楊 欣,王 薇,鄭春梅,曹 霞,鄒曉娉,范 蕾,郭 麗

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

血管內(nèi)皮功能障礙是動(dòng)脈粥樣硬化(AS)等疾病早期的重要表現(xiàn)。對(duì)于內(nèi)皮功能在體內(nèi)的檢測(cè)方法研究包括血管造影、血管內(nèi)超聲等,本研究運(yùn)用高頻超聲對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化不同時(shí)期兔檢測(cè)左髂外動(dòng)脈血管內(nèi)皮功能,同時(shí)進(jìn)行病理學(xué)檢查。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物模型的制備

日本大耳白兔35只,3～ 4個(gè)月齡,雌雄不限,在相同的實(shí)驗(yàn)條件下飼養(yǎng),經(jīng) 1周適應(yīng)性飼養(yǎng)后隨機(jī)分為：A組,對(duì)照組(10只),喂正常顆粒飼料;B組,動(dòng)脈粥樣硬化模型組(25只 ),喂養(yǎng)混合飼料(含 1%膽固醇+2%蛋黃粉+5%豬油)。各組兔每天飼料量約150g。動(dòng)物單籠飼養(yǎng),自由飲水,喂養(yǎng)至16周。

1.2 試劑與儀器

使用 Logiq 9彩色超聲診斷儀,線陣探頭,頻率12M Hz;全自動(dòng)生化分析儀,膽固醇,硝酸甘油等。

1.3 髂外動(dòng)脈血管超聲檢測(cè)方法[1]

兔肌注速眠新 0.15mL/kg麻醉后,仰臥位固定,下肢外展,剪除局部被毛 ,涂抹耦合劑 ,連接心電圖。于兔左腹股溝靠腹側(cè)縱行檢查左髂外動(dòng)脈,于髂總動(dòng)脈分叉后至少獲得長軸1.5cm血管顯像后,整個(gè)過程中探頭位置保持不變。于 T波末測(cè)定其內(nèi)徑(D),D為前后壁內(nèi)膜管腔界面間的垂直距離。先測(cè)量基礎(chǔ)狀態(tài)內(nèi)徑(D0),然后使用止血帶扎住兔左下肢中下段,加壓至280mmHg,持續(xù)5min后迅速放氣,放氣后30s～ 1min內(nèi)記錄左髂外動(dòng)脈圖像。動(dòng)物休息15min后,舌下滴服硝酸甘油0.125mg/kg,2～ 3min內(nèi)記錄左髂外動(dòng)脈圖像,所有結(jié)果記錄在磁光盤中,以備分析。測(cè)量時(shí)取三次測(cè)定的平均值,放氣后內(nèi)徑為 D1,血管內(nèi)皮依賴性舒張功能(EDD)=(D1-D0)/D0×100%。滴服硝酸甘油后內(nèi)徑為 D2,血管內(nèi)皮非依賴性舒張功能(NEDD)= (D2-D0)/D0×100%。

1.4 血脂測(cè)定及病理學(xué)檢查

采靜脈血,用酶法在全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)血清總膽固醇 (TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)。取出髂外動(dòng)脈做 HE染色光鏡檢查。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組兔血脂結(jié)果

見表 1。

表1 各組兔血脂結(jié)果 (±s,mmol/L)

表1 各組兔血脂結(jié)果 (±s,mmol/L)

注：與 A組比較,aP ＜0.05。

代謝指標(biāo) 組別 4周 8周 12周 16周T C A組 1.49±0.47 1.68±0.59 1.21±0.33 1.45±0.36 B組 13.55±3.58a 34.44±7.35a 33.81±5.57a 35.56±6.31a HDL-C A組 0.72±0.14 0.74±0.21 0.77±0.17 0.80±0.29 B組 1.68±0.41a 2.64±0.33a 3.81±1.68a 3.99±1.20a LDL-C A組 0.26±0.11 0.34±0.08 0.30±0.06 0.35±0.12 B組 10.65±3.52a 15.78±2.74a 18.10±4.36a 21.65±3.48a

2.2 各組兔髂外動(dòng)脈 EDD及 NEDD

見表2。

表2 各組兔髂外動(dòng)脈 EDD及 NEDD(±s,%)

表2 各組兔髂外動(dòng)脈 EDD及 NEDD(±s,%)

注：與 A組比較,aP ＜0.05。

檢測(cè)指標(biāo) 組別 4周 8周 12周 16周EDD A組 14.66±2.33 15.09±1.99 15.52±2.08 15.12±2.61 B組 9.17±1.02a 4.92±0.81a 1.19±0.47a 1.07±0.26a NEDD A組 11.02±2.36 10.96±1.79 9.89±1.88 10.55±2.03 B組 11.70±2.55 9.92±2.31 6.18±1.44a 4.22±0.77a

2.3 病理形態(tài)學(xué)改變

肉眼觀察可見 AS組兔髂外動(dòng)脈管壁有可見大量黃色脂樣斑塊凸向管腔,而正常對(duì)照組兔動(dòng)脈內(nèi)壁光滑。光鏡觀察可見 AS組血管內(nèi)膜明顯增厚,管壁彌漫性隆起,并可見大量泡沫細(xì)胞,中膜平滑肌細(xì)胞增生明顯。而正常對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)完整,細(xì)胞排列有序,內(nèi)彈力膜層結(jié)構(gòu)清晰,管壁厚度均勻。

3 討論

血管內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋于血管內(nèi)表面的一層單層連續(xù)細(xì)胞,有血管屏障等重要生物學(xué)功能。高血脂可直接或間接損傷動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致內(nèi)皮功能的紊亂,而內(nèi)皮功能紊亂通過分泌多種致炎細(xì)胞因子而誘發(fā)動(dòng)脈內(nèi)膜的炎癥反應(yīng)[2]。內(nèi)皮功能失調(diào)是 AS病理過程的一個(gè)早期改變[3]。早期檢測(cè)內(nèi)皮功能損害有十分重要的臨床意義。自從 Celermajer開創(chuàng)性地設(shè)計(jì)了彩色多普勒超聲測(cè)定動(dòng)脈內(nèi)徑變化來評(píng)價(jià) EDD和NEDD以來,對(duì)許多疾病的內(nèi)皮功能做了許多相關(guān)研究[4,5]。超聲檢測(cè)內(nèi)皮功能的優(yōu)越性在于操作簡(jiǎn)單、無創(chuàng)、準(zhǔn)確、重復(fù)性好等。本研究應(yīng)用高頻超聲檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化血管內(nèi)皮功能,觀測(cè)內(nèi)皮功能隨 AS病變進(jìn)展的變化。結(jié)果顯示,兔喂養(yǎng)膽固醇后血脂升高,TC、HDL和 LDL隨喂養(yǎng)時(shí)間的延長而升高。隨著膽固醇喂養(yǎng)時(shí)間的延長,AS組4周時(shí) EDD出現(xiàn)損傷,而 NEDD在4周、8周時(shí)與對(duì)照組間無明顯差異,12周后才出現(xiàn)減低,EDD的損傷出現(xiàn)早于 N EDD損傷,這與以往報(bào)道一致[6]。說明內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙的出現(xiàn)先于平滑肌細(xì)胞功能障礙,并且隨著膽固醇喂養(yǎng)時(shí)間的延長,病變的逐漸加重,EDD和 NEDD的損傷均逐漸加重。因而,應(yīng)用高頻超聲檢測(cè)外周血管內(nèi)皮功能是操作簡(jiǎn)單,無創(chuàng),能夠動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)藥物干預(yù)對(duì)內(nèi)皮功能影響的良好方法,并且可以用來尋找損害內(nèi)皮功能的各種危險(xiǎn)因素及防治策略。

[1]楊欣,馬春燕,任衛(wèi)東.高分辨力超聲評(píng)價(jià)辛伐他汀對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔血管內(nèi)皮功能的影響及與 VCAM-1表達(dá)的關(guān)系 [J].中國超聲醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(5)：392-395

[2]Maron DJ,Fazio S,Linton M F.Current perspectives on statins[J].Circulation,2000,101(2)：207-213

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[6]晏沐陽,段云友,曹鐵生,等.高膽固醇血癥兔動(dòng)脈內(nèi)皮非依賴舒張功能在體、離體研究 [J].中華超聲影像學(xué)雜志,2000,9(10)：622-624