賈秋紅 鄭宗林 Delbert M.Gatlin III 葉金明

病害一直是水產(chǎn)養(yǎng)殖面臨的主要問題。病害造成的死亡率上升、生產(chǎn)效益下降，每年都會給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。開發(fā)抗生素的替代品一直是研究者工作的重點。雖然在水產(chǎn)行業(yè)中功能性飼料還是一個比較新穎的概念，但這代表著科學飼養(yǎng)的新理念，即：飼料的功能應該從僅僅滿足養(yǎng)殖水生生物的營養(yǎng)需求，提升到能夠提高水生生物的健康水平、提高抗應激能力以及抗病能力上（Gatlin，2002）。運用非抗生素來幫助改善生長，提高飼料利用率，減少應激和死亡率，是未來的研究方向。

益生素是一種被添加到日糧中改善腸道微生物平衡的功能性產(chǎn)品，已被水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)關注（Gatesoupe，1999；Irianto 等，2002）。它是一種能夠增進宿主健康的非消化性的成分，通過選擇性地刺激腸道內(nèi)一種或有限數(shù)量的細菌生長和激活細菌代謝來提高宿主腸道平衡（Gibson等，1995）。包括甘露聚糖（White等，2002）、乳糖（Szilagyi，2002）、果糖和菊粉（Teitelbaum等，2002）等。啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是來自發(fā)酵工業(yè)中的天然產(chǎn)品，它含有各種免疫增強物質，如：β-葡萄糖、核酸和甘露聚糖等，能夠提高魚的免疫反應（Siwicki等，1994；Ortuno等，2002）和生長性能（Lara-Flores等，2002），是魚類養(yǎng)殖中較好的免疫增強劑。Li和 Gatlin（2003）證實了直溶性啤酒酵母能夠提高雜交條紋鱸的免疫機能和對鏈球菌攻毒時的抵抗力。益生素是含有直溶性酵母、乳成分等發(fā)酵產(chǎn)品。

本試驗旨在探討不同劑量的益生素對羅非魚生長性能、免疫力和抗嗜水氣單胞菌攻毒的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗設計與飼料

5個試驗組飼料等能（約16.8 kJ/g飼料），但不等氮（粗蛋白為29%或33%左右）（見表1）。對照1組飼料的粗蛋白含量約33%，對照2和3個試驗組飼料粗蛋白含量大約是29%。益生素（百泰A）由美國國際原料公司（St.Louis,MO,USA）提供。益生素（百泰A）分別按照0.4%、0.8%和1.2%的水平補充到對照2組的日糧中等量代替纖維素組成GA4、GA8、GA12三個試驗組日糧。

飼料原料經(jīng)粉碎后制成2.4 mm粒徑的顆粒飼料，然后把這些顆粒在室溫下烘干，置冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平

1.2 試驗魚及養(yǎng)殖條件

試驗在西南大學榮昌校區(qū)水產(chǎn)系實驗室進行。選用當年人工孵化的同一批魚，平均體重為（17.25±1.25）g。正式試驗前，羅非魚先置于2個池塘網(wǎng)箱中暫養(yǎng)，并分別以對照組1和2的飼料飽食投喂，使之逐漸適應試驗飼料。暫養(yǎng)2周后，挑選出體格健壯、規(guī)格一致的試驗魚隨機分為5組，分別投喂5種試驗飼料馴養(yǎng)。

每天早、中、晚投喂3次至飽食，投喂結束后30 min吸出池內(nèi)殘餌及糞便。試驗共進行56 d，試驗期間水溫（25.0±1.0）℃、pH 值（7.5±0.5）、溶氧量≥5 mg/l、氨氮濃度＜0.2 mg/l、余氯濃度＜0.1 mg/l。

1.3 檢測指標及分析方法

1.3.1 生長速度

以鮮重的羅非魚體重變化、增重率和特定生長率等表示生長速度。增重率(%)=(Wt-W0)/W0×100；特定生長率(%/d)=[(LnWt-LnW0)/d]×100，W0和 Wt分別表示養(yǎng)殖開始和結束時的羅非魚體重（g）。

1.3.2 飼料利用效率

以飼料系數(shù)和蛋白效率表示，飼料系數(shù)=投喂飼料量/魚體增重量；蛋白效率=(Wt-W0)/F×P%，F(xiàn)指飼料消耗量，P%指飼料蛋白質含量。

1.3.3 肌肉營養(yǎng)成分測定

試驗結束每處理組取12尾魚，取其背部肌肉進行肌肉營養(yǎng)成分分析。魚體肌肉常規(guī)成分分析均用AOAC方法。其中水分采用105℃烘箱干燥恒重法；粗蛋白質采用凱氏定氮法（總氮×6.25）；粗脂肪采用索氏抽提法（以乙醚為抽提液）；粗灰分采用馬福爐中灼燒法(550℃)。

1.3.4 形體指標

以肥滿度、內(nèi)臟指數(shù)（內(nèi)臟重與體重比）、肝胰臟指數(shù)（肝胰臟重與體重比）等指標對魚體形態(tài)進行評價。其中肥滿度=Wt/L3，L指對應體重的魚體長（cm）。

1.3.5 細菌攻毒

在以上所有測定結束后，從每桶隨機取5尾魚用來監(jiān)測嗜水氣單胞菌攻毒后各處理的非特異性免疫的能力。將魚麻醉后腹膜內(nèi)注射0.1 ml磷酸鹽緩沖液（PBS），PBS 中含有 4.0×107cfu/ml的嗜水氣單胞菌，嗜水氣單胞菌是在胰蛋白胨培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后用PBS洗脫。在攻毒期間，攻毒后24 h停飼，然后各組魚僅投喂對照組飼料，監(jiān)測死亡率21 d。

1.4 統(tǒng)計分析

試驗結果以平均值±標準差表示。所有試驗數(shù)據(jù)均通過SPSS11.5進行單因素方差分析，當有顯著差異時，進行Duncan's法多重比較。

2 結果

2.1 生長性能

與對照2組相比，益生素補充后，第4周和第8周羅非魚的體增重和飼料效率均顯著提高 (P＜0.05)，而其中GA8和GA12組與對照1組無顯著差異 (P＞0.05)(見表 2)。

表2 益生素的補充對羅非魚體增重和飼料系數(shù)的影響

2.2 肝體指數(shù)、臟體指數(shù)和肥滿度（見表3）

養(yǎng)殖8周后，GA8和GA12組的羅非魚肥滿度比對照2組顯著提高(P＜0.05)，而肝體指數(shù)則顯著降低(P＜0.05)，但均與對照 1 組無顯著差異(P＞0.05)。各組間臟體指數(shù)無顯著差異(見表3)。

表3 益生素的補充對羅非魚形體指標的影響

2.3 肌肉營養(yǎng)成分分析

各組間羅非魚肌肉水分、粗蛋白和粗脂肪含量沒有顯著差異(P＞0.05)(見表4)。GA8和GA12組羅非魚的肌肉灰分含量與對照2組相比有顯著降低（P＜0.05），與對照1組相比無顯著差異(P＞0.05)。

表4 益生素的補充對羅非魚肌肉營養(yǎng)成分的影響（%鮮重）

2.4 嗜水氣單胞菌攻毒試驗

經(jīng)過8周的養(yǎng)殖，利用嗜水氣單胞菌對羅非魚進行了攻毒并記錄攻毒后21 d內(nèi)的死亡情況（見圖1）。GA12組羅非魚攻毒后的成活率比各組均顯著提高 (P＜0.05)，GA4和GA8組的羅非魚成活率比對照2顯著提高 (P＜0.05)，與對照1相比無顯著差異 (P＞0.05)。

3 討論

益生素已經(jīng)被證實是對人類和動物有益的物質，最近幾年益生素被運用到水產(chǎn)動物中。以前的研究表明，益生素對雜交條紋鱸 (Morone chrysops×M.saxatilis)有較好的促生長和免疫功效 (Li等，2004、2005)。益生素是一種含有部分直溶性酵母、奶制品和酵母發(fā)酵代謝產(chǎn)物的混合物，并且含有復雜的碳水化合物，益生素能夠提高宿主腸道平衡(Gibson等，1995)，它含有10%乳糖，乳酸菌是一種有益菌，乳糖是它的底物。益生素能夠提高腸道有益菌平衡和機體免疫功能，但是是否它能抑制潛在的致病菌，這還沒有得到證實。Li等(2004、2005)觀察到在雜交條紋鱸飼料中添加1%和2%益生素能夠提高魚體生長性能。

本試驗結果表明，第4周和第8周的檢測結果發(fā)現(xiàn)，補充益生素后，羅非魚的增重率和飼料效率均顯著高于對照2組，與對照1組相比沒有顯著差異。3個益生素補充組的飼料粗蛋白含量與對照2組相同，均為29%，對照1組為33%?？梢?，益生素的補充提高了羅非魚對飼料蛋白的利用效率，使其增重效果和飼料利用效率達到33%蛋白含量的對照組。Li等(2004)以1%或2%益生素為補充日糧作為試驗飼料，經(jīng)過7周的試驗，相比用基礎日糧飼喂的魚來說，試驗組雜交條紋鱸幼魚的體增重和飼料轉化率明顯增加，同時發(fā)現(xiàn)益生素的補充還顯著增強了對鏈球菌的抵抗力。

益生素的補充還提高了羅非魚的肥滿度，降低其肝體指數(shù)，進一步表明益生素的促生長和保持魚體健康的功效。同時，益生素的補充對羅非魚肌肉蛋白和脂肪等主要營養(yǎng)成分的含量沒有顯著影響。這也與其本身的作用機制相一致。

嗜水氣單胞菌攻毒結果表明，1.2%益生素補充組的羅非魚21 d攻毒后成活率顯著高于各試驗組，0.4%和0.8%益生素補充組的羅非魚比對照2組顯著提高?？梢?，益生素的補充，可以顯著提高羅非魚的抗病能力。理論上講，富含源于酵母的寡糖、核苷酸和其它免疫刺激因子的益生素對羅非魚抗嗜水氣單胞菌攻毒有顯著的正面效果，但也有可能是該產(chǎn)品中的其它活性成分發(fā)揮了重要作用。

4 結語

綜上所述，試驗初步認為，飼料中補充1%左右的益生素，對羅非魚生長有促進作用，提高其對飼料的利用效率，同時增強其對疾病的抵抗能力，與高蛋白飼料的養(yǎng)殖效果無顯著差異。

23篇，刊略，需者可函索）