劉敏，付輝政*，萬凱化（.江西護理職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江西南昌005；.中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點實驗室，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，北京00050；.江西省食品藥品檢驗所，江西南昌0046）

吳茱萸鑒別（2）方法的改進并應(yīng)用HPLC法對該法進行定性驗證

劉敏1，付輝政2*，萬凱化3
（1.江西護理職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江西南昌330025；2.中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點實驗室，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，北京100050；3.江西省食品藥品檢驗所，江西南昌330046）

吳茱萸；化學(xué)成分；HPLC法；薄層鑒別；定性實驗

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.、石虎Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.officinalis（Dode）Huang或疏毛吳茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟果實。具散寒止痛，降逆止嘔，助陽止瀉功效。用于厥陰頭痛，寒疝腹痛，寒濕腳氣，經(jīng)行腹痛，脘腹脹痛，嘔吐吞酸，五更泄瀉，外治口瘡、高血壓［1］。其主要成份為吳茱萸堿、吳茱萸次堿［2-3］。筆者在對吳茱萸不同采收時期其吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量變化時發(fā)現(xiàn)，吳茱萸干燥幼果中不含吳茱萸堿和吳茱萸次堿。但是按《中國藥典》［1］（2005年版一部P118）所載吳茱萸鑒別（2）方法對吳茱萸干燥幼果和干燥近成熟果實進行鑒別時，出現(xiàn)假陽性，對檢視起干擾，且該鑒別方法繁瑣、費時。另外該標(biāo)準(zhǔn)中沒有對吳茱萸堿進行定性或定量。為此，本實驗對《中國藥典》［1］（2005年版一部P118）所載吳茱萸鑒別（2）方法進行了改進，同時對吳茱萸、吳茱萸堿、吳茱萸次堿進行鑒別，色譜結(jié)果令人滿意。并應(yīng)用高效液相色譜法對該法進行了定性驗證。使修改后標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果更準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent1100高效液相色譜系統(tǒng)；自動進樣器；VWD檢測器；Agilent 1100化學(xué)工作站；254 nm紫外分析儀（上?？扑嚬鈱W(xué)儀器廠）；吳茱萸（110715-200412）、吳茱萸堿（110802-200504）、吳茱萸次堿（110801-200505）均由中國藥品生物制品檢定所提供；薄層板：硅膠GF254（10 cm／20 cm）批號20050507均由青島海洋化工廠分廠提供；試劑：均為分析純；樣品：吳茱萸1（吳茱萸幼果）和吳茱萸2（吳茱萸近成熟果實）（經(jīng)江西省食品藥品檢驗所中藥室袁桂平副主任藥師鑒定為蕓香科植物吳茱萸，現(xiàn)存放在江西省食品藥品檢驗所標(biāo)本室）。

2 薄層鑒別實驗方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)方法取吳茱萸1和2粉末各0.4 g，分別加乙醇10mL，靜置30min，超聲處理30min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取吳茱萸對照藥材0.4 g，同法制成對照藥材溶液。再取吳茱萸次堿對照品加乙醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述4種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19∶5∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。吳茱萸1和吳茱萸2供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2.2 改進方法取吳茱萸1和2粉末各0.4 g，分別加乙醇10mL，靜置30min，超聲處理30min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取吳茱萸對照藥材0.4 g，同法制成對照藥材溶液。再取吳茱萸堿和吳茱萸次堿對照品加乙醇分別制成每1 mL含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述5種溶液各2μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（4∶1∶0.2∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。吳茱萸1供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，未顯相同顏色的斑點。吳茱萸2供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。

3 高效液相色譜法定性驗證試驗與結(jié)果

3.1 色譜條件色譜柱：Diamonsil C18色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.04%辛烷磺酸鈉溶液（43∶57）；流速：1mL／min；檢測波長：225 nm；柱溫：25℃；理論板數(shù)：按吳茱萸次堿峰計算不低于3 000。

3.2 吳茱萸1供試品溶液的制備取吳茱萸1粉末（過三號篩）約0.2 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入乙醇約90 mL，浸泡1 h，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）40 min，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。吳茱萸2供試品溶液的制備：取吳茱萸2粉末（過三號篩）約0.2 g，精密稱定，置100mL量瓶中，加入乙醇約90 mL，浸泡1 h，超聲處理（功率250W，頻率33 kHz）40 min，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3 吳茱萸堿對照品溶液的制備分別精密稱取吳茱萸堿對照品9.85 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

吳茱萸次堿對照品溶液的制備分別精密稱取吳茱萸次堿對照品9.62 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 測定法分別精密吸取上述兩種對照品溶液與兩種供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果見高效液相色譜圖1。

圖1 高效液相色譜圖

由高效液相色譜圖1可知。吳茱萸1不含吳茱萸堿和吳茱萸次堿，吳茱萸2含吳茱萸堿和吳茱萸次堿，但是在薄層色譜圖1中吳茱萸1在吳茱萸次堿相應(yīng)的位置上有一與吳茱萸次堿顏色相同的斑點，在與吳茱萸堿相應(yīng)的位置上有一與吳茱萸堿顏色不相同的斑點。表明按標(biāo)準(zhǔn)方法檢驗，可能出現(xiàn)假陽性。從薄層色譜圖1顯示出改進方法所顯示沒有出現(xiàn)假陽性，且斑點分離效果好，原標(biāo)準(zhǔn)只能檢出吳茱萸堿，改進后吳茱萸堿、吳茱萸次堿兩種成份均能檢出，在254 nm紫外燈光下熒光斑點明顯，結(jié)果明確。我們又取不同批次的樣品3批，按改進方法進行多次實驗，樣品溶液與對照品溶液所顯示斑點位置一致，且結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

4 討論

4.1 改進方法將硅膠G薄層板改為硅膠GF254薄層板，展開劑的比例由（19∶5∶1∶1）改為（4∶1∶0.2∶0.2）起到了能同時快速檢出4種成份。在254 nm紫外光燈下4個對照藥材熒光斑點和2個對照品熒光斑點顯色清晰，分離完全，易于辨認，避免了用標(biāo)準(zhǔn)方法試驗可能出現(xiàn)的假陽性干擾而帶來了影響，重現(xiàn)性好，結(jié)果令人滿意。

4.2 吳茱萸1樣品在與吳茱萸次堿相應(yīng)的位置上出現(xiàn)假陽性，是由于吳茱萸中存在與吳茱萸次堿極性相近且具有相同母核的吲哚類生物堿。

4.3 用高效液相色譜法對改進方法進行驗證，增加了方法的準(zhǔn)確性和可靠性。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部.中國藥典（一部）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：118.

［2］Hyun SL.Inhibition of angiotensin receptor binding by quinolone alkaloids from evodia rutaecarpa［J］.Phytotherapy Res，1998，12（3）：212.

［3］Rang WQ，Du YH，Hu CP，et al.Protective effects of calcitonin gene-related peptide-mediated evodiamine on guinea-pig cardiac anaphylaxis［J］.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol，2003，367（3）：306-309.

R284.1

A

1007－4813（2010）05－0779－02

2010－04－27）

劉敏（1980－），女，碩士研究生，講師。研究方向：藥物化學(xué)。

*通信作者：付輝政，Tel：13807048618。