賈 丹，陳書(shū)明，王志強(qiáng)，賀毅鑫

（1.北京農(nóng)學(xué)院，北京 102206；2.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山西 太谷 030801）

雞傳染性支氣管炎（IB）是由雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起的雞的一種急性，高度接觸傳染的呼吸道疾病。本病以呼吸道癥狀、腎臟病變、腸道損害、產(chǎn)蛋下降為主要特征。該病的廣泛流行給養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重危害。目前，在藥物治療和疫苗免疫方面均無(wú)有效方法，而中草藥在藥物研究和應(yīng)用上具有多效性、雙向調(diào)節(jié)和適應(yīng)性作用等優(yōu)勢(shì)。許多滋陰、補(bǔ)血、益氣、助陽(yáng)的中草藥物均能提高機(jī)體的免疫功能，對(duì)動(dòng)物機(jī)體體液免疫、細(xì)胞免疫及非特異性免疫功能均有一定的促進(jìn)作用。

本實(shí)驗(yàn)中藥復(fù)方含有保肝護(hù)腎的熟地、山茱萸、茵陳，抗菌抗病毒的板藍(lán)根、甘草，以及提高機(jī)體免疫功能的各種藥物。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究此復(fù)方中藥對(duì)感染腎型傳染性支氣管炎雛雞血清球蛋白的影響，以期為中藥復(fù)方治療禽病毒性疾病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

1日齡健康海蘭褐蛋雛雞400羽，購(gòu)自山西省太谷縣韓村種雞場(chǎng)。

1.1.2 傳染性支氣管炎病毒

IBV標(biāo)準(zhǔn)T株，購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品

中藥復(fù)方（方劑由熟地、山茱萸、板藍(lán)根、茵陳、甘草等組成），采用傳統(tǒng)中藥煎煮方法將中草藥制成水煎液，并濃縮成1 g/mL，作為實(shí)驗(yàn)藥劑。由山西偉業(yè)生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。病毒靈、電解多維、安腎靈。

1.1.4 主要儀器

酶標(biāo)儀、漩渦振蕩器、電熱鼓風(fēng)干燥箱、自動(dòng)雙重純水蒸餾器、手提式滅菌器、超低溫冰箱、生物潔凈工作臺(tái)、微量可調(diào)移液器等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 IBV抗體測(cè)定（雙向瓊擴(kuò)試驗(yàn)）

將雛雞飼養(yǎng)至18日齡時(shí)，每組隨機(jī)取5羽，心臟采血，離心，取血清進(jìn)行IBV抗體檢測(cè)。

1.2.2 動(dòng)物分組及處理

在雛雞21日齡時(shí)挑選360羽健康、體重均勻的雛雞，隨機(jī)分成6組，每組60羽，分別是空白對(duì)照組、攻毒對(duì)照組、復(fù)方中藥高劑量組、中劑量組、低劑量組、西藥治療組。除空白組外，其余組當(dāng)天氣管攻毒（0.2 mL/羽）。攻毒后48 h～72 h在多數(shù)出現(xiàn)臨床癥狀后飲水給藥，每日2次，連續(xù)給藥6天。高、中、低劑量組以及西藥治療組的給藥劑量分別為1.5%，1.0%，0.5%，1g/L。

1.2.3 樣本的采集與處理

分別于給藥后 3、6、9、14、19 d 時(shí)，每組隨機(jī)取雞 5 羽，無(wú)菌心臟采血，用肝素鈉抗凝。

1.2.4 血清中IgG、IgA、IgM的測(cè)定

按免疫球蛋白試劑盒說(shuō)明操作。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

測(cè)定結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用SPSS12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組雞血清IgG含量測(cè)定結(jié)果

見(jiàn)表1，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，血清IgG含量，攻毒對(duì)照組在給藥后3 d、6 d、9 d高于空白對(duì)照組，在給藥后14 d、19 d低于空白對(duì)照組，但差異都不顯著（P＞0.05）。給藥后 3 d、6 d、9 d、14 d 各治療組與攻毒對(duì)照組血清IgG含量差異顯著（P＜0.05），給藥后19 d高劑量組和攻毒對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。給藥后3 d，高、低劑量組之間差異顯著（P＜0.05）；給藥后6 d高、低劑量組和西藥組差異顯著（P＜0.05），中、低劑量組之間差異顯著（P＜0.05）；給藥后9 d高、中劑量組與低劑量組差異顯著（P＜0.05）；給藥后14 d高、中劑量組與低劑量組和西藥組差異顯著（P＜0.05）；給藥后19 d高劑量組與其它治療組差異顯著（P＜0.05）。

2.2 各組雞血清IgA含量測(cè)定結(jié)果

見(jiàn)表2，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，攻毒對(duì)照組與空白對(duì)照組在給藥后6 d血清IgA含量差異顯著（P＜0.05）。給藥后3 d、9 d、14 d各治療組與攻毒對(duì)照組血清IgA含量差異顯著（P＜0.05），給藥后6 d、19 d高劑量治療組與攻毒對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。給藥后3 d各治療組之間差異不顯著（P＞0.05）；給藥后6d高劑量組與低劑量治療組和西藥治療組差異顯著（P＜0.05）；給藥后9 d、14 d高劑量治療組與低劑量治療組和西藥治療組差異顯著（P＜0.05）；給藥后19 d高劑量組與低劑量組和西藥治療組差異顯著（P＜0.05）。

表1 各組雞血清IgG含量測(cè)定值（單位：g/L）

表2 各組雞血清IgA含量測(cè)定值（單位：g/L）

表3 各組雞血清IgM含量測(cè)定值（單位：g/L）

2.3 各組雞血清IgM含量測(cè)定結(jié)果

見(jiàn)表3，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，攻毒對(duì)照組除了在給藥后19 d血清IgM含量低于空白組，其它時(shí)間均高，但差異不顯著（P＞0.05）。給藥后3 d、6 d、9 d、14 d各治療組與攻毒治療組血清IgM含量差異顯著（P＜0.05），給藥后19 d高劑量治療組與攻毒對(duì)照組之間差異顯著（P＜0.05）。給藥后3 d高劑量組與低劑量組差異顯著（P＜0.05）；給藥后6 d、9 d高劑量治療組與低劑量組和西藥治療組差異顯著（P＜0.05）；給藥后14 d高劑量組與低劑量組和西藥治療組差異顯著（P＜0.05）；給藥后19 d高劑量組與低劑量治療組和西藥治療組差異顯著（P＜0.05）。

3 討論與結(jié)果

復(fù)方中藥制劑對(duì)人工感染腎型傳染性支氣管炎病毒雛雞外周血免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）的影響血清中IgG、IgA、IgM的含量是機(jī)體免疫器官組織中的體液免疫活性細(xì)胞產(chǎn)生的體液免疫分子，在血液中的體現(xiàn)，是體液免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)的重要指標(biāo)[9]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，攻毒對(duì)照組免疫球蛋白含量高于空白對(duì)照組，其中，IgA含量在給藥后6 d與空白對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）。IgG含量除給藥后19d各治療組與攻毒對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），高、中劑量組之間差異不顯著（P＞0.05），但高劑量組高于中劑量組，高劑量組與低劑量組和西藥組在給藥后6 d、14 d差異顯著（P＜0.05），中、低劑量組與西藥組差異不顯著（P＞0.05）。IgA含量各治療組都高于攻毒對(duì)照組；高、中劑量組差異不顯著（P＞0.05），高劑量組與低劑量組和西藥組在給藥后6 d、9 d、14 d差異顯著（P＜0.05），中、低劑量組與西藥組差異不顯著（P＞0.05）。IgM含量除給藥后19 d各治療組與攻毒對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）；各治療組之間在給藥后3 d差異不顯著，隨后高劑量組與低劑量組和西藥組差異顯著（P＜0.05），中、低劑量組和西藥組差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)中藥復(fù)方可以促進(jìn)機(jī)體免疫球蛋白含量增加，提高攻毒機(jī)體的體液免疫功能，高、中劑量治療組效果優(yōu)于低劑量組和西藥治療組。

[1]BW，卡爾尼克主編，高福等主譯.禽病學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1997年，第17章:407-418.

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[9]Gebremichael A E，Levy M，Corwin L M.Adherent cell requirement or the effect of vitamin E on in vitro antibody synthesis[J].JNutr，1984，114:1297-1305