吳家強(qiáng) ，張學(xué)武 ，李 俊 ，徐紹建 ，李 坤 ，于 江 ，劉 洋 ，周 順 ，王金寶

（1.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山東 濟(jì)南 250100；2.山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250100；3.諸城市畜牧獸醫(yī)管理局，山東 諸城 271000；4.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東 青島 266109）

豬瘟（HC），又稱古典豬瘟（CSF），俗稱“爛腸瘟”，是豬的一種高度接觸傳染性病毒病，在世界上許多養(yǎng)豬的國(guó)家都有流行[1]。由于其傳播快、病死率高，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此，受到世界各國(guó)的高度重視。疫苗免疫接種是防治豬瘟積極有效的措施之一。我國(guó)研制的豬瘟兔化弱毒細(xì)胞苗具有性能穩(wěn)定、安全性好、免疫原性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，是消滅和控制豬瘟的有力武器[2-4]。另外，近年來(lái)我國(guó)又研制成功豬瘟脾淋苗（兔源），其優(yōu)點(diǎn)是抗原含量足、產(chǎn)生保護(hù)力快，而且在生產(chǎn)過(guò)程中能夠避免牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）污染。仔豬通過(guò)胎盤或乳汁（尤其是初乳）從母體獲得的抗體稱為母源抗體。豬瘟母源抗體的存在，一方面能夠保護(hù)新生仔豬避免早期感染，但另一方面卻又在很大程度上干擾仔豬的豬瘟疫苗免疫效果，造成免疫失敗[5-8]。本研究旨在對(duì)應(yīng)用不同豬瘟免疫程序的豬場(chǎng)進(jìn)行仔豬母源抗體水平檢測(cè)，為豬場(chǎng)豬瘟免疫程序的制定尤其是仔豬首免日齡的確定提供參考建議。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)豬場(chǎng)與試驗(yàn)動(dòng)物

選擇山東4個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng):A場(chǎng)存欄227頭母豬，B場(chǎng)存欄153頭母豬，兩場(chǎng)均使用豬瘟脾淋苗；C場(chǎng)存欄540頭母豬，D場(chǎng)存欄312頭母豬，兩場(chǎng)均使用豬瘟細(xì)胞苗。選取每個(gè)豬場(chǎng)各5頭母豬及其所產(chǎn)的201頭仔豬為試驗(yàn)動(dòng)物，仔豬品種均為杜長(zhǎng)大三元雜交豬。試驗(yàn)日齡為仔豬出生后第5天至第50天，試驗(yàn)期間仔豬不注射豬瘟疫苗，按照免疫程序正常防疫豬氣喘病、副豬嗜血桿菌、偽狂犬病、豬藍(lán)耳病、口蹄疫等商品化疫苗。

1.1.2 豬瘟疫苗類型與使用方法

豬瘟脾淋苗由上海某生物制品廠家提供，產(chǎn)品批號(hào)為20090818，20頭份/瓶；豬瘟細(xì)胞苗由山東某生物制品廠家提供，產(chǎn)品批號(hào)為0907026，50頭份/瓶。疫苗于-20℃冷凍保存，母豬免疫使用方法見(jiàn)表1。

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1.1.3 檢測(cè)試劑與儀器

豬瘟病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司；酶標(biāo)分析儀購(gòu)自深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司，機(jī)器型號(hào)為RT-6100。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)仔豬臨床觀察

每天觀察試驗(yàn)仔豬的精神狀態(tài)、食欲、糞便等有無(wú)異常狀況，從第20日齡起，飲水中定期添加電解多維、葡萄糖和小蘇打，以減輕保定、采血、打針等造成的仔豬應(yīng)激反應(yīng)。

1.2.2 采血與抗體檢測(cè)

在仔豬5日齡、10日齡、20日齡、30日齡、40日齡、50日齡時(shí)分別前腔頸靜脈采血3mL，4000 r/min離心3min，分離血清，于-20℃冷凍保存。全程采血結(jié)束后，通過(guò)豬瘟抗體ELISA抗體檢測(cè)試劑盒集中進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1.2.3 樣品陽(yáng)性或陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)

在酶標(biāo)儀上檢測(cè)各孔OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性血清對(duì)照孔OD630值大于或等于1.0，陰性血清對(duì)照孔OD630值必須小于0.3。樣品OD630值大于0.35（相當(dāng)于間接血凝試驗(yàn)效價(jià)1:16），判為豬瘟抗體陽(yáng)性；樣品OD630值小于0.35，判為豬瘟抗體陰性。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 仔豬生長(zhǎng)發(fā)育的臨床觀察

A、B、C、D四個(gè)豬場(chǎng)的試驗(yàn)仔豬在哺乳期間共有12頭因?yàn)槿踝小D壓或腹瀉致死，保育期間因?yàn)楦篂a、瘦弱等原因淘汰6頭，其它試驗(yàn)仔豬精神狀態(tài)良好，體溫、食欲正常，試驗(yàn)期間未見(jiàn)不良反應(yīng)。

2.2 母源抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)應(yīng)用不同豬瘟免疫程序的四個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在20日齡以內(nèi)仔豬母源抗體的平均OD630值（0.503～1.587） 和陽(yáng)性率 （62.2%～95.7%）均維持較高的水平，仔豬能夠獲得較好的母源抗體保護(hù)，避免豬瘟病毒的早期感染。隨著日齡增長(zhǎng)，仔豬母源抗體逐漸下降，尤其在斷奶后一周（30～40日齡）下降趨勢(shì)最為顯著。但D場(chǎng)的仔豬母源抗體在40日齡以后又出現(xiàn)反彈，抗體陽(yáng)性率從13.3%升高至37.8%（見(jiàn)表2）。

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3 結(jié)論與討論

豬瘟病毒屬黃病毒科、瘟疫病毒屬，基因組為單股線狀的RNA，與牛黏膜病病毒、羊邊界病病毒有共同的抗原。豬瘟病毒可以劃分為三個(gè)基因型（Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型），我國(guó)豬瘟病毒的流行毒株屬于基因Ⅱ型，占80%以上，而使用比較廣泛的豬瘟兔化弱毒疫苗毒株屬于基因Ⅰ型，各個(gè)基因型之間存在交叉免疫保護(hù)作用[1]。在我國(guó)，隨著豬瘟疫苗的推廣應(yīng)用，特別是國(guó)家實(shí)施強(qiáng)制性免疫以來(lái)，豬瘟的防控取得了很大成效和進(jìn)步。但也不可否認(rèn)，由于不同生物制品廠家生產(chǎn)的豬瘟疫苗質(zhì)量（生產(chǎn)工藝、抗原含量、外源病原污染、質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)等）參差不齊，冷鏈運(yùn)輸和保存環(huán)節(jié)不健全，疫苗免疫程序不合理，豬瘟疫苗免疫失敗的現(xiàn)象仍然時(shí)有發(fā)生，給本病的綜合防治造成很大障礙[9-10]。建議國(guó)家相關(guān)部門加大生物制品的檢查力度，改進(jìn)免疫監(jiān)測(cè)方法[11]，提高售后服務(wù)質(zhì)量（包括冷鏈運(yùn)輸和配送），杜絕不合格疫苗產(chǎn)品的市場(chǎng)準(zhǔn)入和流通，保障豬瘟等生物制品的免疫效果。

另外，在本研究中也發(fā)現(xiàn)，斷奶行為對(duì)仔豬的應(yīng)激反應(yīng)除了體現(xiàn)在飲食改變、合群打架、環(huán)境適應(yīng)性等方面，還表現(xiàn)在斷奶前后母源抗體的變化非常顯著，這也能夠從一個(gè)側(cè)面解釋為什么仔豬斷奶后疾病多發(fā)的原因。試驗(yàn)中的四個(gè)豬場(chǎng)，仔豬均于25～28日齡斷奶，由于離開母豬失去了母源抗體來(lái)源，仔豬在30～40日齡母源抗體的下降幅度非常大，已基本接近或低于臨界值。如果此時(shí)不及時(shí)進(jìn)行免疫接種，將出現(xiàn)免疫空白期，對(duì)豬瘟野毒無(wú)抵御能力。D場(chǎng)仔豬40～50日齡的豬瘟抗體水平不繼續(xù)降低反而升高，恰恰說(shuō)明此時(shí)仔豬遭受了豬舍環(huán)境中的豬瘟野毒侵襲，應(yīng)當(dāng)引起養(yǎng)豬生產(chǎn)管理者的重視。

疫苗的免疫接種，對(duì)防制豬瘟至關(guān)重要，在養(yǎng)豬生產(chǎn)中母豬群有兩種常見(jiàn)的豬瘟免疫程序。（1）普遍防疫（普防）:每年普防3次，每4個(gè)月免疫一次，每頭母豬每次接種2頭份豬瘟脾淋苗或3頭份細(xì)胞苗。此法主要在一些大型種豬場(chǎng)應(yīng)用，優(yōu)點(diǎn)是便于在短時(shí)間內(nèi)集中豬場(chǎng)的人力、物力進(jìn)行防疫，提高豬瘟的防疫密度，但個(gè)別母豬懷孕期間注射豬瘟弱毒疫苗出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，有流產(chǎn)現(xiàn)象發(fā)生。（2）跟胎次免疫:在一些種豬場(chǎng)和許多中小規(guī)模豬場(chǎng)，通常于母豬產(chǎn)后21天左右接種豬瘟疫苗，由于產(chǎn)后消耗和仔豬吸吮等原因，此時(shí)母豬自身的抗體水平呈下降趨勢(shì)，接種疫苗后可獲得較好的免疫效果，而且按此法接種母豬不易漏防。本研究結(jié)果顯示，母豬采用不同免疫程序的豬場(chǎng)，其所產(chǎn)仔豬的豬瘟母源抗體持續(xù)時(shí)間不完全等同。母豬免疫狀況一般的豬群（譬如D場(chǎng)），仔豬20日齡時(shí)，其豬瘟母源抗體的平均OD630值和陽(yáng)性率已接近臨界值，此時(shí)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗免疫，以免出現(xiàn)豬瘟抗體空白期。母豬免疫較好的豬群（譬如B場(chǎng)），仔豬30日齡時(shí)，其豬瘟母源抗體的平均OD630值仍維持在0.68，抗體陽(yáng)性率達(dá)80%以上，對(duì)豬瘟野毒具有較強(qiáng)的防御能力。如果此時(shí)注射豬瘟疫苗，將受到母源抗體的干擾而導(dǎo)致免疫失敗。因此，建議規(guī)?；i場(chǎng)定期開展母源抗體監(jiān)測(cè)工作，以抗體陽(yáng)性率接近70%、平均OD630值0.35～0.45（相當(dāng)于間接血凝試驗(yàn)效價(jià)1:16～1:32），作為仔豬的豬瘟首免日齡（見(jiàn)表2），制定科學(xué)合理的個(gè)性化豬瘟免疫程序，以確保豬瘟疫苗免疫質(zhì)量。

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