劉子暄，王小鶯，嚴 明

（1.江西農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，南昌 330045；2.江西省中獸醫(yī)研究所，南昌 330006）

泰和烏骨雞是聞名中外的藥用家禽，國際承認的標準品種，因具有藥用、營養(yǎng)、觀賞價值為古今中外學者所重視。烏骨雞區(qū)別于其他雞的顯著特征是體內(nèi)黑色素分布廣泛，大量研究表明泰和烏骨雞體內(nèi)的黑色素，是滋補、強身健體、抗衰防老，頤養(yǎng)天年的物質(zhì)基礎，具有抗衰老、抗疲勞、調(diào)節(jié)機體平衡及抑制流感病毒誘導細胞凋亡的作用。烏骨雞黑色素大量沉積在皮膚、肌肉、骨膜及部分內(nèi)臟中，據(jù)《本草綱目》記載，烏骨雞藥用效果與雞皮、肉和骨頭的黑色深淺有關，其顏色越深者，入藥愈佳[1]。因此本研究通過在基礎飼料中添加中草藥飼料添加劑來提高烏骨雞酪氨酸酶的活性，以促進烏骨雞黑色素的沉積，從而提高其藥用價值和營養(yǎng)價值。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試驗設計

試驗動物由江西省泰和縣烏骨雞原種場提供。選用健康、初生重相近的1日齡泰和烏骨雞180羽，隨機分為4組，每組設3個重復，每個重復15只雞，分別為對照組、中藥Ⅰ組、中藥Ⅱ組、中藥Ⅲ組。試驗分0～4周齡、5～8周齡、9～12周齡三個階段飼養(yǎng)。試驗于2009年5月28日～2009年8月20日在江西農(nóng)業(yè)大學動科院臨床實驗室進行。

1.2 中草藥飼料添加劑

本試驗三種中草藥配方均由江西省中獸醫(yī)研究所配置，將中草藥干燥后粉碎成細粉，按泰和烏骨雞基礎日糧的0.5%添加，最后與基礎日糧混勻。其中中藥Ⅰ組添加的是0.5%以黑芝麻為主要成分的復方中草藥添加劑Ⅰ，中藥Ⅱ組添加的是0.5%以血余炭為主要成分的復方中草藥添加劑Ⅱ，中藥Ⅲ組添加的是0.5%以何首烏為主要成分的復方中草藥添加劑Ⅲ。

1.3 日糧組成及營養(yǎng)水平

試驗基礎日糧分0～4周齡、5～8周齡、9～12周齡三個階段。飼料原料營養(yǎng)價值參照《中國飼料數(shù)據(jù)庫》（2007），其營養(yǎng)水平參照瞿明仁等（1999）、陳靖華等（1998）、陳楠和鄭城（1997）、張順珍等（1995）研究結果設計[2-6]。各組基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表1：注：預混料可為每kg飼糧提供：維生素A，5500IU；維生素D3，650IU；維生素 E，35mg；維生素 K3，2.5mg；核黃素，7.5mg；泛酸 ，18.6mg； 尼 克 酸 ，45.0mg； 生 物 素 ，0.25mg； 維 生 素B12，100μg；錳，180mg，鐵，240mg；鋅 120mg；銅，25mg；碘，0.3mg；硒,0.5mg。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 測定方法

1.4.1 樣本采集

分別在烏骨雞4周齡、8周齡及12周齡末各重復組隨機抽取2～3只健康狀況正常，接近平均體重的烏骨雞來進行測定。于清晨空腹稱重后，立即放血宰殺，打開腹腔，取其肌肉，置于-20℃冰箱待測。

1.4.2 測定方法

生長性能

平均日增重： 分別于試驗的第 0、2、4、6、8、10、12 周末清晨喂料前空腹稱重，計算體增重，由末重與始重之差計算各重復組泰和烏骨雞的平均日增重。

平均日采食量： 分別于試驗的第 2、4、6、8、10、12 周末早晨，稱量各重復組的飼料消耗量，計算各重復雞的日采食量，用投料量減去剩料量即得采食量，算出平均日采食量。

料重比：由采食量與體增重相除得出。

死亡率和腹瀉率：實驗全期觀察雞群健康狀況，記錄各組每日的死亡數(shù)，統(tǒng)計雞群死亡率，計算死淘率。腹瀉以拉水樣糞便，肛門留有腹瀉物為依據(jù)，記錄每天每組的腹瀉只數(shù)。其中，腹瀉率=（腹瀉只數(shù)×腹瀉天數(shù)）/（總只數(shù)×飼養(yǎng)天數(shù)）×100%。

黑色素含量

本試驗選擇泰和烏骨雞的肌肉來測定當中黑色素的含量，通過鹽酸提法提取黑色素，參照游艷華[7]等方法并加以改進。烏骨雞黑色素含量計算公式是：黑色素含量=黑色素重量（g）/樣本重量（g）×100%。

酪氨酸酶活性

參照鄧君[8]、AlisonJ.WINDER[9]等主法并稍加改進。分別取烏骨雞4周齡、8周齡及12周齡末的肌肉通過終止分光光度法，用UV-721可見分光光度計測定吸光度，以此對酪氨酸酶的活性來進行測定。其中波長為505nm，比色杯光徑1cm，空白管調(diào)零，讀取0min、5min時的吸光度，以A505每分鐘增加或減少0.001為一個酶活力單位。

1.5 統(tǒng)計分析

所有的結果以平均數(shù)±S.D.表示。采用單因素方差分析法，利用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析和Duncan,s多重比較。

2 結果與分析

2.1 不同中草藥添加劑對泰和烏骨雞生產(chǎn)性能的影響

由表2見，在前2周對照組日增重、日采食量均比中藥組低。但2～8周齡對照組與中藥組差異不大。這可能是因為雛雞免疫力差，容易感染球蟲病以及雞白痢，并表現(xiàn)為精神萎靡、腹瀉、食欲差，有些嚴重的甚至造成死亡，而中藥組在基礎日糧中添加的中草藥添加劑能在一定程度上提高雛雞的免疫力和抗病力，減少腹瀉雞只數(shù)量與腹瀉程度，從而提高其日增重與日采食量。由表3可見，中藥組的烏骨雞腹瀉率與死亡率確實均要低于對照組。對于料重比，在0～10周齡時，對照組與中藥組四個試驗組各組之間均差異不大。在11～12周齡時，對照組比中藥組均低，與中藥Ⅰ組、中藥Ⅱ組有顯著差異（P＜0.05）。在9～12周齡時，對照組在日增重及日采食量方面也均略高于中藥組，但差異不顯著（P＞0.05）。這可能是由于中草藥的適口性不好，從而影響了雞的采食量，使其采食量要略低于對照組。然而，從全期（0～12周齡）來看，平均日增重、平均日采食量和料重比各組之間不存在顯著差異（P＞0.05）。

表2 中草藥添加劑對泰和烏骨雞日增重及日采食量的影響

接上表

從表3可知，除中藥Ⅰ組外、中藥Ⅱ組、中藥Ⅲ組全期死亡率與對照組相比均有下降的趨勢，其中中藥Ⅱ組的死亡率最低，比對照組下降了4.44個百分點。腹瀉率以對照組最高，占總雞數(shù)的3.89%，中藥Ⅲ組的腹瀉率最低，比對照組下降了8..89個百分點。這可能是因為飼料中添加的復方中草藥添加劑，能驅(qū)蟲殺菌、增強機體免疫力，對于緩解烏骨雞試驗期初期的腹瀉與應激具有一定效果，增強了適應能力，從而降低了腹瀉率與死亡率。

表3 中草藥添加劑對泰和烏骨雞死亡率及腹瀉的影響

2.2 中草藥添加劑對泰和烏骨雞黑色素含量的影響

如表4示，全期來看，中藥Ⅰ組、中藥Ⅲ組泰和烏骨雞肌肉中的黑色素含量均高于對照組，而不同中藥之間肌肉中黑色素含量差異均不顯著（P＞0.05）。9～12周齡時，三個中藥組肌肉中的黑色素含量均高于對照組，其中，中藥Ⅰ組、中藥Ⅲ組肌肉黑色素含量顯著高于對照組（p＞0.05）。從總體來看，三個中草藥添加劑均能夠不同程度上提高泰和烏骨肌肉黑色素的合成，隨著日齡的增大，各組烏骨雞肌肉中黑色素的含量均有不同程度的下降趨勢。

表4 中草藥添加劑對泰和烏骨雞黑色素的影響（%）

2.3 中草藥添加劑對泰和烏骨雞酪氨酸酶活力的影響

從表5知，4周齡、8周齡時，中藥Ⅰ組泰和烏骨雞肌肉中的酪氨酸酶活力均顯著高于對照（p＜0.05）。12周齡時，中藥Ⅱ組烏骨雞肌肉中酪氨酸酶活力高于其它三個試驗組，并顯著高于對照組（p＜0.05）。從總體上看，三個中藥組肌肉中酪氨酸酶活力全期均略高于對照組，而三個中藥組之間差異不顯著（P＞0.05），且各試驗組泰和烏骨雞肌肉中的酪氨酸酶活力隨周齡的增加而呈現(xiàn)出下降的趨勢。

將上述結果同表4進行比較可發(fā)現(xiàn)，這三種不同復方中草藥添加劑確實能在不同程度上提高泰和烏骨雞肌肉中酪氨酸酶的活力，從而促進黑色素的合成。由此說明作為黑色素生成過程中第一限速酶的酪氨酸酶，其活力大小確實對于黑色素的合成起著決定性的作用。

表5 中草藥添加劑對泰和烏骨雞酪氨酸酶活力的影響

3 討論

中草藥飼料添加劑作為綠色、安全的飼料添加劑，如今已成為國內(nèi)外的研究熱點。大量研究表明，動物飼料中添加中草藥可提高動物體免疫功能，增加營養(yǎng)物質(zhì)消化利用率，提高畜禽生產(chǎn)性能和降低飼料成本。本研究通過飼料途徑來促進烏骨雞酪氨酸酶活性以及黑色素的合成，從而探討利用中草藥飼料添加劑在烏骨雞藥用價值和營養(yǎng)價值的可行性。試驗結果表明，本研究所用的三個中草藥添加劑在烏骨雞前2周能一定程度提高雛雞的免疫力和抗病力，減少腹瀉雞只數(shù)量、程度與死亡率，提高其日增重與日采食量。中藥組采用食量要略低于對照組。然而從全期（0～12周齡）來看，三種中草藥添加劑總體上并未對泰和烏骨雞的生產(chǎn)性能造成不利影響。

黑色素的生成是黑素細胞的一個復雜生化過程，黑色素由酪氨酸經(jīng)酪氨酸酶的作用，經(jīng)過一系列的復雜的生物轉化反應而形成。在黑色素的生物合成過程中，有三種酶對黑色素的合成起著重用作用，即酪氨酸酶、多巴色素互變酶和5，6一二羥基吲哚羧酸氧化酶，其中，酪氨酸酶是各種生物體黑色素生成的限速酶或關鍵酶[1]，對酪氨酸酶活性調(diào)節(jié)可直接影響黑色素的合成。在醫(yī)學上，大量研究表明許多中草藥對酪氨酸酶具有激活作用，并能促進酪氨酸酶相關蛋白基因的表達，并進而促進黑色素的合成，本研究中，三個不同復方中草藥添加劑（0.5%添加水平）在試驗全期也均能不同程度提高泰和烏骨雞肌肉中酪氨酸酶的活性從而促進黑色素的合成，表明本研究中這三種中草藥飼料添加劑確實對酪氨酸酶具有激活作用并進而促進黑色素的合成。

在本研究中，三種不同復方中草藥添加劑在試驗全期均能不同程度提高泰和烏骨雞肌肉中酪氨酸酶的活性以及黑色素的合成，但是對酪氨酸酶的激活能力與體內(nèi)促進黑色素的合成的能力并不完全平行。8周齡時中藥Ⅰ組烏骨雞肌肉中酪氨酸酶的活性與對照組有顯著差異（P＜0.05）。但是其黑色素含量在12周齡時才與對照組形成顯著差異（P＜0.05）。12周齡時中藥Ⅱ組烏骨雞肌肉中酪氨酸酶的活性與對照組形成顯著差異（P＜0.05），但是同時期其黑色素含量高于對照組但未有顯著差異。這可能是因為黑色素由酪氨酸酶的作用，經(jīng)過一系列的復雜的生物轉化反應才能形成，這需要一個過程，因此對黑色素合成的影響要滯后一些，從而造成對烏骨雞肌肉中酪氨酸酶的激活能力與體內(nèi)促進黑色素合成的能力并不平行。中藥Ⅲ組烏骨雞肌肉中酪氨酸酶的的活性三個階段均高于對照組但未形成顯著差異，而其黑色素含量在全期均高于其他試驗組，并在12周齡時顯著高于對照組（P＜0.05），解釋該現(xiàn)象的原因是可能中藥促進黑色素生成的機理，不僅限于對酪氨酸酶的激活作用，還可能存在其他的作用機制，從而造成對烏骨雞肌肉酪氨酸酶的激活能力與體內(nèi)促進黑色素合成的能力并不完全平行。因此，中草藥添加劑對泰和烏骨雞酪氨酸酶活性與黑色素合成過程中其它相關酶的調(diào)節(jié)作用值得進一步研究，以利于深入揭示中草藥促進泰和烏骨雞黑色素合成的可能機制，從而為中草藥在提高泰和烏骨雞黑色素含量中的推廣應人提供更為確切的科學依據(jù)。

4 結論

本試驗所用三種不同復方中草藥添加劑以0.5%水平添加至泰和烏骨雞日糧中，總體上未對泰和烏骨雞的生產(chǎn)性能造成不利影響，且能在一定程度上提高雛雞的免疫力和抗病力，降低其腹瀉率與死亡率，并且不同程度地提高泰和烏骨雞肌肉中酪氨酸酶的活性，促進其黑色素的合成。中草藥添加劑促進泰和烏骨雞黑色素合成的作用機制值得我們進一步研究，以利進一步篩選作用更強的中草藥添加劑配方，為中草藥在提高泰和烏骨雞黑色素含量中的推廣應用提供更為確切的科學依據(jù)。

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