 6個(gè)月,主要毒性表現(xiàn)為自主活動(dòng)減少、腹臥位。本品的毒性靶器官為腎臟,可見腎臟重量增加、腎小管變性、間質(zhì)水腫等。無(wú)毒劑量大鼠為 9 mg/kg,猴為 3.125 mg/kg(以 mg/m2計(jì)分別相當(dāng)于人臨床最大推薦劑量的 1和 0.69倍)。

3.2.3 遺傳毒性 細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)、嚙齒類動(dòng)物微核試驗(yàn)結(jié)果均為陰性,哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色畸變?cè)囼?yàn)未發(fā)現(xiàn)致突變作用。

3.2.4 生殖毒性 大鼠Ⅰ段生殖毒性實(shí)驗(yàn)顯示,靜脈給予本品 1.56、6.25和 25 mg/kg,25 mg/kg組親代動(dòng)物體重增加受抑制、黃體數(shù)及著床數(shù)減少。交配率、受孕率及胚胎發(fā)生未見異常。對(duì)親代動(dòng)物的無(wú)毒劑量為 6.25mg/kg;大鼠Ⅱ段生殖毒性試驗(yàn),靜脈給予本品 1.6、8和 40 mg/kg,40 mg/kg組母體動(dòng)物體重增加受抑制、胎仔體重偏低、新生仔體重增加受抑制,未發(fā)現(xiàn)對(duì)胎仔的致死作用及致畸作用,對(duì)子代無(wú)毒劑量為 8 mg/kg。家兔Ⅱ段生殖毒性試驗(yàn)顯示,靜脈給予本品 0.7、2和 6mg/kg(分別相當(dāng)于人臨床最大推薦劑量的0.16、0.44和 1.33倍),未見對(duì)胚胎發(fā)育有顯著影響。大鼠Ⅲ段生殖毒性試驗(yàn),靜脈給予本品1.6、8和 40 mg/kg組母體動(dòng)物一般狀態(tài)不良,新生仔體重增加受抑制。無(wú)毒劑量為 8mg/kg。

3.2.5 致癌性 無(wú)相關(guān)報(bào)道。

4 臨床試驗(yàn)與文獻(xiàn)總結(jié)

4.1 臨床有效性總結(jié)[14]隨著對(duì)于法舒地爾藥理作用認(rèn)識(shí)的不斷深入,其臨床應(yīng)用領(lǐng)域也不斷得到擴(kuò)展。除了防治 SAH后的慢性腦血管痙攣,有很多學(xué)者嘗試將其用于治療其他疾病。相信經(jīng)過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床試驗(yàn),法舒地爾的臨床應(yīng)用指征會(huì)得到不斷的修正和補(bǔ)充。

4.1.1 防治 SAH后慢性缺血性腦血管痙攣,減輕SAH患者人的缺血性腦損傷。最初的 Hydroxy fasudil治療動(dòng)脈瘤性 SAH患者的劑量 -梯度臨床試驗(yàn)收納了 113例動(dòng)脈瘤破裂后 3 d以內(nèi)接受手術(shù)的患者,按 Hydroxy fasudil的日給藥量將患者分為20 mg/d,40 mg/d,60 mg/d,90 mg/d,120-180 mg/d 5個(gè)劑量組。試驗(yàn)結(jié)果顯示,給予較大劑量Hydroxy fasudil的患者發(fā)生嚴(yán)重腦血管痙攣的機(jī)率較低,給藥劑量達(dá)到 40mg/d以上可取得較好的療效,單次給藥劑量達(dá)到 60mg僅產(chǎn)生輕微的降壓作用。

Hydroxy fasudil治療動(dòng)脈瘤性 SAH后遲發(fā)性腦血管痙攣的前瞻性隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照試驗(yàn)于1992年在日本進(jìn)行,該試驗(yàn)由 60個(gè)神經(jīng)外科中心合作完成,共收納 267例動(dòng)脈瘤破裂后 3 d以內(nèi)接受手術(shù)的患者?；颊哂谛g(shù)后用藥 14 d,每次 30 mg,3次/d,每次靜滴時(shí)間為 30 min。試驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)于接受 Hydroxy fasudil治療患者,其經(jīng)造影證實(shí)的腦血管痙攣發(fā)生率降低了 38%,頭顱 CT顯的與腦血管痙攣相關(guān)的腦內(nèi)低密度灶減少了58%,有癥狀的血管痙減少了 30%。另外,使用Hydroxy fasudil使預(yù)后不良的患者 (1個(gè)月后格拉斯哥預(yù)后評(píng)分為中度殘疾及以上)減少了 54%,且未引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)。

佟懷宇等以尼莫地平為對(duì)照,采用開放隨機(jī)對(duì)比試驗(yàn),觀察法舒地爾對(duì)動(dòng)脈瘤破裂后 7 d以內(nèi)接受手術(shù)的患者的療效。試驗(yàn)提示,對(duì)于疾病轉(zhuǎn)歸和恢復(fù),兩種藥物效果相近;法舒地爾擴(kuò)張痙攣腦動(dòng)脈的作用能夠以 DSA證實(shí),尼莫地平的作用未被 DSA證實(shí);對(duì)于 CT檢查發(fā)現(xiàn)的腦內(nèi)低密度灶,鹽酸法舒地爾與尼莫地平均有使其縮小的作用;鹽酸法舒地爾對(duì)系統(tǒng)血壓的影響,輕于尼莫地平。

近來(lái)有學(xué)者采用動(dòng)脈內(nèi)注入法舒地爾的方法治療有癥狀的 SAH后腦血管痙攣的患者,發(fā)現(xiàn)這種方法可以有效緩解腦血管痙攣,使 50%患者 3個(gè)月后格拉斯哥預(yù)后評(píng)分得到改善。

4.1.2 改善缺血性中風(fēng)患者的預(yù)后 Shibuya等報(bào)道了一個(gè)旨在評(píng)估法舒地爾治療急性缺血性中風(fēng)療效和安全性的多中心、雙盲、安慰劑對(duì)照臨床試驗(yàn)。該試驗(yàn)收納了 160例在缺血性中風(fēng)發(fā)作后48 h內(nèi)接受藥物治療的患者?；颊哂谄鸩『笥盟?4 d,每次 60 mg,2次/d,每次靜滴時(shí)間為 60 min,然后評(píng)估患者于治療后 2周的神經(jīng)功能狀況和起病 1個(gè)月后的臨床恢復(fù)情況。該試驗(yàn)提示,法舒地爾可以改善患者的神經(jīng)功能狀況和臨床恢復(fù)情況,且未引起嚴(yán)重的不良反應(yīng),說(shuō)明法舒地爾是一種可用于治療急性缺血性中風(fēng)的安全、有效的藥物。近來(lái),旭化成株式會(huì)社已正式向日本厚生省申請(qǐng)擴(kuò)大法舒地爾的適應(yīng)證,以用于急性期腦血栓 (發(fā)病后 48h內(nèi))的治療。

4.1.3 抑制冠狀動(dòng)脈痙攣,減輕缺血性心肌損傷,改善冠心病患者的心功能 Otsuka等在為穩(wěn)定型心絞痛患者行冠狀動(dòng)脈造影術(shù)時(shí)先后給予硝酸甘油 (200mg)和法舒地爾 (30mg)并測(cè)量冠狀動(dòng)脈向心性狹窄處的直徑,發(fā)現(xiàn)法舒地爾可以增加狹窄處的管徑,其效應(yīng)強(qiáng)于硝酸甘油。

將法舒地爾應(yīng)用于冠狀動(dòng)脈痙攣性心絞痛患者,可以明顯抑制乙酰膽堿誘導(dǎo)的冠狀動(dòng)脈收縮,防止胸痛癥狀和缺血性心電圖變化的出現(xiàn),而對(duì)于全身的血流動(dòng)力學(xué)和基線冠狀動(dòng)脈血流沒(méi)有明顯的影響。

一個(gè)在日本進(jìn)行的多中心Ⅱ期臨床試驗(yàn)評(píng)估了口服法舒地爾對(duì)于穩(wěn)定型勞累性心絞痛患者的療效。該試驗(yàn)提示長(zhǎng)期服用法舒地爾可以改善患者的運(yùn)動(dòng)耐力,表現(xiàn)為延長(zhǎng)患者在踏車試驗(yàn)中的最長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)時(shí)間,延緩心電圖上 S-T段下移的出現(xiàn)。且患者對(duì)于長(zhǎng)期服用該藥物耐受良好,沒(méi)有出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。

4.1.4 治療肺動(dòng)脈高壓 Fukumoto等觀察了法舒地爾單次給藥對(duì) 9例嚴(yán)重肺動(dòng)脈高壓患者的急性作用,發(fā)現(xiàn)法舒地爾可以輕度降低肺動(dòng)脈壓力、增加心指數(shù),明顯降低肺血管阻力,且未引起低血壓等副作用。

Ishikura等也觀察了使用法舒地爾對(duì)肺動(dòng)脈高壓患者的急性效應(yīng),同樣發(fā)現(xiàn)法舒地爾可以降低肺動(dòng)脈壓力,增加心指數(shù)。另外,法舒地爾還可以縮短總的肺部抵抗時(shí)間 (TPR),降低全身血管阻力,輕度降低收縮期動(dòng)脈血壓。

4.2 法舒地爾的其他臨床應(yīng)用研究 將法舒地爾應(yīng)用于原發(fā)性高血壓患者,可以增加患者前臂的血流量,降低前臂血管阻力。法舒地爾應(yīng)用于心力衰竭患者亦可觀察到類似的效應(yīng)。

鹽酸法舒地爾是日本于 1987年發(fā)現(xiàn)的鹽酸異喹啉系的酰胺類化合物,是一種新型的鈣離子拮抗劑,蛋白激酶抑制劑,抑制細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的活動(dòng),抑制肌球蛋白輕鏈磷酸化,擴(kuò)張腦血管,從而防治腦血管痙攣,改善腦缺血癥狀,有效治療痙攣引起的缺血性腦血管病。并且能抑制因細(xì)胞內(nèi)鈣的增加而導(dǎo)致的各種酶系異常的活動(dòng),起到保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞,改善預(yù)后,降低病死率的作用。鹽酸法舒地爾注射液對(duì)治療 SAH后 CVS起效快,療效確切,能預(yù)防和緩解腦血管痙攣,降低CVS病死率和致殘率。近年來(lái)應(yīng)用鹽酸法舒地爾注射液治療 SAH術(shù)后腦血管痙攣,取得了良好的療效,提高了治愈好轉(zhuǎn)率,減少了死亡率。

對(duì)于動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者的最終功能預(yù)后以 GOS評(píng)價(jià),法舒地爾與尼莫地平有相同的改善作用;靜脈輸入法舒地爾基本不影響系統(tǒng)血壓,而尼莫地平可導(dǎo)致系統(tǒng)血壓輕度下降,說(shuō)明法舒地爾較尼莫地平對(duì)腦血管有更好的選擇性;對(duì)于動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血后遲發(fā)性腦血管痙攣的治療,法舒地爾是一種安全有效的治療藥物。

[1]MA Jingjian,YANG Shuyuan,HONG Guoliang,et al,Effect of fasudil hydrochloride on cerebral vasospasm following aneurysmal subarachnoid hemorrhage in Phase c linical Trial[J],Journal of Chinese Clinical Medicine,2009,42:61-72.

[2]Yoshio Suzuki,Masato Shibuya,Shin-ichi Satoh,et al.Safety and efficacy of fasudilmonotherapyand fasudil-Ozagrel combination therapy in patientswith subarachnoid hemorrhage:Sub-analysis of the post-marketing surveillance study[J].Neurologia Medicochirurgica,2008,48(6):241-248.

[3]Yukito Shinohara,Makoto Kobayashi,Toshiya Umeda.Medicoeconomic evaluation for the treatment of acute ischem ic stroke using a placebo-controlled clinical trial of fasudil[J].Nosotchu,2007,29(1):22-28.

[4]Toshiaki Otsuka,Chikao Ibuki,Takeshi Suzuki.Vasodilatory effect of subsequent ad ministration of fasudil,a Rho-kinase inhibitor,surpasses that of nitroglycerin at the concentric coronary stenosis in patientswith stable angina pectoris[J].Circulation Journal,2006,70(4):402-408.

[5]Koelsch CF,A lbertson NF.Synthesis of N-methylmorphinane[J].JAm Chem Soc,1953,75(5):2095-2098.

[6]EP.Appl,187,371(1986,Asahi).

[7]USP,4,678,783(1987,Asahi).

[8]Shin-ichi Satoh,Ichiro Ikegaki,Toshio Asano,et,al.Antiischem ic properties of fasudil in experimental models of vasospastic angina[J].Journal of Pharmacological Sciences,2001,87(1):34-40.

[9]Cedric Loge.Synthesis and pharmacological study of Rho-kinase inhibitors:pharmacomodulations on the lead compound fasudil[J].J of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry,2003,18(2)127-138.

[10]USP,4,456,757(1984).

[11]USP,5,942,505(1999).

[12]中國(guó)專利,申請(qǐng)?zhí)?200610044980.0.法舒地爾的藥用鹽的水合物.

[13]中國(guó)專利,CN 1080721C,2002年,1-(5-異喹啉磺?；?高哌嗪鹽酸鹽水合物。

[14]張明,孫曉川.法舒地爾的藥理作用及其臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展 [J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,38(4):369-373.

[15]天津紅日藥業(yè)股份有限公司的鹽酸法舒地爾注射液的說(shuō)明書.