李天嬌,鐘海英,郭紅荔,黃 濤

(海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,海南?？?570311)

新生兒血培養(yǎng)出凝固酶陰性葡萄球菌的分析

李天嬌,鐘海英,郭紅荔,黃 濤

(海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,海南海口 570311)

新生兒血培養(yǎng)中分離出凝固酶陰性的葡萄球菌(CNS)一直都占居新生兒血培養(yǎng)分離菌的第一位,但由于CNS是人皮膚正常菌群,在臨床新生兒采血過程中由于操作時(shí)間延長或是消毒不充分以及采用使用各種侵入性醫(yī)療器械時(shí)都會(huì)造成污染,因此導(dǎo)致血培養(yǎng)中分離出的CNS常見是污染菌,但又由于CNS可以產(chǎn)生毒力因子而具有嚴(yán)重的致病性,并且隨著CNS耐藥性的不斷增加,對(duì)于抵抗力弱的新生兒群體,它的致病性更顯突出。因此,在臨床工作中新生兒血培養(yǎng)中分離出CNS是污染菌還是病原菌一直困擾著很多臨床醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)室工作者;根據(jù)菌血癥病原菌的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)包括血培養(yǎng)在入院后48小時(shí)內(nèi)陽性和多次血培養(yǎng)為同一細(xì)菌判斷為病原菌,3天以上陽性的CNS,或培養(yǎng)出多種皮膚寄居菌,或血培養(yǎng)雖多次呈陽性,但屬不同種的CNS或其他細(xì)菌等提示為污染[1,2]。我們綜合文獻(xiàn)推薦的標(biāo)準(zhǔn),制定出一套實(shí)驗(yàn)室評(píng)估標(biāo)準(zhǔn),并對(duì)血培養(yǎng)分離出CNS以評(píng)估為病原菌或是污染菌;

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選擇我2007年1月到2009年12月我實(shí)驗(yàn)室新生兒科血培養(yǎng)樣品1 789份,并對(duì)分離出113株CNS作為研究對(duì)象。

1.2 采血方法 在患兒住院抗感染藥物使用前或非感染性疾病患兒在住院過程中懷疑感染時(shí)進(jìn)行血培養(yǎng),對(duì)患兒進(jìn)行局部消毒后在無菌操作下經(jīng)橈動(dòng)脈或股靜脈取血2-5 ml加入Bact/Alert-120儀器配套的需氧血瓶中半小時(shí)內(nèi)送檢實(shí)驗(yàn)室。

1.3 儀器 Bact/Alert-120全自動(dòng)光電比色微生物檢測(cè)儀。其特點(diǎn)為檢測(cè)微生物濃度所致的酸堿度變化,該變化反映在瓶底的感光板上,進(jìn)而被瓶外的光束捕獲,通過電腦的連續(xù)監(jiān)測(cè),分析判定,隨時(shí)報(bào)警。

1.4 鑒定 實(shí)驗(yàn)采用法國梅里埃(VETIK-32)進(jìn)行鑒定。對(duì)陽性培養(yǎng)瓶及時(shí)取樣作革蘭染色涂片及分離培養(yǎng)。分離培養(yǎng)后對(duì)鏡檢呈葡萄狀排列的革蘭陽性球菌的菌落進(jìn)行血漿凝固酶陰性初步鑒定,繼之采用法國梅里埃VETIK-32系統(tǒng)作進(jìn)一步鑒定。

1.5 質(zhì)控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC25923,購自“衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心”。

1.6 血培養(yǎng)分離出CNS如何區(qū)分病原菌或是污染菌

1.6.1 血培養(yǎng)分離出CNS實(shí)驗(yàn)室評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)(圖1)

1.6.2 菌血癥臨床評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)[1,2]

菌血癥臨床標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)符合以下至少一項(xiàng)條件:初次血培養(yǎng)陽性標(biāo)本采集的當(dāng)日體溫≥38℃,膿毒性休,白細(xì)胞升高或核左移,具有彌散性血管內(nèi)凝血病變;具有由皮膚菌群引起感染的危險(xiǎn)因素如長期靜脈插管或異體移植物;抗生素(包括萬古霉素或菌株敏感的抗生素)治療有效,或拔除導(dǎo)管或異物,感染得到控制。實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)符合以下至少一項(xiàng)條件:從其他感染部位或?qū)Ч芗舛朔蛛x到相同的病原菌,且耐藥譜也相同;多次血培養(yǎng)為同一種細(xì)菌。

污染菌的臨床標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合以下至少一項(xiàng)條件:無明顯發(fā)熱及危險(xiǎn)因素(如免疫功能低下或侵襲性操作);雖有上述危險(xiǎn)因素但隨后多次血培養(yǎng)證明為其他病原菌;使用敏感抗生素治療無效;發(fā)熱可由其他原因解釋,且無明顯的感染征象。同時(shí)還應(yīng)當(dāng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn),如長時(shí)間培養(yǎng)后陽性;連續(xù)多次多日培養(yǎng),僅1次為CNS;1次血培養(yǎng)分離出2種以上的皮膚菌群;收集CNS陽性標(biāo)本的72 h內(nèi)又分離出另1種細(xì)菌或真菌,卻沒有再分離到CNS。

1.6.3 結(jié)合臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù),最終評(píng)估出分離出的CNS是病原菌還是污染菌。

1.7 統(tǒng)計(jì)處理 使用Bact/Alert分析軟件對(duì)每例的血培養(yǎng)次數(shù)、陽性次數(shù)、檢出時(shí)間等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 2007年1月到2009年12月共收到新生兒科血培養(yǎng)1 789份血標(biāo)本,分離出143例菌株,其中G-桿菌14例占9.8%;G+葡萄球菌120例占83.9%,其中CNS 113例占79.0%(污染菌 89占78.8%,病原菌24占21.2%),金黃色葡萄球菌7例占4.9%;真菌5例占3.5%;其它細(xì)菌 4例占2.8%。

2.2 實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù) Bact/Alert分析軟件分析血培養(yǎng)分離出CNS 113例;24小時(shí)內(nèi)儀器報(bào)警為22例(占19.5%)25-48小時(shí)報(bào)警24例(占21.2%),49-168小時(shí)報(bào)警分離出67例(占59.3%),經(jīng)分析24 h內(nèi)報(bào)警有8例(36.3%)為污染菌,25-48 h報(bào)警有14例(58.3%)為污染菌,48 h以后全為污染菌。見圖2;

圖1 血培養(yǎng)分離出CNS實(shí)驗(yàn)室評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)

圖2 血培養(yǎng)中病原菌及污染菌的檢出時(shí)間比較

2.3 根據(jù)CNS實(shí)驗(yàn)室評(píng)估113例CNS中24株為病原菌占分離 CNS的 21.2%,血樣本污染 89例78.8%,與文獻(xiàn)[3,4,5]70-90%之間報(bào)導(dǎo)相符,除去被污染分離出的CNS,新生兒科致病性CNS占總菌血癥病原菌44.4%(24/54)為感染病原菌的首位。

3 討論

近年來隨著抗生素的廣泛應(yīng)用,新生兒病原菌種類也發(fā)生了變遷,國內(nèi)外資料顯示新生兒CNS感染呈增多趨勢(shì),2003年西班牙學(xué)者進(jìn)行一項(xiàng)對(duì)新生兒病房感染的前瞻性研究發(fā)現(xiàn),革蘭陽性菌占首位(76.4%),CNS占其中的72.5%,居新生兒細(xì)菌感染的第一位[6];汪復(fù)等人研究的新生兒CNS感染也居新生兒細(xì)菌感染的首位[7],本組數(shù)據(jù)新生兒科血培養(yǎng)除去分離出的污染菌,CNS引起的敗血癥為24例,占總的血培養(yǎng)分離出的病原菌的44.4%(24/54)位于新生兒菌血癥的第1位,與文獻(xiàn)相符。

新生兒敗血癥是威脅新生兒生命的危重疾病、尤其在低體重兒,早產(chǎn)兒較易感染,是新生兒死亡的重要疾病,而血培養(yǎng)分離出病原菌是新生兒敗血癥診斷和治療的主要依據(jù)。但在血培養(yǎng)中卻經(jīng)常因各種原因造成血樣本的污染,因此在血培養(yǎng)中如果分離出CNS,那么如何辨別是病原菌還是污染菌尤其重要,需結(jié)合臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)室信息來綜合分析,如果僅依靠實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)來判定,就出現(xiàn)誤報(bào)的現(xiàn)象。例如,實(shí)驗(yàn)室確定菌血癥的標(biāo)準(zhǔn)為陽性報(bào)警時(shí)間在48 h以內(nèi)和多個(gè)血培養(yǎng)瓶陽性,而本研究結(jié)果顯示雖然病原菌陽性報(bào)警時(shí)間短于污染菌,但48 h以內(nèi)血培養(yǎng)CNS仍有36.3-58.3%為污染菌,因此CNS菌血癥應(yīng)當(dāng)依據(jù)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)和微生物學(xué)三方面的資料來判定。

總之,CNS在新生兒菌血癥中感染率高,而在血培養(yǎng)時(shí)血樣本污染率也高,因此應(yīng)減少操作時(shí)造成血培養(yǎng)瓶污染,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)提高判斷血培養(yǎng)中分離出的CNS是病原菌還是污染菌的能力,這對(duì)于給臨床提供準(zhǔn)確有意義的血培養(yǎng)報(bào)告單有著至關(guān)重要的意義。

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1007-4287(2010)09-1451-03

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2010-02-14)