孫素珍

五仁醇膠囊系由北五味子仁經(jīng)提取濃縮成浸膏，再經(jīng)干燥粉碎而制成，具有滋補(bǔ)肝腎之功效。用于急慢性肝炎(GPT偏高)而具肝腎陰虛之癥者，其現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于局頒標(biāo)準(zhǔn)(YBZ11272005)，其含量測定采用分光光度法，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，為提高檢測手段，更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用HPLC法測定五味子乙素的含量，取得滿意的結(jié)果，報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10AT高效液相色譜儀、SPD-10A檢測器、AG-135型電子天平、MILLI-Q50超純水器。

1.2 試藥 五味子乙素對(duì)照品(編號(hào)為110765-200805)購自中國藥品生物制品檢定所;五仁醇膠囊(廣東在田藥業(yè)有限公司，批號(hào):20091001，20091101，20091201)，甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為shim-pack CLC-ODS(4.60 mm×150 mm，5 um);流動(dòng)相甲醇:水(75:25);檢測波長:254 nm;流速:1.0 ml/min;進(jìn)樣量:20 μl［1］。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取五味子乙素對(duì)照品10 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得((每1 ml含五味子乙素0.1 mg)。

2.3 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約1 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加甲醇約40 ml，超聲處理20 min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得［2］。

2.4 線性關(guān)系考察 配置每1 ml含五味子乙素1 mg的甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液0.5、1、2、4 ml各置10 ml容量瓶和1 ml置100 ml容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣，記錄峰面積。以峰面積積分值Y對(duì)其濃度X進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 :Y=20215239.95X+2280.457355，r=0.9999902，見表 1，表明五味子乙素在0.01～0.40 mg/ml范圍內(nèi)，峰面積積分值和濃度呈良好的線性關(guān)系。

表1 線性關(guān)系(n=5)

2.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，以20 μl進(jìn)樣，記錄峰面積，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果:五味子乙素平均峰面積為1885322，RSD為1.2%(n=5)。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，按上述色譜條件，以20 μl進(jìn)樣，記錄峰面積，每隔1 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次，結(jié)果:RSD為0.9%(n=6)，表明供試品溶液在6 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的樣品(20091001)配置成三個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液，再分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液1 ml，按樣品測定項(xiàng)下樣品溶液制備方法制備，測定，記錄峰面積，計(jì)算回收率，見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.8 樣品測定 分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件測定，分別以20 μl進(jìn)樣，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算供試品中五味子乙素的含量。結(jié)果見表3，色譜圖見圖1，圖2。

表3 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

圖1 供試品(五仁醇膠囊)

圖2 對(duì)照品(五味子乙素)

3 討論在對(duì)五味

子乙素進(jìn)行初步測試時(shí)，首先是進(jìn)行紫外掃描，確定其最佳檢測波長為254 nm。后進(jìn)行初步進(jìn)樣測試，用五味子乙素對(duì)照品配置成甲醇溶液，稀釋成不同濃度，確定最佳進(jìn)樣濃度和最佳流動(dòng)相比例。

因?yàn)閮x器設(shè)備的局限，專屬性試驗(yàn)無法進(jìn)行(需用到二級(jí)管陣列檢測儀或質(zhì)譜檢測儀，而現(xiàn)實(shí)條件只有單波長紫外檢測儀)，有待以后的改進(jìn)。

在配置樣品溶液時(shí)，為確定是否提取完全，特對(duì)0630401批次的樣品設(shè)計(jì)了三個(gè)超聲時(shí)間:10 min 20 min 30 min，按樣品制備項(xiàng)下方法操作，分別計(jì)算其五味子乙素的含量，結(jié)果見表4，故采用20 min的超聲時(shí)間［1］。

表4 超聲提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

4 結(jié)論

五味子為五仁醇膠囊的主藥，而五味子乙素又為五味子的有效成分之一，上述采用HPLC法測定五味子乙素的含量［2］，結(jié)果表明本法簡便、準(zhǔn)確，可用于五仁醇膠囊的質(zhì)量控制。

［1］孫玉雯，劉漢青.五味子及其制劑中主要化學(xué)成分的提取和測定方法研究進(jìn)展.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2004，15(6):368-369

［2］崔蘭貴，陳虹，苗德田，等.HPLC法測定益腎丸中五味子甲素和乙素的含量.武警醫(yī)學(xué)，2001，12(8):479-480.