張家松 ，李卓佳 ，文國樑 ，陳義平 ，羅 亮 ，3，冷加華 ，曹煜成 ，楊鶯鶯

（1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，廣東 廣州 510300；2.中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東 青島 266032；3.大連水產(chǎn)學(xué)院，遼寧 大連 116023）

前言

凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）又名南美白對(duì)蝦、白蝦，原產(chǎn)于美洲太平洋沿岸水域，主要分布秘魯北部至墨西哥灣沿岸，以厄瓜多爾沿岸分布最為集中。1988年7月，凡納濱對(duì)蝦由中國科學(xué)院海洋研究所從美國夏威夷引進(jìn)我國，1992年8月人工繁殖獲得了初步成功，1994年通過人工育苗獲得了小批量的蝦苗，2000年實(shí)現(xiàn)工廠化育苗生產(chǎn)，隨后養(yǎng)殖規(guī)模年年擴(kuò)大，現(xiàn)已成為我國最主要的對(duì)蝦養(yǎng)殖品種，年產(chǎn)量占全國對(duì)蝦總產(chǎn)的85%以上。廣東和福建是我國凡納濱對(duì)蝦的主產(chǎn)區(qū)，2008年產(chǎn)量分別是196187噸和20356噸，占全國總量41.6%。該兩省凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖多采用高位池精細(xì)養(yǎng)殖、土池半精細(xì)養(yǎng)殖和灘涂粗放式混養(yǎng)三種養(yǎng)殖模式。作為華南地區(qū)對(duì)蝦養(yǎng)殖最富有特色的高位池養(yǎng)殖，因?yàn)槠漯B(yǎng)殖池塘設(shè)施齊備，管理精細(xì)，放苗密度大，產(chǎn)量也非常高，每公頃可高達(dá)48噸。

近年來，隨著凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖的迅速發(fā)展，一些負(fù)面問題也隨之暴露出來:養(yǎng)殖密度大、水質(zhì)惡化、對(duì)蝦體質(zhì)下降、病害問題嚴(yán)重等。在對(duì)蝦病害中，對(duì)蝦白斑綜合癥病毒所導(dǎo)致的死亡尤為嚴(yán)重，每年都流行于對(duì)蝦養(yǎng)殖地區(qū)，給養(yǎng)殖戶造成重大損失。對(duì)蝦白斑綜合癥病毒（white spot syndrome virus，WSSV） 自從 1993 年在日本首次報(bào)道以來，該病已經(jīng)成為危害世界對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)最為嚴(yán)重的一種病毒性疾病。WSSV對(duì)養(yǎng)殖對(duì)蝦是一種易傳染，高致死性的病毒，養(yǎng)殖條件下可使感染對(duì)蝦在3～10天內(nèi)死亡，死亡率高達(dá)80～100%。感染對(duì)蝦主要癥狀是，活力差、少食，瀕死者體色變紅，頭胸甲往往出現(xiàn)直徑0.5～2mm左右的白色斑點(diǎn)[1]。

本次調(diào)查，對(duì)廣東和福建地區(qū)不同類型養(yǎng)殖池塘和養(yǎng)殖技術(shù)條件下的對(duì)蝦進(jìn)行采樣檢測(cè)，以了解養(yǎng)殖模式和養(yǎng)殖技術(shù)對(duì)WSSV流行感染狀況的影響，希望為WSSV的防治提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 采樣

2009年8月至12月間，對(duì)廣東和福建地區(qū)15家養(yǎng)殖場(chǎng)的高位池、土池和灘涂混養(yǎng)池塘進(jìn)行了采樣，對(duì)蝦多為10～15 cm的成蝦，每個(gè)池塘采樣15尾，每5尾合并為一個(gè)樣。

1.2 DNA提取

樣品DNA提取按照海洋動(dòng)物基因組提取試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司）說明書進(jìn)行，DNA樣品-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 WSSV感染的分子方法診斷

該實(shí)驗(yàn)采用套式PCR檢測(cè)各采集樣品攜帶WSSV情況，PCR采用潘忠誠等設(shè)計(jì)的引物，一步PCR的擴(kuò)增產(chǎn)物是328 bp，二步PCR產(chǎn)物是258 bp[2]。一步PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為陰性的樣品，再采用套式PCR檢測(cè)。

2 結(jié)果和討論

不同養(yǎng)殖模式凡納濱對(duì)蝦攜帶WSSV的檢測(cè)結(jié)果如下表:

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高位池對(duì)蝦樣本采自廣東省汕尾市（1～3號(hào)池塘）和電白縣（4、5號(hào)池塘），4號(hào)池塘對(duì)蝦為一步PCR陽性，其余池塘對(duì)蝦均為套式PCR陽性。除4號(hào)池塘出現(xiàn)零星對(duì)蝦死亡外，其他池塘對(duì)蝦生長(zhǎng)良好。高位池的池塘面積均為0.43 hm2左右，池深1.8～2.3 m，底部及四壁鋪有地膜，放苗量為180～225萬尾/hm2，養(yǎng)殖過程中定期投放芽孢桿菌、光合細(xì)菌和乳酸菌等有益菌調(diào)控水環(huán)境，同時(shí)適當(dāng)投放浮游微藻營養(yǎng)素為微藻生長(zhǎng)提供營養(yǎng)，實(shí)行限量添換水，水質(zhì)清新良好。

土池養(yǎng)殖對(duì)蝦樣本采自廣東省電白縣（6～9號(hào)池塘）以及福建省福州地區(qū)（10、11號(hào)池塘）和廈門地區(qū)（12、13號(hào)池塘），池塘放苗量為45～60萬尾/hm2。其中6～9號(hào)池塘采用水質(zhì)生態(tài)調(diào)控的技術(shù)，雖然所采對(duì)蝦樣本攜帶病毒率100%，但是均為套式PCR陽性，攜帶病毒量低，未出現(xiàn)對(duì)蝦死亡。而福建地區(qū)所采的土池養(yǎng)殖則采用“清水養(yǎng)蝦”法，未采用水質(zhì)生態(tài)調(diào)控技術(shù)，沒有培養(yǎng)浮游微藻，10～13號(hào)池塘對(duì)蝦檢測(cè)均為一步PCR陽性，且出現(xiàn)死蝦而準(zhǔn)備收獲。

灘涂混養(yǎng)池塘對(duì)蝦樣本采自廣東省汕尾市，為凡納濱對(duì)蝦和近江牡蠣混養(yǎng)池塘，兩個(gè)池塘面積分別是220畝和370畝，每天隨潮差換水，日換水量在20%以上，對(duì)蝦放苗量低為30萬尾/hm2。由于對(duì)蝦放養(yǎng)密度低，加之近江牡蠣的濾食作用，水質(zhì)清新，使得對(duì)蝦生長(zhǎng)環(huán)境良好，因此對(duì)蝦攜帶病毒量低，為套式PCR陽性，但是病毒攜帶率高為100%。

從本次抽樣檢測(cè)結(jié)果可以看出，水質(zhì)生態(tài)調(diào)控技術(shù)具有營造良好水質(zhì)，控制對(duì)蝦體內(nèi)病毒增殖的功能，對(duì)控制對(duì)蝦病毒性疾病的暴發(fā)具有良好的作用，值得推廣使用[3-8]。

但是，本檢測(cè)結(jié)果也反映出對(duì)蝦苗種的質(zhì)量問題——攜帶病毒。高位池養(yǎng)殖采用沙濾井過濾海水，而且在蓄水池中普遍使用二氧化氯、漂白粉等藥物消毒，可以殺滅水體以及浮游生物攜帶的病毒，切斷因?yàn)樗耐緩絺鞑ゲ《尽ｐB(yǎng)殖中全程使用配合飼料，也杜絕了因食物途徑而傳入病毒。因此，養(yǎng)殖過程中所發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦攜帶的病毒很有可能是因種苗而帶入。育苗中，對(duì)蝦親蝦多投喂貝類和沙蠶促使性腺發(fā)育，幼苗又多使用輪蟲和鹵蟲等活餌料以增強(qiáng)營養(yǎng)，這些活餌料均已被證實(shí)可以攜帶甚至傳播WSSV[9-12]。因此，對(duì)蝦苗種攜帶的病毒可能由這些活餌帶入育苗場(chǎng)而感染。

所以，建議養(yǎng)殖戶在選購蝦苗前應(yīng)先到多個(gè)育苗場(chǎng)進(jìn)行實(shí)地考察，摸清蝦苗場(chǎng)的生產(chǎn)設(shè)施與管理、生產(chǎn)資質(zhì)文件、親蝦的來源與管理、蝦苗健康水平等一系列與蝦苗質(zhì)量密切相關(guān)的關(guān)鍵因素，再選擇蝦苗質(zhì)量好、信譽(yù)度高的苗場(chǎng)進(jìn)行選購。同時(shí)，購買時(shí)必須驗(yàn)證所購對(duì)蝦的健康證明，以保證對(duì)蝦不攜帶烈性傳染病病原體。

在養(yǎng)殖過程中，還應(yīng)注意水質(zhì)的調(diào)控，通過構(gòu)建優(yōu)良藻相和菌相，形成良好水色和合適透明度，給對(duì)蝦提供良好的生長(zhǎng)環(huán)境。同時(shí)，通過單細(xì)胞藻類、浮游動(dòng)物、有益細(xì)菌等基礎(chǔ)餌料生物，為對(duì)蝦前期健康生長(zhǎng)提供優(yōu)質(zhì)活餌料，促進(jìn)對(duì)蝦健康生長(zhǎng)，提高對(duì)蝦成活率。

[1]Lightner D V.A Handbook of Pathology and Diagnostic Procedures for Diseases of Penaeid Shrimp[M].Baton Rouge，LA:World Aquaculture Society，1996.

[2]潘忠誠，王芳宇，何建國，等.凡納濱對(duì)蝦在不同實(shí)驗(yàn)條件下感染白斑綜合癥的研究 [J].衡陽師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，29（6）:63-67.

[3]張漢華，李卓佳，郭志勛，等.益生菌對(duì)海水蝦池浮游生物的生態(tài)調(diào)控效果研究[J].海洋科學(xué)，2009，33（1）:12-20.

[4]李卓佳，李奕雯，曹煜成，等.對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境中浮游微藻、細(xì)菌及水質(zhì)的關(guān)系[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（4）:95-98.

[5]王少沛，曹煜成，李卓佳，等.水生環(huán)境中細(xì)菌與微藻的相互關(guān)系及其實(shí)際應(yīng)用[J].南方水產(chǎn)，2008，4（1）:76-80.

[6]曹煜成，李卓佳，楊鶯鶯，等.浮游微藻生態(tài)調(diào)控技術(shù)在對(duì)蝦養(yǎng)殖應(yīng)用中的研究進(jìn)展[J].南方水產(chǎn)，2007，3（4）:70-73.

[7]羅勇勝，李卓佳，楊鶯鶯，等.光合細(xì)菌與芽孢桿菌協(xié)同凈化養(yǎng)殖水體的研究[J].農(nóng) 業(yè) 環(huán) 境 科 學(xué) 學(xué) 報(bào) ，2006，25:206-210.

[8]張漢華，李卓佳，郭志勛，等.有益微生物對(duì)海水養(yǎng)蝦池浮游生物生態(tài)特征的影響研究[J].南方水產(chǎn)，2005，1（2）:7-14.

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