邱 燕 葉元土 蔡春芳 代小芳 尹曉靜 張 俊 譚芳芳

酵母培養(yǎng)物（yeast culture，簡稱YC）通常指用固體或液體培養(yǎng)基經(jīng)酵母菌發(fā)酵的培養(yǎng)物和酵母菌的混合物，含有維生素、礦物質(zhì)、消化酶、促生長因子、有機酸、寡糖、增味物質(zhì)和較豐富的氨基酸等，營養(yǎng)十分豐富，是集營養(yǎng)和保健為一體的飼料添加劑[1-2]，是生物技術(shù)和微生態(tài)技術(shù)在飼料添加劑中的研究成果之一，具有無殘留、無污染和無毒等優(yōu)點，逐漸成為目前研究的熱點。本試驗通過在草魚基礎(chǔ)飼料中添加不同濃度的酵母培養(yǎng)物，旨在探討酵母培養(yǎng)物對草魚生長性能的影響，為其在草魚飼料中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 試驗材料和方法

1.1 試驗材料

酵母培養(yǎng)物由達(dá)農(nóng)威生物發(fā)酵工程技術(shù)（深圳）有限公司提供，有效成分是酵母細(xì)胞外代謝產(chǎn)物。草魚，由無錫宜興養(yǎng)殖廠提供。

1.2 試驗設(shè)計及日糧組成

試驗選取初均重（69.51±6.29）g的草魚144尾，隨機分為3組，以基礎(chǔ)飼料作為對照組；在基礎(chǔ)飼料中分別添加1000、2000 mg/kg的酵母培養(yǎng)物作為2個試驗組，共3個組。每組3個重復(fù)，每個重復(fù)16尾魚，基礎(chǔ)飼料配方及營養(yǎng)水平見表1。飼料原料經(jīng)微粉碎后過40目篩，混合均勻后用小型顆粒飼料機加工成直徑1.5 mm的顆粒飼料備用，飼料加工過程中溫度65～70℃，持續(xù)時間約1 min。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))（%）

1.3 飼養(yǎng)管理

在50畝的池塘中設(shè)置網(wǎng)箱進(jìn)行養(yǎng)殖試驗，網(wǎng)箱規(guī)格為1 m×1 m×1.5 m，本試驗共15個網(wǎng)箱。試驗魚經(jīng)過2周的養(yǎng)殖馴化后再進(jìn)行分組。飼料投喂每天3次，投喂量為體重的2%～3%。試驗時間為2008年8月至10月，飼養(yǎng)期間水質(zhì)條件為：水溫（28.0±3.0）℃、DO＞8.0 mg/l、pH 值＜8.3、亞硝酸鹽＜0.01 mg/l、硫化物＜0.05 mg/l。正式養(yǎng)殖試驗70 d。

1.4 樣品采集和分析

飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，禁食24 h后測定每箱魚的總體重和尾數(shù)，計算成活率、飼料系數(shù)、特定生長率。解剖試驗魚，取出內(nèi)臟團，分離出腸道，剔除表面脂肪組織，分別取中腸1 cm左右大小的組織1～2塊，縱向剖開，使腸粘膜暴露于空氣中，用生理鹽水沖洗3～4次，除去其上所帶有的血液、糞便等雜質(zhì)，制得腸道樣品。掃描電鏡腸道樣品置于4%戊二醛固定液中，超聲波洗滌10 min，更換固定液再次洗滌，更換固定液保存。制樣時將其取出，洗滌，適當(dāng)修剪，1%鋨酸固定1 h，0.1 M pH值7.2磷酸緩沖液洗3次，叔丁醇系列梯度脫水，真空干燥，噴金，S-4700型冷場發(fā)射掃描電鏡觀察、拍照。

組織切片腸道樣品置于4%中性甲醛中固定、70%乙醇保存。分別經(jīng)濃度為70%、80%、90%、95%以及100%的酒精梯度脫水，并置于二甲苯中透明，最后包埋于低熔點石蠟中。使用KD-2508型切片機橫向連續(xù)切片，厚度為8 μm，而后展片于清潔的載玻片上。采用H.E染色，中性樹膠封片。顯微測量腸道皺襞高度、寬度，粘膜層、肌層、漿膜層厚度，光學(xué)顯微鏡下觀察并采用Nikon COOLPIX4500型相機進(jìn)行拍照。

1.5 計算公式

成活率（SR，%）=（試驗?zāi)~尾數(shù)/試驗初魚尾數(shù)）×100；

特定生長率（SGR，%/d）=（ln末均重-ln初均重）/飼養(yǎng)天數(shù)×100；

飼料系數(shù)（FCR）=每箱投喂飼料總量/每箱魚體總增重量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,結(jié)果采用Excel和SPSS14.0版統(tǒng)計軟件中One-Way Anova過程進(jìn)行方差分析,并進(jìn)行Duncan's法多重比較,顯著水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 酵母培養(yǎng)物對草魚生長性能的影響

經(jīng)過70 d的池塘網(wǎng)箱養(yǎng)殖試驗，各組試驗草魚的特定生長率和飼料系數(shù)結(jié)果見表2。各試驗組成活率均為100%，對照組為98%。在特定生長率方面：與對照組相比，各試驗組的特定生長率增加，分別增加了28.72%、4.26%。其中，酵母培養(yǎng)物為1000 mg/kg組顯著高于對照組（P＜0.05）。在飼料系數(shù)方面：與對照組相比，各試驗組飼料系數(shù)分別下降了33.76%、10.55%，其中1000 mg/kg組飼料系數(shù)顯著低于對照組（P＜0.05）。

表2 酵母培養(yǎng)物對各試驗組草魚成活率、特定生長率和飼料系數(shù)的影響

2.2 酵母培養(yǎng)物對草魚腸道粘膜形態(tài)的影響

2.2.1 腸道皺襞觀察及測量

各組草魚腸道皺襞測量結(jié)果見表3，各試驗組皺襞高度均顯著高于對照組（P＜0.05），粘膜層厚度與皺襞高度表現(xiàn)一致（P＜0.05）。各試驗組皺襞寬度、肌層厚度、漿膜層厚度均與對照組差異不顯著（P＞0.05）。

表3 酵母培養(yǎng)物對各組腸道皺襞的影響（μm）

2.2.2 腸道微絨毛觀察及測量

腸道微絨毛觀察結(jié)果見表4，各試驗組微絨毛高度均高于對照組，其中1000 mg/kg組顯著高于對照組（P＜0.05）。各試驗組微絨毛寬度均高于對照組，但差異不顯著（P＞0.05），微絨毛密度均高于對照組，其中2000 mg/kg組顯著高于對照組（P＜0.05）。

表4 酵母培養(yǎng)物對各試驗組腸道微絨毛的影響

3 討論

本試驗中，各試驗組特定生長率比對照組分別增加了28.72%、4.26%，飼料系數(shù)與對照組相比，下降了10%以上，其中1000 mg/kg組下降了33.76%。此結(jié)果表明，酵母培養(yǎng)物在一定范圍內(nèi)可有效促進(jìn)草魚的生長，降低飼料系數(shù)，且酵母培養(yǎng)物1000 mg/kg組生長效果最好。此結(jié)果可能由于酵母培養(yǎng)物中甘露寡糖成分促進(jìn)了腸道中雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌的生長，阻止了致病菌的入侵，維持了腸道菌群的平衡，并且改善了腸道粘膜形態(tài)；營養(yǎng)物質(zhì)成分為草魚生長提供了營養(yǎng)物質(zhì)，參與機體代謝，還有各種未知生長因子共同作用，從而促進(jìn)草魚的生長。這與劉哲等研究酵母培養(yǎng)物（YC）添加量為5%時，明顯促進(jìn)了建鯉生長的結(jié)果；吳新民等在對蝦飼料中添加活性酵母可提高飼料利用率的結(jié)果一致[3-4]。

YC對粘膜的保護作用可能部分與酵母細(xì)胞壁有關(guān)。而酵母細(xì)胞壁甘露寡糖不經(jīng)消化直接到達(dá)后腸促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸桿菌增殖，并且與病原菌在腸壁上的受體非常相似，可吸附病原菌，減少了絨毛與抗原的結(jié)合機會，改善腸道微生物區(qū)系，進(jìn)而影響腸道形態(tài)。Zhang等證實，酵母細(xì)胞壁改善了肉仔雞的腸粘膜形態(tài)[5]。有報道YC對家禽粘膜形態(tài)也有影響，家禽日糧中添加酵母細(xì)胞或酵母細(xì)胞壁，能提高絨毛高度和絨毛高度與隱窩深度比[6]。本試驗結(jié)果顯示，各試驗組皺襞高度均顯著高于對照組，各試驗組肌層厚度均高于對照組，消化管壁肌肉的厚度決定食糜的機械消化速率。這與劉觀忠報道的YC增加了腸壁厚度的結(jié)果一致[7]。各試驗組微絨毛高度均高于對照組，其中1000 mg/kg組顯著高于對照組。各試驗組微絨毛寬度、密度均高于對照組。此結(jié)果表明，基礎(chǔ)飼料中添加1000 mg/kg酵母培養(yǎng)物能夠促進(jìn)草魚腸道皺襞、微絨毛發(fā)育、生長，從而使腸粘膜形態(tài)得到改善，且與提高其平均日增重和降低飼料系數(shù)的試驗結(jié)果相一致?？赡苁且驗閅C到達(dá)消化道內(nèi)能分泌并活化大量蛋白酶，促進(jìn)飼料蛋白的降解；也可能是酵母細(xì)胞壁某些成分促進(jìn)了消化道的發(fā)育，改善了腸道內(nèi)環(huán)境。劉觀忠等研究發(fā)現(xiàn)酵母培養(yǎng)物具有改善雛雞腸壁結(jié)構(gòu)的效果。李順等發(fā)現(xiàn)，活性酵母可替代抗生素，有促進(jìn)仔豬生長和降低腹瀉的作用，并可改善小腸上皮組織結(jié)構(gòu)[7-8]。胡友軍等研究發(fā)現(xiàn)，添加活性酵母顯著提高了仔豬腸道絨毛高度，一定程度上克服了斷奶應(yīng)激對腸道造成的損傷[9]，這些與本試驗研究結(jié)果相似。關(guān)于酵母對腸道的保護作用的機制尚需進(jìn)一步研究。

有報道隨著活酵母飼料添加水平的升高，肉仔雞生長速度和飼料利用率有隨之減少的趨勢，當(dāng)YC添加水平達(dá)到0.9%時反而對肉雞生長有抑制作用，劉觀忠也有類似報道[7,10-11]。本文研究的添加2000 mg/kg酵母培養(yǎng)物，特定生長率有下降的趨勢且飼料系數(shù)有所增加，因此，高濃度添加酵母培養(yǎng)物并不能使草魚的生產(chǎn)性能進(jìn)一步改善，與他們的報道一致。可能由于過高劑量YC引起的免疫反應(yīng)過度，使用于生長的能量或營養(yǎng)素減少，具體原因有待進(jìn)一步證明。

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