魏 來，鄭 永，趙春景

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥劑科，重慶 400010）

頭孢氨芐為半合成的第1代頭孢菌素，抗菌作用較弱，與頭孢拉定相似，適用于治療敏感菌所致的急性扁桃體炎、咽峽炎、中耳炎、鼻竇炎、支氣管炎、肺炎等呼吸道感染，以及尿路感染、皮膚軟組織感染等，不宜用于重癥感染。其對(duì)革蘭陽(yáng)性菌（包括對(duì)青霉素敏感或耐藥的金黃色葡萄球菌）的抗菌作用較第2代、第3代頭孢菌素強(qiáng)，且有口服吸收好、毒性小、抗菌譜廣等優(yōu)點(diǎn)，是臨床抗感染治療的主要藥物之一。目前市售的劑型主要是片劑和膠囊劑，膠囊劑服用方便，生產(chǎn)工藝重現(xiàn)性好，質(zhì)量容易控制。本試驗(yàn)對(duì)西南藥業(yè)股份有限公司研制的頭孢氨芐膠囊（受試制劑）和石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的頭孢氨芐膠囊（參比制劑）進(jìn)行了生物等效性研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀、Waters 1525泵、Waters 2487紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；Waters Breeze工作站；WHX微型渦旋混合器（上海躍進(jìn)機(jī)械廠）；KL512J型氮吹儀（北京康林科技有限責(zé)任公司）。頭孢氨芐標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純，天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，批號(hào)為20041006）；磷酸二氫鉀（分析純，重慶化學(xué)試劑廠，批號(hào)為20040205）；雙蒸水（經(jīng)0.45μm濾膜過濾）；試驗(yàn)制劑頭孢氨芐膠囊（西南藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格為250 mg/粒，批號(hào)為20050102）；參比制劑頭孢氨芐膠囊（石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，規(guī)格為250 mg/粒，批號(hào)為051001）。

1.2 試驗(yàn)方法

選擇健康男性志愿者18名，平均年齡（22.1±3.0）歲，身高（168.9±4.7）cm，體重（59.2 ±5.4）kg；身體健康，無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)疾病及代謝異常等病史，健康體格檢查（心電圖、血壓、心率、肝功能、腎功能、脈搏、體溫、血常規(guī)、尿常規(guī)等）無異常。所有志愿者充分了解試驗(yàn)內(nèi)容后自愿受試，并簽署知情同意書。

1.3 給藥方法及血樣采集

采用自身交叉單劑量口服給藥。將18名受試者隨機(jī)分為兩組，每組9名，禁食12 h后，于次日晨空腹口服500 mg頭孢氨芐膠囊受試制劑或參比制劑，均用200 mL溫開水送服。給藥后2 h限制飲水，給藥后4 h統(tǒng)一進(jìn)食低脂標(biāo)準(zhǔn)餐。于給藥前及給藥后15，30，45，60，90，120，150，180，210，240，300 min 時(shí)，抽取前臂靜脈血 3 mL，5000 r/min離心5 min后分離血漿，將血漿樣本于低溫（-20℃）保存，待測(cè)。間隔1周后交換口服另一種制劑，再按上述方法采集、分離、保存血漿樣本。

1.4 色譜條件

色譜柱為 Symmetry C18柱（150 mm ×4.6 mm，5.4 μm），固定進(jìn)樣環(huán)20 μL；參考文獻(xiàn)[1-4]及預(yù)試驗(yàn)選擇，流動(dòng)相為甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀（120∶320），流速為 1.0 mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；柱溫為25℃。

1.5 樣品處理

精密取受試者血漿200 μL，加入10%三氯醋酸80 μL，渦旋振蕩 2 min，5000 r/min 離心 5 min，取上清液 20 μL 進(jìn)樣。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用3P97進(jìn)算計(jì)軟件（中國(guó)數(shù)學(xué)藥理學(xué)會(huì)），根據(jù)血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)模擬確定模型，選擇最佳藥代動(dòng)力學(xué)模型，計(jì)算各個(gè)體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，峰濃度（Cmax）和達(dá)峰時(shí)間（Tmax）以實(shí)測(cè)值計(jì)算，藥-時(shí)曲線下面積（AUC）按梯形面積法計(jì)算（時(shí)間范圍為 0～300 min）。采用受試制劑和參比制劑的AUC0-300min計(jì)算相對(duì)生物利用度（F）。各項(xiàng)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和相對(duì)生物利用度參數(shù)采用方差分析和雙單側(cè)檢驗(yàn)，用（1-2α）置信區(qū)間分析，實(shí)測(cè)的 Tmax用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)Wilcoxo法進(jìn)行檢驗(yàn)，判斷生物等效性。

圖1 高效液相色譜圖

2 結(jié)果

2.1 含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果

色譜行為：在擬訂的色譜條件下測(cè)得的色譜見圖1?？梢?，頭孢氨芐與血中內(nèi)源性雜峰分離良好，峰形尖銳，雜質(zhì)和代謝物不干擾藥物的測(cè)定。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：在空白血漿中加入質(zhì)量濃度為894.0 μg/mL的頭孢氨芐標(biāo)準(zhǔn)品溶液，使血藥濃度分別為44.70，22.35，11.18，5.59，2.79，1.40，0.70 μg/mL，按 1.5 項(xiàng)下方法處理并測(cè)定，以頭孢氨芐峰面積（A）對(duì)血藥濃度 C進(jìn)行回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 C=-0.00276+0.0000939188 A，線性范圍為 44.700 ～0.699 μg/mL，r=0.9999（ n=7），最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為 0.117 μg/mL。

精密度試驗(yàn)：在空白血漿中加入質(zhì)量濃度為894.0 μg/mL的頭孢氨芐標(biāo)準(zhǔn)品溶液，配制高、中、低質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)血樣，按1.5項(xiàng)下方法處理，于日內(nèi)各測(cè)定5次并連續(xù)測(cè)定5 d。結(jié)果見表1。

回收率試驗(yàn)：在空白血漿中加入質(zhì)量濃度為894.0 μg/mL的頭孢氨芐標(biāo)準(zhǔn)品溶液，配制高、中、低質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)血樣，按1.5項(xiàng)下方法處理并測(cè)定，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出血樣中頭孢氨芐的質(zhì)量濃度，計(jì)算方法回收率。結(jié)果見表1。

表1 精密度與回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.2 藥-時(shí)數(shù)據(jù)及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

試驗(yàn)結(jié)果表明，口服頭孢氨芐膠囊后的藥-時(shí)數(shù)據(jù)符合一室藥代動(dòng)力學(xué)模型，平均藥-時(shí)曲線見圖2，有關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及生物利用度見表2。

圖2 平均藥-時(shí)曲線圖

表2 兩種頭孢氨芐膠囊在人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

2.3 相對(duì)生物利用度及生物等效性分評(píng)價(jià)

方差分析結(jié)果顯示，頭孢氨芐膠囊受試制劑與標(biāo)準(zhǔn)參比制劑的 AUC0-300無顯著性差異（P＞0.05）；單雙側(cè) t檢驗(yàn)，t1=6.932≥t1-a，t2=6.812≥t1-a，顯示兩者等效；90%置信區(qū)間為94.9% ～105.4%，顯示兩藥等效。方差分析結(jié)果顯示，兩藥 Cmax無顯著性差異（P ＞ 0.05）；單雙側(cè) t檢驗(yàn)，t1=7.604≥t1-a，t2=8.155≥ t1-a=1.746，顯示兩者等效；90%置信區(qū)間為96.0% ～111.5%，顯示兩藥等效。對(duì)實(shí)測(cè)的 Tmax用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)Wilcoxo法進(jìn)行檢驗(yàn)，兩藥間無顯著性差異。

3 討論

采用高效液相色譜法測(cè)定人體血漿中的頭孢氨芐質(zhì)量濃度，方法簡(jiǎn)便可靠，能夠滿足頭孢氨芐膠囊人體藥代動(dòng)力學(xué)及生物利用度研究的需要。本試驗(yàn)獲得了頭孢氨芐膠囊受試制劑與參比制劑的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，生物等效性評(píng)價(jià)顯示兩種制劑生物利用度相當(dāng)，結(jié)果表明兩廠家生產(chǎn)的頭孢氨芐膠囊在體內(nèi)的吸收、分布、消除過程一致，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析證明兩種頭孢氨芐膠囊生物等效。

[1]吳健鴻，楊遠(yuǎn)榮，高逢喜，等.國(guó)產(chǎn)頭孢氨芐片與國(guó)外同品種的人體生物等效性研究[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，26（5）：480-483.

[2]郝桂彤，左仕深，趙春杰.頭孢氨芐膠囊在人體藥代動(dòng)力學(xué)及其相對(duì)生物利用度的研究[J]. 藥學(xué)服務(wù)于研究，2003，3（1）：44-46.

[3]張 波，杜智敏，金 銳，等.頭孢氨芐片和頭孢氨芐膠囊的健康人體生物等效性[J]. 中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2003，85（10）：367-369.

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