劉 平,呂占軍,李明輝,黃偉平

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院,黑龍江哈爾濱150030)

貉是珍貴的毛皮動(dòng)物,也是我國生產(chǎn)的主要毛皮動(dòng)物之一,由于貉屬季節(jié)性一次發(fā)情動(dòng)物,如果當(dāng)年不能配種,則影響母貉的利用率。對(duì)此萬國有等曾采用絨毛膜促性腺激素(HCG)使兩年均未發(fā)情及發(fā)情不正常的母貉均發(fā)情配種[3];李志狀等用孕馬血清促性腺激素(PMSG)使繁殖率差空懷率高的母貉均交配,受胎率83.3%[2]。但這有關(guān)母貉生殖的研究多在繁殖季節(jié)進(jìn)行,而本試驗(yàn)則在母貉非繁殖季節(jié)(12月初)對(duì)初產(chǎn)貉肌肉注射不同劑量的PMSG和HCG,以其誘導(dǎo)發(fā)情,誘發(fā)卵泡發(fā)育,為今后母貉人工繁殖技術(shù)的普及、人工同期發(fā)情和配種、保存優(yōu)良品種而進(jìn)行的胚胎移植技術(shù)的研究等提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 哈爾濱市某貉場(chǎng)飼養(yǎng)的20只健康母貉。

1.2 藥物 PMSG、HCG(寧波第二激素廠)。

1.3 方法 20只健康母貉分為試驗(yàn)組(共15只)和對(duì)照組(5只),試驗(yàn)組又分為3個(gè)小組。試驗(yàn)第1天各試驗(yàn)組肌肉注射不同劑量PMSG,第6天改注HCG,各組注射劑量見表1。對(duì)照組肌肉注射生理鹽水。第7天取出各組動(dòng)物的卵巢,置于10%中性福爾馬林溶液中固定,石蠟包埋,切片,H.E.染色,顯微鏡下觀察。

表1 各試驗(yàn)組注射PMSG、HCG劑量

1.4 數(shù)據(jù)分析 采用Microsoft Excel數(shù)據(jù)分析工具處理后用表示,并用方差分析各組間的顯著性差異檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 卵巢形態(tài)變化 表2結(jié)果顯示,試驗(yàn)1組和2組卵巢重量與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05),試驗(yàn)3組卵巢重量相當(dāng)于對(duì)照組的3倍多,差異極顯著(P＜0.01);試驗(yàn)2組和3組卵巢寬顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);試驗(yàn)3組卵巢大小與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)。

表2 卵巢形態(tài)變化比較

2.2 卵泡發(fā)育變化 休情期母貉肌肉注射不同劑量的PMSG、HCG后,各組卵巢的卵泡均有不同程度的發(fā)育(見表3)。對(duì)照組卵巢的白膜層和皮質(zhì)層均不發(fā)達(dá),皮質(zhì)層中分布有許多原始卵泡、初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡,未觀察到黃體和白體(見中插彩版圖1)。試驗(yàn)1組卵巢的白膜層和皮質(zhì)層均發(fā)達(dá),初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡所占百分率與對(duì)照組相比差異不顯著(P＞0.05),三級(jí)卵泡所占百分率與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05),還觀察到有閉鎖的初級(jí)卵泡,主要分布在皮質(zhì)層淺層,髓質(zhì)部有較多血管,充血現(xiàn)象明顯(見中插彩版圖2)。試驗(yàn)2組卵巢的白膜層和皮質(zhì)層均發(fā)達(dá),在皮質(zhì)層淺層觀察到很多呈聚集分布的原始卵泡和初級(jí)卵泡,次級(jí)卵泡所占百分率顯著低于對(duì)照組(P＜0.05),三級(jí)卵泡所占百分率與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05),其周圍有較多血管,充血現(xiàn)象明顯,且可觀察到少量閉鎖的初級(jí)和次級(jí)卵泡(見中插彩版圖3)。試驗(yàn)3組卵巢的皮質(zhì)層很發(fā)達(dá),皮質(zhì)層淺層分布有許多原始卵泡和初級(jí)卵泡,次級(jí)卵泡所占百分率顯著低于對(duì)照組(P＜0.05),三級(jí)卵泡所占百分率與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01),其周圍分布有大量充血現(xiàn)象明顯的血管(見中插彩版圖4)。

表3 各級(jí)卵泡發(fā)育情況

3 討論

貉屬季節(jié)性一次發(fā)情動(dòng)物,其卵巢大致從秋分開始發(fā)育,至1月底2月初可有近成熟的卵泡,整個(gè)發(fā)情期由2月初持續(xù)至4月上旬,以2月下旬到3月上旬為發(fā)情旺期。交配后受胎的母貉即進(jìn)入妊娠期,產(chǎn)仔泌乳期。非受胎母貉和斷乳以后的母貉,又恢復(fù)到靜止期,直至秋分性器官再次發(fā)育[1],11月末黃體消失,卵巢逐漸增長,有許多原始卵泡和初級(jí)卵泡,及部分處于退化階段的次級(jí)卵泡。在發(fā)情周期的一定階段,注射適量的促卵泡素類激素制劑PMSG,能促進(jìn)卵泡生長,使將要退化的卵泡發(fā)育成熟,于排卵前注射促黃體素類激素制劑HCG能促使成熟卵泡釋放,黃體生成。

試驗(yàn)結(jié)果表明,不同劑量激素組合處理休情期母貉后,3個(gè)試驗(yàn)組貉的卵巢重量與對(duì)照組相比差異顯著,其中以試驗(yàn)3組卵巢最重,其重量相當(dāng)于對(duì)照組的3倍多。

注射PMSG、HCG后各試驗(yàn)組卵泡均有不同程度的發(fā)育,試驗(yàn)1組和2組三級(jí)卵泡增多,但閉鎖的卵泡也較多,而試驗(yàn)3組觀察有較多的三級(jí)卵泡,且部分三級(jí)卵泡擴(kuò)展達(dá)卵巢皮質(zhì)的整個(gè)厚度,從卵巢外觀來看甚至有個(gè)別卵泡突出于卵巢表面?？梢?注射PMSG 1 000 IU和HCG 200 IU的劑量是比較合適的。

HCG對(duì)雌性動(dòng)物能促進(jìn)卵泡發(fā)育、成長,在卵泡成熟時(shí)能促使其排卵,并形成黃體,給予大劑量時(shí)能延長黃體存在時(shí)間,但在卵泡未成熟時(shí)并無這些作用[4]。而本試驗(yàn)沒有觀察到卵巢中有血體和黃體出現(xiàn),分析可能是由于注射PMSG促進(jìn)卵泡生長發(fā)育,但在注射HCG時(shí)卵泡尚未發(fā)育至即將排卵,只是繼續(xù)促進(jìn)卵泡發(fā)育生長,沒有起到促使成熟卵泡排卵并生成黃體的作用。因此,注射HCG的時(shí)間有待于進(jìn)一步研究。

[1]華樹芳.貉的選配及繁殖特點(diǎn)[J].特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)植物,2001(3):5.

[2]李志狀,黃顯銘,楊岐.應(yīng)用孕馬血清促性腺激素提高母貉受胎率的試驗(yàn)報(bào)告[J].經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào),1987(4):11-19.

[3]萬國有,李志狀.應(yīng)用絨毛膜促性腺激素提高母貉繁殖力的觀察[J].經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào),1986(4):23-24.

[4]王建辰.家畜生殖內(nèi)分泌學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1993:130-135.