張慧英

（上海市松江區(qū)食用農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)督檢測(cè)中心，上海 松江 201611）

牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）和豬瘟病毒（CSFV）同屬黃病毒科瘟病毒屬成員。BVDV除侵害牛引起牛病毒性腹瀉、急性或慢性黏膜病、免疫耐受和持續(xù)性感染、免疫抑制和母畜流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎外，還可感染豬、綿羊、山羊以及其他反芻動(dòng)物。豬感染BVDV不表現(xiàn)牛病毒性腹瀉的臨床癥狀而呈亞臨床感染，其癥狀和病理變化類似溫和型豬瘟，并可產(chǎn)生豬瘟病毒的交叉中和抗體，這給常規(guī)的血清學(xué)診斷帶來(lái)一定困難，同時(shí)豬感染BVDV產(chǎn)生的抗BVDV抗體對(duì)豬瘟病毒有一定的抑制作用，因此豬感染BVDV后對(duì)豬瘟疫苗的免疫有干擾作用，會(huì)降低豬瘟疫苗的免疫效果。為了解本地區(qū)豬源牛病毒性腹瀉病毒的感染狀況及其對(duì)豬瘟免疫豬體內(nèi)抗體水平的影響，我們進(jìn)行了本次調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清 來(lái)自本區(qū)域13個(gè)鎮(zhèn)（街道）9個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)、60戶散戶的368份豬瘟免疫豬血清樣本。

1.1.2 檢測(cè)試劑 美國(guó)IDEXX牛病毒性腹瀉病病毒抗原檢測(cè)試劑盒和豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司，批號(hào)分別為43810-Q381、43220-R941。豬瘟正向間接血凝診斷液、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清及稀釋液均為中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào)：081201。

1.2 方法 牛病毒性腹瀉病病毒抗原檢測(cè)及豬瘟病毒抗體檢測(cè)參照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；豬瘟免疫抗體檢測(cè)采用正向間接血凝試驗(yàn)的方法。

2 結(jié)果

2.1 368份被檢豬血清樣品中，牛病毒性腹瀉病病毒抗原檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性的有7份，陰性有361份，總檢出率1.90%，詳見(jiàn)表1、表2。

表1 牛病毒性腹瀉病病毒抗原檢測(cè)結(jié)果

表2 牛病毒性腹瀉感染分類匯總表

2.2 牛病毒性腹瀉病病毒抗原檢測(cè)呈陽(yáng)性的7份豬血清經(jīng)美國(guó)IDEXX豬瘟病毒抗體檢測(cè)，結(jié)果有3份呈陽(yáng)性，4份呈陰性。經(jīng)豬瘟IHA檢測(cè)（根據(jù)上海市豬瘟免疫抗體效價(jià)≥1∶64為判定合格標(biāo)準(zhǔn)）其中4份合格，3份不合格，結(jié)果詳見(jiàn)表3。兩種方法的檢測(cè)結(jié)果符合率為71%。

表3 豬瘟抗體檢測(cè)結(jié)果

3 分析與討論

3.1 對(duì)于畜群BVDV感染可通過(guò)單克隆抗體ELISA技術(shù)、RT-PCR法等進(jìn)行診斷，但目前國(guó)內(nèi)對(duì)畜群中BVDV感染方面的研究相對(duì)較少。王新平等對(duì)內(nèi)蒙古、吉林、寧夏等不同地區(qū)的牛、羊、鹿進(jìn)行了病原學(xué)調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)感染率分別為16.5%～89.0%、14.6%～83.3%、19.6%～44.4%。吳文輝等對(duì)2007年1月～2008年12月期間上海市各區(qū)縣送檢的184份豬場(chǎng)樣品進(jìn)行BVDV ELISA法檢測(cè)，其檢出率高達(dá)50%。本次調(diào)查區(qū)域的368份豬血清樣品中，牛病毒性腹瀉病毒感染率為1.90%，相對(duì)而言感染率較低，其中規(guī)模場(chǎng)的感染率2.47%，散養(yǎng)豬感染率1.46%。通過(guò)已有的報(bào)道可知，在我國(guó)畜群中BVDV感染情況已比較普遍，應(yīng)引起獸醫(yī)工作者的重視。

3.2 由于CSFV和BVDV同屬黃病毒科瘟病毒屬，兩者在病毒粒子結(jié)構(gòu)、基因組結(jié)構(gòu)和抗原特性等方面均很接近，在免疫學(xué)上存在廣泛的交叉性。CSFV和BVDV能在豬體和牛體之間交互感染。Fernelius等（1973）首次從自然感染發(fā)病的豬體內(nèi)分離到BVDV，從而在病原學(xué)上證明BVDV可以自然感染豬。豬感染BVDV后可能不表現(xiàn)出臨床癥狀，呈持續(xù)性感染，以溫和型、母豬繁殖障礙及新生仔豬死亡的豬瘟為多見(jiàn)，且常發(fā)生于“免疫”豬群。目前出現(xiàn)的這種非典型或溫和型豬瘟與豬BVDV感染，單憑臨床癥狀、病理變化及常規(guī)的血清學(xué)方法是難以鑒別的，這給豬病的診斷和防治帶來(lái)新的難題。

3.3 對(duì)豬瘟免疫抗體效價(jià)的測(cè)定有多種方法，常見(jiàn)的有ELISA法和IHA法。ELISA法是針對(duì)豬瘟結(jié)構(gòu)蛋白E2（不含BVDV基因片段）建立的血清學(xué)抗體檢測(cè)方法，能區(qū)分出BVDV、CSFV抗體，特異性強(qiáng)，但成本高；IHA法成本低，但無(wú)法區(qū)分兩種抗體。本次試驗(yàn)對(duì)7份BVDV陽(yáng)性豬血清分別采用ELISA法和IHA法來(lái)檢測(cè)豬瘟免疫抗體，結(jié)果符合率為71%,說(shuō)明常用的兩種方法在豬瘟免疫抗體檢測(cè)中可能存在誤判的問(wèn)題，采用何種更合理的抗體檢測(cè)方法有待進(jìn)一步探討。

3.4 對(duì)豬瘟免疫失敗原因的探討，除了從免疫程序、疫苗質(zhì)量、免疫劑量、病毒變異等方面去分析外，BVDV的感染問(wèn)題也應(yīng)引起人們的重視。持續(xù)感染的豬在接種豬瘟疫苗后往往表現(xiàn)出免疫無(wú)應(yīng)答狀態(tài)，導(dǎo)致免疫失敗，免疫率低下。目前認(rèn)為牛是豬感染BVDV的主要傳播來(lái)源，尤其是BVDV感染耐過(guò)牛已形成免疫耐受，可終生向外界排出大量感染性病毒。如給豬喂乳清和牛奶，豬與牛病毒性腹瀉病毒牛接觸，人員和工具流動(dòng)往來(lái)于豬場(chǎng)和牛場(chǎng)之間等，均可造成豬群感染牛病毒性腹瀉病毒。另外，使用污染的牛組織制造的生物制品或直接被BVDV污染的疫苗，都存在著B(niǎo)VDV感染的可能。Wensvoort等（1988）曾報(bào)道，荷蘭使用有BVDV污染的疫苗而引起仔豬BVDV的先天性感染，并出現(xiàn)了類似豬瘟的癥狀。因此,在疫苗生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)加強(qiáng)血清及其相關(guān)制品、所用細(xì)胞系BVDV的檢測(cè)，以防止疫苗污染造成損失；同時(shí)豬場(chǎng)應(yīng)該禁止用牛奶或牛廢棄物等作為豬的飼料添加劑。通過(guò)檢測(cè)淘汰帶毒豬,嚴(yán)禁豬與牛接觸或混養(yǎng),選擇無(wú)BVDV污染風(fēng)險(xiǎn)的豬瘟疫苗免疫等措施可以預(yù)防和控制豬群的BVDV感染。

[1]王新平，涂長(zhǎng)春，李紅衛(wèi)，等.從豬瘟病料中檢出牛病毒性腹瀉病毒[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1996，（4）：341-345.

[2]吳文輝，余紅梅，劉婧怡.對(duì)生豬感染BVDV的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2009，（4）：25.

[3]Fernelius A L，AmtowerW C，Malmquist W A，et al.Bovine viral diarrhea virus in swine:chracteristics of virus recovered from naturally and experimentally infected swine[J].Can J Comp Med.，1973，37：96-102.

[4]Wensvoort G，Terpstra C.Bovine viral diarrhea virus infection in piglets born to sow vaccinated against swine fever with a contaminated vaccine[J].Res Vet Sci.，1988，45：143-148.