宋桂娥，何海霞（1.山西省電力公司醫(yī)保處，太原市 030001；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床藥理研究室，重慶市 400016）

丙泊酚（Propofol）為烷基酚類(lèi)的短效靜脈麻醉藥，臨床上主要用于全身麻醉的誘導(dǎo)或短時(shí)麻醉的維持。丙泊酚目前制劑主要有脂肪乳注射劑，其微乳制劑為新近研究的產(chǎn)品，無(wú)明顯破乳現(xiàn)象，更適于臨床使用。為比較2種制劑的作用，筆者在本文中以Beagle犬為研究對(duì)象，首先對(duì)其進(jìn)行了體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)比較研究，以為后續(xù)研究提供基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 試藥

實(shí)驗(yàn)制劑丙泊酚微乳注射液（簡(jiǎn)稱(chēng)MBF，北京世橋生物制藥有限公司提供，批號(hào)：20071003，pH 6.7，規(guī)格：100 mg·10 mL－1）；參比制劑丙泊酚脂肪乳注射液（商品名得普利麻，簡(jiǎn)稱(chēng)DBF，阿斯利康公司生產(chǎn)，批號(hào)：EX109，規(guī)格：100 mg·10 mL－1）；丙泊酚對(duì)照品（北京世橋生物制藥有限公司提供，批號(hào)：931028，純度：＞99.5%）；甲醇、乙腈均為色譜級(jí)，硫酸銨為分析純，水為三蒸水。

1.2 動(dòng)物

健康合格Beagle犬12只，♀♂各半，體質(zhì)量9～10 kg，個(gè)體間體質(zhì)量不超過(guò)±10%；由四川養(yǎng)麝研究所提供，環(huán)境設(shè)施合格證和質(zhì)量合格證號(hào)分別為川實(shí)動(dòng)管第64號(hào)及川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第63號(hào)。

1.3 儀器

1100系列高效液相色譜儀，包括G1321A型熒光檢測(cè)器及色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國(guó)Agilent公司）；SK30型低溫離心機(jī)（美國(guó)Sigma公司）；BS210S電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；QL-901旋渦混勻器（上海醫(yī)療器械六廠(chǎng)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱：Agilent ZORBAX-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；預(yù)柱：C18（250 mm×4.6 mm，30 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（75 ∶25）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：ex：276 nm，em：310 nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取丙泊酚對(duì)照品10 mg，置于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，制備為0.1μg·mL－1標(biāo)準(zhǔn)貯備液備用。

2.3 樣品處理[2]

取血漿0.2 mL置于1.5 mL帶蓋EP管內(nèi)，加飽和硫酸銨、甲醇、乙腈各0.2 mL，漩渦振蕩1 min，15000 r·min－1離心15 min，取上清液0.1 mL進(jìn)樣，記錄峰面積，以外標(biāo)法定量。

2.4 丙泊酚濃度測(cè)定方法學(xué)考察

2.4.1 色譜行為。取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液及空白血漿、空白血漿+對(duì)照品及血漿樣品進(jìn)樣分析，色譜結(jié)果詳見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.空白血漿；C.空白血漿+對(duì)照品；D.血漿樣品 ；1.丙泊酚Fig 1 HPLC chromatographyA.reference substance；B.blank plasma；C.blank plasma spiked with reference substance；D.plasma sample；1.propofol

由圖1可見(jiàn)，在本實(shí)驗(yàn)所采用的色譜條件下，血漿中丙泊酚的tR為11.5 min左右，且峰形良好，不受血漿內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與最低定量濃度。在空白血漿中分別添加丙泊酚對(duì)照品溶液，使血藥濃度相當(dāng)于0.01、0.05、0.25、0.5、1.5、3.5、7.0 μg·mL－1，按照“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理和分離測(cè)定，所得數(shù)據(jù)用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得丙泊酚峰面積（Y）與丙泊酚濃度（X）的回歸方程：Y＝446.5850X－4.5506（r＝0.9999）。結(jié)果表明，丙泊酚血漿檢測(cè)濃度線(xiàn)性范圍為0.01～7.0 μg·mL－1，最低定量濃度0.01 μg·mL－1。

2.4.3 回收率及日內(nèi)與日間精密度。于空白血漿中加入高、中、低（7.000、1.500、0.050 μg·mL－1）3種濃度的丙泊酚對(duì)照品溶液，按相關(guān)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)本法測(cè)定血漿中丙泊酚濃度的方法回收率、萃取回收率及日內(nèi)、日間RSD，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery and precision test

由表1可見(jiàn)，3種濃度的回收率為（79.85～110.12）%，日內(nèi)、日間RSD小于15.67%。

2.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。用空白犬血漿制備含丙泊酚濃度為0.05、1.5、7.0 μg mL－1的血漿樣品，在室溫、凍融條件下放置，室溫分別在0、4、8、14、20、24 h取樣，凍融分別在0、5、10、15 、21、28 d時(shí)取樣，測(cè)定丙泊酚的峰面積。結(jié)果表明，3種濃度樣品在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為2.42%、3.92%、5.28%；在凍融條件下放置28 d內(nèi)穩(wěn)定，RSD分別為4.11%、3.51%、5.03%。

2.5 實(shí)驗(yàn)方案

采用隨機(jī)交叉實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，單劑量靜脈注射給藥。將12只Beagle犬隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)制劑組和參比制劑組，每組6只，在Ⅰ、Ⅱ階段分別交叉靜脈注射2種制劑，2次給藥間經(jīng)1周清洗期。實(shí)驗(yàn)前禁食12 h后，于次日晨靜脈注射4 mg·kg－1實(shí)驗(yàn)制劑或參比制劑。給藥后4 h后統(tǒng)一進(jìn)食。實(shí)驗(yàn)期間禁食一切非實(shí)驗(yàn)藥物，并由研究人員進(jìn)行監(jiān)護(hù)，觀(guān)察記錄給藥后犬的一般體征狀況。于給藥后1、3、5、10、20、40、60、90、120、180、240、360、480 min采靜脈血1.5 mL，分離血漿，低溫保存（－20℃），待測(cè)。間隔1周后交叉靜注另一種制劑，按前述方法采集靜脈血。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用3p97計(jì)算軟件，計(jì)算各個(gè)體的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，AUC按梯形面積法計(jì)算。對(duì)2種制劑的AUC進(jìn)行方差分析，雙單側(cè)t檢驗(yàn)，（1－2α）置信區(qū)間法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，判斷兩者是否存在差異。

2.7 藥-時(shí)曲線(xiàn)

12只Beagle犬交叉靜脈注射2種制劑4 mg·kg－1后，2組平均血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)見(jiàn)圖2。

圖2 靜脈注射2種丙泊酚制劑后的平均藥-時(shí)曲線(xiàn)Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of propofol after intravenous administration

由圖2可見(jiàn)，2種丙泊酚制劑在Beagle犬體內(nèi)的藥-時(shí)曲線(xiàn)均呈二室模型，藥動(dòng)學(xué)過(guò)程較為接近。

2.8 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

采用3p97計(jì)算機(jī)軟件（中國(guó)數(shù)學(xué)藥理學(xué)會(huì)），計(jì)算各個(gè)體的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 2種丙泊酚制劑在Beagle犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（n＝12）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of propofol preparations in Beagle dogs（n＝12）

2.9 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較

對(duì)2種制劑的AUC經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析、雙單側(cè)t檢驗(yàn)及計(jì)算（1－2α）置信區(qū)間。結(jié)果，實(shí)驗(yàn)制劑MBF與參比制劑 DBF 的 AUC（0～∞）分別為（29.33±13.55）、（28.66±13.76）μg·min·mL－1，經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換方差分析結(jié)果表明，差異無(wú)顯著性，F(xiàn)（1，10）為0.2042，P＞0.05；雙單側(cè)t檢驗(yàn)t1＝3.956，t2＝3.054，均大于t0.05＝1.812；（1－2α）置信區(qū)間為[91.7%～115.5%]。

MBF 與 DBF的 AUC（0～t）分別為（27.67±9.60）、（21.90±10.10）μg·min·mL－1，經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換方差分析結(jié)果表明，差異無(wú)顯著性，F(xiàn)（1，10）為1.8235，P＞0.05；雙單側(cè)t檢驗(yàn)t1＝7.231，t2＝4.530，均大于t0.05＝1.812；（1－2α）置信區(qū)間為[98.3%～112.8%]。以上結(jié)果表明2種制劑在犬體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC無(wú)顯著性差異。

3 討論

有關(guān)丙泊酚濃度測(cè)定的方法已有報(bào)道[1]，本文在現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)室條件下，對(duì)文獻(xiàn)方法進(jìn)一步驗(yàn)證，在所建立的色譜方法下，主藥的峰形良好，且與血漿內(nèi)源性物質(zhì)分離好，回收率高，專(zhuān)屬性強(qiáng)，完全能滿(mǎn)足藥動(dòng)學(xué)研究要求。

由圖2及表2可見(jiàn)，2種丙泊酚制劑在犬體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程較為接近，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)3種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理表明，2種制劑無(wú)顯著性差異。本實(shí)驗(yàn)為新劑型丙泊酚微乳注射液的應(yīng)用提供了藥動(dòng)學(xué)依據(jù)。

[1]王增濤.3歲以下兒童丙泊酚藥動(dòng)學(xué)研究[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2006，23（2）：132.

[2]余松林主編.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：330.