王秋一 姜玉聲 王吉橋

(大連水產(chǎn)學(xué)院農(nóng)業(yè)部海洋水產(chǎn)增養(yǎng)殖學(xué)與生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室 遼寧 大連 116023)

前 言:動(dòng)物體內(nèi)不能合成β-胡蘿卜素,只能由食物中攝取。人們一般認(rèn)為水產(chǎn)動(dòng)物金黃的色澤沒有任何營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,只是為了滿足人們的審美觀。其實(shí)在飼料中合理添加 β-胡蘿卜素對(duì)動(dòng)物和人都有一定的保健功能。單從表面來看,添加色素只是為了水產(chǎn)品表觀色澤鮮艷,以滿足人們的視覺需求。對(duì)于商品水產(chǎn)品來說,色素在其內(nèi)的吸收與其機(jī)體健康狀況緊密相關(guān),如果水產(chǎn)品生病或長(zhǎng)期處于不良環(huán)境的應(yīng)激下,會(huì)極大地影響色素的吸收,所表現(xiàn)的外表色彩與正常健康的產(chǎn)品有著明顯的差異。這樣通過色素在水產(chǎn)品外表上的體現(xiàn),讓消費(fèi)者非常容易分辨產(chǎn)品的質(zhì)量。另外目前飼用著色劑主要是天然和化學(xué)合成的β-胡蘿卜素及其衍生物。β-胡蘿卜素具有提高機(jī)體抗氧化能力、抗腫瘤、提高免疫力和繁殖力等重要功能,與動(dòng)物和人類的健康有著密切的關(guān)系,在人類疾病預(yù)防治療癌癥及慢性病等過程中起到非常重要的作用。

國(guó)外對(duì)海膽中 β-胡蘿卜素含量,代謝等研究較多[1-6],對(duì)海參研究較少,國(guó)內(nèi)更是幾乎空白。

探討投喂含不同水平β-胡蘿卜素飼料對(duì)仿刺參各個(gè)組織β-胡蘿卜素的吸收和沉積情況,飼料中添加不同劑量的 β-胡蘿卜素,飼養(yǎng)一個(gè)周期后對(duì)仿刺參腸、體壁、糞便中 β-胡蘿卜素進(jìn)行測(cè)定,為海參 β-胡蘿卜素的代謝及實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

721型可見分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司),電子天平,β-蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)于大連精細(xì)化工),旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,玻璃色譜柱,冷凍離心機(jī),10m l離心管,濾紙,針頭式 0.45μ m微孔濾膜(有機(jī)相),研缽,氧化鋁(100-200目),石油醚,丙酮,無水硫酸鈉(以上試劑均為分析純)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及養(yǎng)殖方式

實(shí)驗(yàn)用仿刺參購(gòu)于大連市周邊養(yǎng)殖場(chǎng),規(guī)格為 76～145g;使用自制自凈式循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)(參考本文第二章)養(yǎng)殖;實(shí)驗(yàn)共用海參 32頭,每 2頭置于一個(gè)小格中,使每格海參體重保持在210±10g。

本實(shí)驗(yàn),飼料中添加 β-胡蘿卜素分別為 30(C組)、60(B組)、90mg/kg(A組)飼料,并設(shè)對(duì)照組(D組);每組為 8頭海參。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品中 β-胡蘿卜素的提取

實(shí)驗(yàn)方法參考國(guó)標(biāo)及楊式華[7-13]等人的方法,步驟如下:

⑴稱取仿刺參組織,置于研缽中,加入石油醚 +丙酮(1+1)混合液 3m l反復(fù)研磨。⑵吸取上清液并置于10m l離心管中,使用冷凍離心機(jī)離心(7000r a/min,5min)。⑶離心后吸取上清液,余下液體及沉積物放回研缽中,加入石油醚 +丙酮(1+1)混合液繼續(xù)研磨,反復(fù) 2、3步驟 3-4次,直到研缽中上清液無色。⑷合并上清液,用濾紙過濾;濾紙中放 2g無水硫酸鈉。⑸過濾液放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸干。⑹用少量石油醚溶解旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中物質(zhì),吸出溶液。⑺氧化鋁濕法填裝玻璃色譜柱,將⑹中溶液倒入色譜柱并用石油醚淋洗。⑻收集最先洗出的橙色物質(zhì)于 2m l離心管中定容。⑼用分光光度計(jì)于 454n m波長(zhǎng)處測(cè)定。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確稱取β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品 12.5mg于燒杯中,用石油醚溶解并洗滌數(shù)次,置于 50m l容量瓶中,用石油醚定容,濃度為 250μ g/m l,-20℃儲(chǔ)存。備用,2個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。使用時(shí)可稀釋至成100μ g/m l。

分別吸取 β-胡蘿卜素使用液配置成濃度梯度 0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0μ g/m l。

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.1848x+0.0107,R 2=0.9975

1.3.3 數(shù)據(jù)處理

所有測(cè)定數(shù)據(jù)經(jīng)Excel和SPSS16.0軟件進(jìn)行計(jì)算分析進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)、方差分析和L S D多重比較,以 P＜0.01為差異極顯著,P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 樣品中 β-胡蘿卜素定性

用紫外 -可見分光光度計(jì)在 350n m～600n m波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,結(jié)果如圖 1、2所示?？煽闯?β-胡蘿卜素在 350n m～600n m波長(zhǎng)范圍內(nèi)有兩個(gè)特征吸收高峰,分別為 454n m波長(zhǎng)處(最大)和 478n m波長(zhǎng)處(次之)。

比較圖 1、圖 2,兩圖形狀相同,可以認(rèn)為提取的樣品為 β-胡蘿卜素。

2.2 回收率實(shí)驗(yàn)

分別取各濃度標(biāo)樣溶液各 5m l稀釋至 10m l,分別其吸收度,再測(cè)定按體積比為 1:1的標(biāo)準(zhǔn)溶液與混合液的吸收度,結(jié)果列入表 1。平均回收率 97.0%,R S D為 0.90%。

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2.3 添加不同劑量的 β-胡蘿卜素對(duì)仿刺參各組織及糞便中 β-胡蘿卜素含量影響

飼料中分別添加30(C組)、60(B組)、90(A組)mg/kg,仿刺參腸中 β-胡蘿卜素含量如圖 3。A組仿刺參性腺中 β-胡蘿卜素含量最高(42.67μ g/g),B組次之(12.07μ g/g),對(duì)照組第三(11.76μ g/g),C組最低(10.45μ g/g),A組極顯著高于其他組(P＜0.010),其他 3組相差不明顯(P＞0.050)。

四組仿刺參體壁中β-胡蘿卜素含量如圖4。B組仿刺參體壁中 β-胡蘿卜素含量最高(1.61μ g/g),A組次之(1.58μ g/g),對(duì)照組第三(1.55μ g/g),C組最低(1.54μ g/g),四組差異均不顯著((P＞0.050)。

四組仿刺參糞便中 β-胡蘿卜素含量如圖 5。A組仿刺參糞便中 β-胡蘿卜素含量最高(16.37μ g/g),B組次之(13.50μ g/g),C照組第三 (7.48μ g/g),D組最低 (4.37μ g/g),而高劑量β-胡蘿卜素添加組極顯著高于對(duì)照組(P＜0.010);并且四組仿刺參糞便中 β-胡蘿卜素含量與飼料中添加 β-胡蘿卜素劑量有良好的相關(guān)性,R 2=0.9795。

3 討論

β-胡蘿卜素作為維生素 A原,動(dòng)物體只能通過攝食來取得。對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生理功能主要有:①抗紫外輻射的保護(hù)作用;②作為受精激素,改善卵質(zhì);③提高免疫,促進(jìn)生長(zhǎng)和成熟;④增強(qiáng)對(duì)高氨和低氧的耐受性;⑤作為維生素 A的前體;⑥水生動(dòng)物的強(qiáng)抗氧化劑和脂質(zhì)過氧化的抑制劑;⑦在魚的肌肉生長(zhǎng)和皮膚中沉積作為著色劑,在繁殖季節(jié)成熟的雄魚將類胡蘿卜素集中到皮膚上形成第二性征—婚姻色,而雌魚則將類胡蘿卜素集中在卵巢形成幼體的保護(hù)色。

國(guó)外對(duì)同為棘皮動(dòng)物的海膽在 β-胡蘿卜素作用方面做了很多研究[14-16],但國(guó)內(nèi)外鮮有對(duì) β-胡蘿卜素對(duì)海參生理、生化及代謝等方面的報(bào)道。本文對(duì)攝食不同劑量 β-胡蘿卜素的仿刺參性腺、腸、體壁及糞便分別進(jìn)行了取樣、測(cè)定 β-胡蘿卜素的含量。

本實(shí)驗(yàn)飼料中分別添加 30(C組)、60(B組)、90(A組)mg/kg的 β-胡蘿卜素。A組仿刺參腸中β-胡蘿卜素含量最高(42.67μ g/g),B組次之(12.07μ g/g),對(duì)照組第三(11.76μ g/g),C組最低(10.45μ g/g),A組極顯著高于其他組(P＜0.010),其他 3組相差不明顯(P＞0.050),可以看出高劑量 β-胡蘿卜素添加時(shí)仿刺參腸中可大量?jī)?chǔ)存 β-胡蘿卜素。體壁中,B組仿刺參 β-胡蘿卜素含量最高(1.61μ g/g),A組次之(1.58μ g/g),對(duì)照組第三(1.55μ g/g),C組最低(1.54μ g/g),四組差異均不顯著((P＞0.050),可知 β-胡蘿卜素對(duì)仿刺參體壁中 β-胡蘿卜素沒有顯著性影響。糞便中 β-胡蘿卜素含量:A組 ＞B組 ＞C組 ＞D組,且與飼料中 β-胡蘿卜素添加量有良好的相關(guān)性,說明仿刺參的 β-胡蘿卜素?cái)z入量與排泄量正相關(guān),即攝入多,排泄多;攝入少,排泄少,這有可能是海參對(duì) β-胡蘿卜素吸收效率較低造成。

略)