熊靜悅 牟道華 唐大軒 譚正懷

(四川省中醫(yī)藥科學(xué)院?國家中醫(yī)藥管理局中藥質(zhì)量生物評價重點研究室,四川 成都 610041)

白附子始載于漢代《名醫(yī)別錄》,植物來源有毛茛科植物黃花烏頭Aconitum coreanum(Levl)Rap.的塊根及天南星科植物獨角蓮Typhonium giganteum Engl.的干燥塊莖,后者為《中國藥典》2005年版收載,即本研究采用品種。白附子為中醫(yī)臨床常用藥,具有祛風(fēng)濕、定驚搐、解毒散結(jié)止痛等功效,主要用于中風(fēng)痰壅,口眼?斜,破傷風(fēng)等癥的治療,由于歷代本草記載白附子為毒性中藥,故本品一般經(jīng)炮制后使用(如礬制、姜制、黑豆制、甘草制、皂角制等),生品多為外用。為了明確白附子的毒性作用及其物質(zhì)基礎(chǔ),使其毒性能夠定性、定量、定位地表達,本研究通過小鼠急性毒性試驗,初步探討了生、制白附子70%乙醇提取物及制白附子水提物的毒性范圍,以期為其臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品 制白附子水提取物,乳白色膏體,1ml浸膏相當(dāng)于1.43g原生藥;制白附子70%乙醇提取物,深棕色膏體,1ml浸膏相當(dāng)于13.33g原生藥;生白附子70%乙醇浸膏,棕色膏體,1ml浸膏相當(dāng)于9.09g原生藥。制白附子(姜礬法,按 2005版藥典方法進行炮制)和生白附子飲片購自四川新荷花飲片公司,提取物由中國科學(xué)院成都生物研究所提供,給藥時以蒸餾水配制,給藥劑量以原生藥g?kg-1表示。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠,SPF級,♀♂各半,由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實驗動物中心提供,合格證號SCXK(川)2008-19。小鼠飼養(yǎng)于SPF屏障系統(tǒng)中,光照條件為12h/12h明暗交替,溫度20℃-26℃,相對濕度40%-70%,以鼠全價顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.3 方法

1.3.1 制白附子水提取物最大給藥量試驗 40只小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機分為對照組和制白附子組,20只?組-1,以最大濃度(1.43g原生藥?ml-1)、最大給藥體積(0.4ml?10g-1)灌胃小鼠2次,間隔6h;給藥當(dāng)天密切觀察小鼠體征(1次?h-1,共 4次),此后每天觀察1次,連續(xù) 14d;于給藥前、第7d及第14d稱體重,第 14d處死小鼠取心、肝、脾、肺、腎計算臟器指數(shù)。

1.3.2 制白附子70%乙醇提取物L(fēng)D50試驗 50只小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機分為5組,分組及給藥見表2,給藥體積0.3ml?10g-1,灌胃給予小鼠1次;給藥當(dāng)天密切觀察小鼠體征(1次?h-1,共4次),此后每天觀察1次,連續(xù)觀察14d并記錄小鼠出現(xiàn)的中毒及死亡情況。

1.3.3 生白附子70%乙醇提取物最大給藥量試驗 40只小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機分為對照組和生白附子組,20只?組-1;以最大濃度(9.09g原生藥?ml-1)、最大給藥體積灌胃小鼠1次。給藥當(dāng)天及此后14天同1.3.1方法觀察。

2 結(jié)果

2.1 制白附子水提取物最大給藥量試驗

未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡或行為學(xué)、排泄物、分泌物等出現(xiàn)異常。小鼠灌胃給予制白附子水提取物或蒸餾水后,給藥組體重與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異,見表1。肉眼檢查各組小鼠主要臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯異常;臟器系數(shù)見表1。制白附子水提取物的最大給藥量為114.4g?kg-1。

表1 制白附子水提取物對小鼠體重的影響(,n=20)

表1 制白附子水提取物對小鼠體重的影響(,n=20)

組別 劑量(g?kg-1)體重(g)臟器系數(shù)(g?10g-1)給藥前 7d 14d 心 肝 脾 腎 肺對照組 -- 18.33±1.44 30.73±3.21 34.04±3.19 0.05±0.01 0.61±0.06 0.04±0.01 0.14±0.03 0.06±0.01制白附子水提物組 114.4 17.89±1.41 30.41±2.91 34.84±4.48 0.05±0.01 0.57±0.07 0.04±0.01 0.13±0.02 0.06±0.01

2.2 制白附子70%乙醇提取物L(fēng)D50試驗 由Bliss法計算得LD50為250.04g?kg-1,LD5為183.04g?kg-1,LD95為341.56g?kg-1。制白附子70%乙醇提取物對小鼠毒性癥狀多見呼吸急促,俯臥、自發(fā)活動減少,解剖死亡小鼠見呼吸先于心臟搏動停止。

表2 制白附子70%乙醇提取物對小鼠LD50

2.3 生白附子70%乙醇提取物最大給藥量試驗

藥物組小鼠給藥后自發(fā)活動較對照組減少,給藥后24h內(nèi)雄性小鼠死亡2只,雌性小鼠死亡3只,呼吸先于心臟搏動停止。小鼠灌胃給予生白附子70%乙醇提取物或蒸餾水后,給藥組體重與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異,見表3。肉眼檢查各組小鼠主要臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯異常,給藥組心、肝、脾、肺、腎臟器系數(shù)與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。兩組初始小鼠數(shù)均為20只,給藥后生白附子70%醇提物組小鼠死亡5只,測得生白附子70%乙醇提物的 LD50大于364.0g?kg-1。

表3 生白附子70%醇提物對小鼠體重的影響(,n=20)

表3 生白附子70%醇提物對小鼠體重的影響(,n=20)

組別 劑量(g?kg-1)體重(g)臟器系數(shù)(g?10g-1)給藥前 7d 14d 心 肝 脾 腎 肺對照組 -- 20.45±1.27 35.06±4.16 42.39±5.43 0.05±0.01 0.58±0.09 0.03±0.01 0.13±0.02 0.06±0.01生白附子70%醇提物組 364.0 20.78±0.95 34.47±3.80 39.96±5.67 0.05±0.01 0.53±0.07 0.03±0.01 0.12±0.02 0.06±0.01

3 討論

白附子為中醫(yī)臨床常用的有毒中藥之一,歷代本草除《日華子本草》外,均記載其為毒性藥材[1],1988年國務(wù)院發(fā)布的《醫(yī)療用毒性藥品管理辦法》也將白附子列入毒性藥品管理范圍,故除外用和少數(shù)配方外,其均以炮制品入藥。一般認為,白附子經(jīng)白礬(KAl(SO4)2?12H2O)及生姜炮制后,其毒性成分被Al(OH)3凝膠吸附或中和從而解毒[2],但此法在炮制過程中又引入了數(shù)百倍以上的Al3+[3],極易對神經(jīng)系統(tǒng)造成影響。有報道一名女性患者服用制白附子(約20g)煎液,20min后出現(xiàn)口舌及四肢麻木、頭暈、心慌、言語不清,惡心、嘔吐數(shù)次后意識喪失,呼之不應(yīng)[4];40%制白附子水混懸液可造成家兔結(jié)膜水腫(0.12g?只-1),制白附子冷水浸液20.0g?kg-1腹腔注射,小鼠72h內(nèi)死亡率為40%,大鼠連續(xù)21d灌胃制白附子混懸液6.0g?kg-1,其體重增加減慢[5];制白附子水提液靜注小鼠的LD50為 29.6±2.7g?kg-1,生白附子的 LD50為 32.6±2.7g?kg-1,制白附子溫水浸液180.0g?kg-1分3次灌胃小鼠,見豎毛俯臥,制白附子煎劑120.0g?kg-1分4次灌胃小鼠,出現(xiàn)呼吸困難、活動減少,并有動物死亡[6],由此可見,制白附子尚存在潛在的毒性作用。

本研究測得制白附子水提物的最大給藥量和70%乙醇提取物的 LD50分別為 114.4g?kg-1和 250.04g?kg-1,生白附子70%乙醇提取物的 LD50＞364.0g?kg-1,以期為中醫(yī)臨床應(yīng)用提供劑量設(shè)計的參考。

1 楊振翔,張振凌.禹白附炮制及臨床應(yīng)用研究進展[J].醫(yī)藥世界,2006,7：175-177.

2 周玉朱.有毒中藥重用摭拾[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2000,7(1)：64-65.

3 王毅,張靜修.制白附子飲片中鋁含量的研究[J].中成藥,1992,14(5)：19-21.

4 周曉霞,汪弘.白附子中毒1例報告[J].浙江實用醫(yī)學(xué),2003,8(1)：49-49.

5 吳連英,仝燕,程麗萍,等.白附子不同炮制品毒性比較研究[J].中國醫(yī)藥學(xué)報,1992,7(1)：13-15.

6 常東明,李慶華,朱明,等.白附子炮制前后藥理作用的初步觀察[J].中藥通報,1981,4：23-25.