果崇慧，劉德艷，何國云

（1.河北省秦皇島市工人醫(yī)院，河北 秦皇島 066200； 2.河北省秦皇島市山海關(guān)區(qū)人民醫(yī)院，河北 秦皇島 066200）

烏拉地爾又稱壓寧定、優(yōu)匹敵，是苯哌嗪取代的尿嘧啶衍生物，主要有α1-受體拮抗作用和中樞腦干血清素1A（5-HT1A）受體激動作用，臨床上主要用于治療原發(fā)性高血壓、腎性高血壓、嗜鉻細胞瘤和心力衰竭[1-2]。大量臨床試驗表明，該藥療效確切，口服吸收迅速且良好，比傳統(tǒng)α-受體阻斷劑對循環(huán)的副作用小[3-4]，優(yōu)點為不論有意或無意中斷治療，都不會引起血壓突然上升。為滿足廣大患者需求，國內(nèi)已研制出烏拉地爾腸溶膜控片及緩釋片以替代進口制劑。筆者參考文獻[5-7]中有關(guān)烏拉地爾的測定方法并進行了改進，建立了一種測定烏拉地爾在人血漿中藥物濃度的高效液相色譜-紫外檢測法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜系統(tǒng)，包括L-7420輸液泵及L-7110紫外檢測器（日本日立公司）；100 μL和 1000 μL微量移液器（上海求精生化試劑儀器有限公司）；數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)Anastar Chromatography Data System（日本日立公司）。受試制劑烏拉地爾緩釋片（利君制藥有限公司，規(guī)格為30 mg/片，批號為20020718）；參比制劑烏拉地爾緩釋膠囊（日本科研制藥株氏會社，規(guī)格為30 mg/片，批號為21800）。烏拉地爾對照品（含量為99.3%）；內(nèi)標鹽酸丁咯地爾（山東臨淄制藥廠，含量大于99.5%）；乙腈（色譜純，天津市康科德科技有限公司）；正己烷、二氯甲烷（分析純，天津市博迪化工有限公司）；異丙醇（分析純，天津市北方化玻購銷中心）?？瞻兹搜獫{由秦皇島市中心血站提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 血藥濃度測定方法

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（200 mm ×4.6 mm，5μm，北京迪馬公司）；流動相：乙腈 -0.05 mol/L 磷酸二氫銨（20∶80，V/V）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測波長：268 nm；進樣量：20μL；柱溫：室溫；內(nèi)標：丁咯地爾。

2.1.2 溶液配制

精密稱取烏拉地爾對照品25.0 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解，定容，配制成1.0 g/L的對照品貯備液；用甲醇將對照品貯備液稀釋成 0.1，0.2，0.5，1.0，3.0，6.0μg/mL 的對照品溶液。精密稱取內(nèi)標丁咯地爾12.5 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解，定容，配制成1.25 g/L的內(nèi)標貯備液；用甲醇將內(nèi)標貯備液稀釋成18μg/mL的內(nèi)標溶液。

2.1.3 血漿樣品預(yù)處理及測定

取血漿樣品1.0 mL，精密加入內(nèi)標溶液100μL、甲醇100μL、1 mol/L碳酸鈉100μL，混勻，加入3 mL正己烷-二氯甲烷-異丙醇（20∶10∶1，V/V），渦旋混合 1 min，反復(fù)振搖 15 min，以 4000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，移取有機層，于40℃空氣下吹干，殘留物用100μL流動相溶解，進樣20μL，記錄色譜圖。

2.1.4 方法學(xué)考察

穩(wěn)定性試驗：取2.1.3項下處理后的血漿樣品，室溫放置24 h，依法測定。結(jié)果表明，待測血漿樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

專屬性考察：分別取6名受試者的空白血漿1 mL，除不加入內(nèi)標外，其余按2.1.3項下方法操作，其中一名受試者空白血漿色譜圖見圖1 A。將一定質(zhì)量濃度的對照品溶液100μL加入空白血漿中，除不加入100μL甲醇外，其余按2.1.3項下方法操作，烏拉地爾和內(nèi)標丁咯地爾的保留時間分別為4.9 min和8.0 min，色譜圖見圖1 B。取受試者口服烏拉地爾30 mg后2 h的血漿1 mL，按2.1.3項下方法操作，得色譜圖1 C。結(jié)果表明，空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾烏拉地爾及內(nèi)標的測定。

圖1 高效液相色譜圖

標準曲線制備：取空白血漿1.0 mL，置10 mL帶塞玻璃試管中，分別加入烏拉地爾對照品溶液100μL，配制成相當于血藥濃度分別為 10，20，50，100，300，600 ng/mL 的血漿樣品。除不加入 100μL甲醇外，按2.1.3項下方法操作，依法測定，以待測物的血漿質(zhì)量濃度為橫坐標、待測物與內(nèi)標的峰面積比值為縱坐標，用加權(quán)最小二乘法[8]（W=1/C2）進行線性回歸，得回歸方程Y=1.811 X×10-3+2.504 ×10-3，r=0.9978（n=6）。結(jié)果表明，烏拉地爾質(zhì)量濃度的線性范圍為10～600 ng/mL，最低定量限為10 ng/mL。

2.2 給藥方法

選擇24名健康自愿受試者，口服受試制劑或參比制劑30 mg（1片），于單劑量服藥前（0 h）和服藥后 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，10.0，12.0，24.0 h時取靜脈血5 mL；于多劑量服藥后第2天起連續(xù)3 d在血藥濃度波谷時取靜脈血5 mL，其余同單劑量。血液經(jīng)離心，所移取血漿于-20℃冷凍待測。

2.3 藥-時曲線

受試者口服給藥后的典型藥-時曲線見圖 2和圖 3，24名受試者多劑量口服給藥后的平均藥-時曲線見圖4。

圖2 受試者H單劑量口服給藥后的藥-時曲線

圖3 受試者L多劑量口服給藥后的藥-時曲線

圖4 24名受試者多劑量口服給藥后的平均藥-時曲線

3 討論

烏拉地爾的解離常數(shù)為7.10，當以氫氧化鈉為堿化試劑時提取率不穩(wěn)定，改用1 mol/L碳酸鈉 50μL（pH 為 7～8）和100μL（pH 為 9～10），同樣條件下提取，結(jié)果后者的提取率高于前者，故選擇1 mol/L碳酸鈉100μL作為堿化試劑。分別用乙醚、乙酸乙酯、正己烷-二氯甲烷 -異丙醇（100∶50∶5，V/V）進行提取，其中經(jīng)前兩者提取的樣品內(nèi)源性雜質(zhì)較多，后一種溶劑的提取率最高，內(nèi)源性雜質(zhì)較少，故選擇正己烷-二氯甲烷-異丙醇（100∶50∶5，V/V）為提取溶劑。

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