王 穎 霍淑杰 劉玉潔

急性心肌梗死屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹”、“真心痛”范疇。目前，中醫(yī)藥作為急性冠脈痙攣、心臟介人術(shù)后的后續(xù)治療手段正逐漸得到廣泛應(yīng)用。小陷胸湯是臨床常用方，具有清熱化痰、寬胸散結(jié)的功效。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察小陷胸湯加味方預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷髓過(guò)氧化物酶（MPO）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（CRP）的干預(yù)，探討其在心肌缺血再灌注中的作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）試劑與儀器：MPO試劑盒（南京建成生物工程研究所）、TNF-α（解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免所）、CRP測(cè)定試劑盒（上?？迫A生物工程股份有限公司）。臺(tái)式高速離心機(jī)（TDL-4，上海安亭科學(xué)儀器廠）、721分光光度計(jì)（江蘇無(wú)錫柯達(dá)智能儀器廠）、電子稱、電熱恒溫水浴箱（常州國(guó)華電器有限公司）、ECG-6511單導(dǎo)心電圖機(jī)（上海匯豐醫(yī)療器械有限公司）。（2）動(dòng)物：新西蘭大耳白兔，體質(zhì)量2～2.5kg/只，雄性，屏障環(huán)境喂養(yǎng)，自由進(jìn)食，由華北煤炭醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證編號(hào)：scxk（京）2006-0005。（3）藥物：小陷胸湯加味方，組方：瓜蔞 30g，半夏 12g，黃連 6g，丹參 15g，海藻 10g，大黃 5g。采用廣東一方制藥有限公司生產(chǎn)的中藥配方顆粒（相當(dāng)于生藥飲片劑量）。

1.2 分組及造模 （1）動(dòng)物分組：32只兔隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、小陷胸湯加味方低劑量組、小陷胸湯加味方高劑量組，每組8只。（2）給藥方法：根據(jù)人兔臨床用藥劑量換算公式[1]換算成兔用藥量，將中藥顆粒用生理鹽水混勻，按小陷胸湯加味方高劑量 6.32g/（kg·d），小陷胸湯加味方低劑量 3.16g/（kg·d），于術(shù)前5d灌胃給藥。假手術(shù)組及模型組給予等量生理鹽水術(shù)前5d灌胃。（3）造模方法：取兔，稱重。用20%氨基甲酸乙酯按5mL/kg腹腔注射麻醉，仰臥，固定，8%硫化鈉進(jìn)行四肢及胸部脫毛。四肢接標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。沿胸骨正中線剪開(kāi)皮膚，沿胸骨左緣剪斷3～5肋軟骨，小心剪開(kāi)心包，切勿將胸膜破壞，開(kāi)胸器打開(kāi)切口，暴露心臟，用浸生理鹽水的棉棒旋轉(zhuǎn)心臟，在左心耳下緣0.5cm處尋找冠狀動(dòng)脈，以5/0號(hào)線在左心耳下方2～3cm處用小圓針（3/8，3×10規(guī)格）穿過(guò)靜脈下心肌，連同心大靜脈，打雙活結(jié)結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，30min后打開(kāi)結(jié)扎線實(shí)現(xiàn)再灌注，再灌注120min后結(jié)束實(shí)驗(yàn)。假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎，以ST段抬高、缺血區(qū)域心肌顏色變暗為模型成功標(biāo)志。成功標(biāo)準(zhǔn)：ST段抬高，T波倒置；結(jié)扎區(qū)以下心肌顏色變成暗紅色。失敗標(biāo)準(zhǔn)：心電圖無(wú)變化，心肌顏色無(wú)變化，家兔死亡。（4）取材及測(cè)定：灌注結(jié)束時(shí)于右心房取血5mL，按照說(shuō)明書方法分離血清，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。免疫組織化學(xué)及生化法測(cè)定MPO，放射免疫法測(cè)定TNF-α，免疫比濁法檢測(cè)CRP。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，迅速取出心臟，以結(jié)扎線為標(biāo)準(zhǔn)，剪取缺血區(qū)左心室前壁心肌1g，按說(shuō)明書方法制作成10%組織勻漿，各指標(biāo)均嚴(yán)格按照說(shuō)明書方法檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用LSD法。

2 結(jié)果

2.1 各組MPO活性比較 見(jiàn)表1?？梢?jiàn)模型組、小陷胸湯加味方低、高劑量組MPO活性均較假手術(shù)組升高（P＜0.01），均比模型組MPO活性降低（P＜0.05或0.01），低、高劑量組之間相近（P ＞ 0.05）。

2.2 各組TNF-α水平比較 見(jiàn)表1?？梢?jiàn)模型組、小陷胸湯加味方低、高劑量組TNF-α水平均較假手術(shù)組升高（P＜0.01），低、高劑量組均比模型組TNF-α水平降低（P ＜0.05），低、高劑量組相近（P＞0.05）。

2.3 各組CRP水平比較 見(jiàn)表1?？梢?jiàn)模型組，小陷胸湯加味方低、高劑量組CRP水平均較假手術(shù)組升高（P＜0.01），均比模型組CRP水平降低（P＜0.05），低、高劑量組相近（P＞0.05）。

表1 各組MPO活性、TNF-α及CRP水平比較

3 討論

心肌缺血最有效的治療措施是恢復(fù)血液供應(yīng)。缺血后恢復(fù)血流供應(yīng)的過(guò)程稱為再灌注。再灌注可使缺血心肌損傷加重[2]，即產(chǎn)生心肌缺血再灌注損傷。心肌缺血再灌注損傷有多種因素參與?；A(chǔ)研究表明MPO、TNF-α及CRP參與了心肌缺血再灌注損傷的發(fā)生[3～7]。

心肌缺血再灌注損傷，屬于中醫(yī)學(xué)“胸痹、心痛”、“真心痛”范疇。早在《內(nèi)經(jīng)》時(shí)代，醫(yī)家就已提出胸痹的重證“真心痛”以“陰氣在中”為病機(jī)。緩解期多見(jiàn)氣血陰陽(yáng)虛損，發(fā)作期則以瘀血、痰濁、氣滯、寒凝為主?！秱摗分兄赋觥靶〗Y(jié)胸病，正在心下，按之則痛，脈浮滑者，小陷胸湯主之”；程扶生在《古今名醫(yī)方論》中指出“以半夏之辛散之，黃連之苦瀉之，栝蔞之苦潤(rùn)滌之，所以除熱散結(jié)于胸中也”。方中瓜蔞為君，清熱化痰，通胸膈之痹；黃連為臣，瀉熱降火，半夏化痰降逆，二藥相配，辛開(kāi)苦降，化痰散結(jié)，通暢氣機(jī)。佐以丹參涼血化瘀，輔以海藻以散頑結(jié)，使大黃既清熱解毒又化瘀散結(jié)，使熱毒從大便而出，謂邪有出路也。藥理研究也表明，丹參可通過(guò)多種途徑減輕心肌缺血再灌注損傷[8，9]。臨床中也觀察到許多冠心病患者發(fā)病時(shí)或冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈內(nèi)成形術(shù)后常常出現(xiàn)胸痛、胸悶、憋氣、發(fā)熱、心悸、煩躁不安、大便不暢，舌質(zhì)暗紅，舌苔黃膩、或黃燥，脈象多滑數(shù)、弦數(shù)等癥，在使用小陷胸湯加味方后冠心病患者癥狀和理化指標(biāo)得到有效改善，收到滿意療效[10]。

MPO是中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒產(chǎn)生的一種重要的過(guò)氧化物酶，主要存在于嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中[10]。MPO也是一種血紅素蛋白，可作為中性粒細(xì)胞的特異性標(biāo)記物[12]，即一種新的心肌標(biāo)志物，所以用藥物治療來(lái)盡量減輕再灌注損傷，部分依賴于減少中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)。在臨床中證實(shí)急性心肌梗死患者血漿中TNF-α含量在發(fā)病早期即顯著升高[13]，而再灌注是TNF-α升高的主要原因[14]。大量研究表明，心肌缺血能夠引起急性炎癥反應(yīng)，在再灌注后進(jìn)一步加劇，導(dǎo)致不可逆的細(xì)胞損傷。CRP是人體非特異性炎癥的最敏感的標(biāo)志物之一，是一種γ球蛋白，在正常人血清中的含量極微，一般少于10mg/L，但在急性炎癥反應(yīng)階段其含量可迅速增加1000多倍，血清CRP含量的高低與疾病的炎癥反應(yīng)程度關(guān)系密切[15]。本實(shí)驗(yàn)提示，小陷胸湯加味方可降低兔心肌缺血再灌注MPO的活性及TNF-α、CRP的含量。這可能是通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)達(dá)到保護(hù)缺血再灌注心肌的作用?？梢?jiàn)小陷胸湯加味方對(duì)心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。

MPO、TNF-α及CRP在心肌缺血再灌注過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，引起越來(lái)越多的關(guān)注，已經(jīng)逐漸成為治療的新途徑。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小陷胸湯加味方預(yù)處理可以通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)而起到保護(hù)缺血再灌注心肌的作用，但心肌缺血再灌注的確切發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，因此該藥發(fā)揮作用的其他途徑尚需進(jìn)一步研究。

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