張 廠 金周漢 宋崇順

(1北京中醫(yī)藥大學東方醫(yī)院消化科,北京豐臺區(qū)方莊芳星園一區(qū)六號,100078;2北京中醫(yī)藥大學;3北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院中藥藥理學實驗室)

核桃楸(Juglans Mandshurica Maxim)為胡桃科胡桃屬植物,核桃楸果是核桃楸的果實,文獻記載其具有行氣止痛的功效,可治療脘腹疼痛,而東北民間長期流傳有應用其抗腫瘤的經(jīng)驗。本實驗研究對核桃楸果水提物的抗腫瘤作用進行了初步探討。

1 實驗材料

藥物:1)核桃楸果水提物:按照每 30g市售核桃楸果水煎為 200mL的比例進行煎煮(人用量為200mL/日),并繼續(xù)在水浴上濃縮,lmL濃縮液相當于原液 6.3mL。2)注射用絲裂霉素:協(xié)和工業(yè)株式會社制造銷售,批號為 879AIL,10mg/支。3)5-氟尿嘧啶注射液(5-FU):上海旭東海普藥業(yè)有限公司出品,批號為 000404,0.25g/10mL。4)足葉乙甙:北京制藥工業(yè)研究所試驗藥廠,批號為 990810,100mg/5mg。動物:清潔級 ICR小鼠,北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司供給,許可證號為京動許字(2000)第 004號總049號。實驗環(huán)境:小鼠實驗在清潔級動物實驗室內(nèi)進行,合格證號為 SYXK11-00-0029。瘤株:瘤株為肉瘤 180(S180),肝癌 22(H22),Liwise肺癌(LWS),由醫(yī)學科學院藥物研究所腫瘤室供給。

2 實驗方法

將小鼠隨機分為 6組,1)造型組:0.5%CMC液,10mL/kg。2)核桃楸果水提物大劑量組(簡稱為大劑量組),給藥劑量為 63mL原液/kg,相當于 10mL濃縮液/kg。3)核桃楸果水提物中劑量組(簡稱為中劑量組),給藥劑量為 31.5mL原液/kg,相當于 5mL濃縮液/kg。4)核桃楸果水提物小劑量組(簡稱為小劑量組),給藥劑量為 15.75mL原液/kg,相當于 2.5mL濃縮液/kg。5)陽性藥絲裂霉素對照組(簡稱為絲裂霉素組),0.6mg/kg。陽性藥 5-FU對照組(簡稱為 5-FU組),1.39mg/kg。陽性藥足葉乙甙對照組(簡稱為足葉乙甙組),3.33mg/kg。6)正常對照:0.5%CMC液,10mL/kg。以上各組均口服給藥,0.1mL/10g體重。

以上各組均在無菌條件下進行操作,除對照組外,其他各實驗組均用 S180瘤株造型,首先將 S180、H22、LWS瘤組織用織研磨器均漿,生理鹽水和瘤株的 W:V比值為 4:1,在無菌條件下接種于小鼠左前肢腋下,0.2mL/只)后 24h開始給藥,0.1mL/10g體重。對照組,在無菌條件下將生理鹽水接種于左前肢腋下,0.2mL/只,造型 24h后隨機分組給藥,以上各組均連續(xù)給藥 14天,分別于給藥給水前、給藥給水后 7天、14天稱體重,第 14天體重 =體重 -瘤重。取血后,拉斷脊髓處死小鼠,取出腫瘤、胸腺、脾臟,稱重。百克體重增長百分率 =(給藥后體重 -給藥前體重)/給藥前體重 ×100,腫瘤抑瘤率 =(造型組瘤重 -不同劑量組瘤重)/造型組瘤重 ×100。

3 結(jié)果

體重變化結(jié)果見表 1、2、3。胸腺、脾臟、腫瘤重量變化結(jié)果見表 4、5、6。

表1 核桃楸果水提物對S180肉瘤造型小鼠體重影響比較表

從表 1可看出,模型組小鼠體重明顯低于對照組,表明模型組小鼠體重的減輕是由于腫瘤生長造成的。同造型組小鼠相比,在造型后第 14天,小鼠體重減去腫瘤重量后,給藥大、中、小劑量組,絲裂酶素組小鼠體重明顯增加,體重增長百分率也明顯增加,表明核桃楸果水提物對小鼠體重起到明顯保護作用。

從表 2可看出,模型組小鼠體重明顯低于對照組,表明模型組小鼠體重的減輕是由于腫瘤生長造成的。同造型組小鼠相比,在造型后第 14天,小鼠體重減去腫瘤重量后,給藥大、中、小劑量組,小鼠體重明顯增加,體重增長百分率也明顯增加;5-FU組明顯減輕,體重增長百分率也明顯減輕,表明核桃楸果水提物對小鼠體重起到明顯保護作用,5-FU對小鼠體重不但沒表現(xiàn)保護作用,還表現(xiàn)出一定的毒性作用。

表2 核桃楸果水提物對 H22造型小鼠體重影響比較表

表3 核桃楸果水提物對 LWS造型小鼠體重影響比較表

從表 3可看出,模型組小鼠同對照組相比,體重、體重增長百分率均未見明顯差別。同造型組小鼠相比,在造型后第 14天,小鼠體重減去腫瘤重量后,給藥大、中、小劑量組小鼠體重、體重增長百分率均有不同程度的增加,但均未見明顯差別。足葉乙甙組小鼠體重、體重增長百分率明顯低于造型組,足葉乙甙組對小鼠體重不但沒表現(xiàn)保護作用,還表現(xiàn)出一定的毒性作用。

表4 核桃楸果水提物對S180造型小鼠腫瘤、胸腺、脾臟重量影響比較表

從表 4可看出,S180造型小鼠脾臟均比對照組明顯增加,胸腺明顯減輕,這可能與腫瘤瘤株進入機體后,機體自然產(chǎn)生抗病能力有關(guān),也正說明機體處于抵抗階段。胸腺重量的減輕又表明機體的抵抗能力開始下降,免疫功能減弱。同造型組相比,給藥大、中、小劑量組,絲裂酶素組小鼠腫瘤重量均明顯減輕。絲裂酶素組小鼠胸腺、脾臟重量指數(shù)明顯減少,表明化療藥物在抑制腫瘤細胞的同時,對機體也產(chǎn)生明顯的副作用,使機體抗病能力明顯下降。給藥大、中、小劑量組小鼠胸腺、脾臟重量指數(shù)均比造型組均有不同的增加,大、中劑量組增加明顯,表明核桃楸果水提物能增強機體抗病能力和免疫功能,對小鼠機體起到明顯保護作用。

表 5可看出,S180造型小鼠脾臟均比對照組明顯增加,胸腺明顯減輕,這可能與腫瘤瘤株進入機體后,機體自然產(chǎn)生抗病能力有關(guān),也正說明機體處于抵抗階段。胸腺重量的減輕又表明機體的抵抗能力開始下降,免疫功能減弱。同造型組相比,給藥大、中、小劑量組,絲裂酶素組小鼠腫瘤重量均明顯減輕。絲裂酶素組小鼠胸腺、脾臟重量指數(shù)明顯減少,表明化療藥物在抑制腫瘤細胞的同時,對機體也產(chǎn)生明顯的副作用,使機體抗病能力明顯下降。給藥大、中、小劑量組小鼠胸腺、脾臟重量指數(shù)均比造型組均有不同的增加,大、中劑量組增加明顯,表明核桃楸果水提物能增強機體抗病能力和免疫功能,對小鼠機體起到明顯保護作用。

表6 核桃楸果水提物對LWS造型小鼠腫瘤、胸腺、脾臟重量影響比較表

表 6可看出,LWS造型小鼠脾臟均比對照組明顯增加,胸腺明顯減輕,這可能與腫瘤瘤株進入機體后,機體自然產(chǎn)生抗病能力有關(guān),也正說明機體處于抵抗階段。胸腺重量的減輕又表明機體的抵抗能力開始下降,免疫功能減弱。同造型組相比,給藥大、中、小劑量組,絲裂酶素組小鼠腫瘤重量均明顯減輕。絲裂酶素組小鼠胸腺、脾臟重量指數(shù)明顯減少,表明化療藥物在抑制腫瘤細胞的同時,對機體也產(chǎn)生明顯的副作用,使機體抗病能力明顯下降。給藥大、中、小劑量組小鼠胸腺、脾臟重量指數(shù)均比造型組均有不同的增加,大、中劑量組增加明顯,表明核桃楸果水提物能增強機體抗病能力和免疫功能,對小鼠機體起到明顯保護作用。

4 討論

核桃楸果水提物對 S180、H22、LWS造型小鼠腫瘤均有一定的抑制作用,大劑量組的抑瘤率分別為的抑瘤率分別為 19.02%、41.21%、41.40%;中劑量組的抑瘤率分別為 16.09%、37.70%、37.19%;小劑量組的抑瘤率分別為 11.70%、30.35%、33.00%。表明核桃楸果水提物對 S180瘤株的抑制作用較弱,對 H22、LWS瘤株的抑制作用較強。S180、H22、LWS模型組小鼠同對照組相比,體重、體重增長百分率均未見明顯差別。同造型組小鼠相比,在造型后第 14天,小鼠體重減去腫瘤重量后,核桃楸果水提物大、中、小劑量組小鼠體重、體重增長百分率均有不同程度的增加,但均未見明顯差別。足葉乙甙組、5-FU小鼠體重、體重增長百分率不但未見增加,還明顯低于 H22、LWS模型組,足葉乙甙組、5-FU對小鼠體重不但沒表現(xiàn)保護作用,還表現(xiàn)出一定的毒性作用。

胸腺和脾臟是機體主要的免疫器官,與機體抗病能力密切相關(guān)。實驗結(jié)果表明,H22、S180、LWS造型小鼠脾臟均比對照組明顯增加,胸腺均比對照組明顯減輕,這與腫瘤瘤株進入機體后,機體自然產(chǎn)生抗病能力有關(guān),也正說明機體處于抵抗階段。胸腺重量的減輕又表明機體的抵抗能力開始下降,免疫功能減弱。同造型組相比,核桃楸果水提物不但對造型小鼠胸腺起到明顯保護作用、還可使脾臟重量明顯增加,表明核桃楸果水提物能明顯增強機體抗病能力和免疫功能,可能是核桃楸果水提物抗瘤作用的機理之一。