葉菁 邱麗瑛

（江西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 南昌 330006）

恐懼作為一種不良精神刺激，對(duì)腎氣和腎精的直接損傷，擾亂腎臟及其它臟腑多種功能活動(dòng)，影響機(jī)體正常的生理秩序，是“恐傷腎”的關(guān)鍵所在。筆者應(yīng)用小站臺(tái)水環(huán)境實(shí)驗(yàn)建立“恐傷腎”小鼠模型，并給予金匱腎氣丸進(jìn)行干預(yù)，以此研究金匱腎氣丸對(duì)心理應(yīng)激小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用，并分析其抗心理應(yīng)激損傷的作用機(jī)制，為臨床防治心身疾病奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組與處理 雄性昆明種小鼠120只，體重（20±1）g，年齡均為10月齡，將實(shí)驗(yàn)小鼠置于空氣控制級(jí)別為SPF（Specific Pathogen Free）二級(jí)、室溫（24±1）℃、濕度（55±5）%、明暗條件12h轉(zhuǎn)換（6點(diǎn)開燈，18點(diǎn)熄燈）的環(huán)境下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。依據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將動(dòng)物按體重隨機(jī)分為24h應(yīng)激組、24h應(yīng)激+給金匱腎氣丸組、18h應(yīng)激組、18h應(yīng)激+給金匱腎氣丸組、12h應(yīng)激組、12h應(yīng)激+給金匱腎氣丸組、8h應(yīng)激組、8h應(yīng)激+給金匱腎氣丸組、4h應(yīng)激組、4h應(yīng)激+給金匱腎氣丸組、正常對(duì)照組、正常對(duì)照給藥組，每組10只。動(dòng)物稱重后，按組放置不同的實(shí)驗(yàn)間。實(shí)驗(yàn)開始后，前十組動(dòng)物站臺(tái)應(yīng)激，應(yīng)激期間每天豆奶粉流質(zhì)食物灌胃（4h組小鼠不給予食物灌胃），每4小時(shí)1次，每次灌胃量為0.8mL。正常對(duì)照組和正常對(duì)照給藥組不參與應(yīng)激實(shí)驗(yàn)，但同樣灌胃給食、給藥。

1.2 血清醛固酮水平的檢測(cè) 醛固酮含量的測(cè)定采用放免法。采集全血，盡快分離血清，將標(biāo)本存放于2～8℃并于24h內(nèi)測(cè)定；或置-20℃以下冷凍，至使用前于室溫平衡，若有沉淀物形成，在平衡并混勻后4℃離心去除。測(cè)試試劑盒為天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司生產(chǎn)的專用試劑盒，儀器為科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司生產(chǎn)的GC-911γ放射免疫計(jì)數(shù)儀。

1.3 組織醛固酮水平的檢測(cè) 將各組小鼠處死，用75%酒精消毒后進(jìn)入超凈工作臺(tái)，剖開胸腹腔，在冰面上完整地迅速取出腎上腺，濾紙吸干血后，將腎上腺加5mL DMEM培養(yǎng)液用細(xì)胞勻漿器勻漿，并置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆?。組織醛固酮含量的測(cè)定仍采用放免法。測(cè)試試劑盒為天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司生產(chǎn)的專用試劑盒，儀器為科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司生產(chǎn)的GC-911γ放射免疫計(jì)數(shù)儀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS11.5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，樣品的顯著性檢驗(yàn)用方差分析和t檢驗(yàn)，百分比值數(shù)用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 應(yīng)激不同時(shí)間對(duì)小鼠血清醛固酮的影響及中藥調(diào)節(jié) 見表1。

表1 各組小鼠血清醛固酮水平及中藥調(diào)節(jié)作用 （±S）mg/mL

表1 各組小鼠血清醛固酮水平及中藥調(diào)節(jié)作用 （±S）mg/mL

注：與正常對(duì)照組相比，#P＜0.05；##P＜0.01；與對(duì)應(yīng)應(yīng)激組相比，*P＜0.05，**P ＞0.05。

組別 n 血清醛固酮含量正常對(duì)照組 10 128.56±50.83正常對(duì)照給藥組 10 140.60±31.25 4h應(yīng)激組 10 287.19±121.54#4h應(yīng)激給藥組 10 244.28±132.00**8h應(yīng)激組 10 476.48±149.73##8h應(yīng)激給藥組 10 457.84±256.02**12h應(yīng)激組 10 630.77±212.66##12h應(yīng)激給藥組 10 558.39±170.40**18h應(yīng)激組 10 741.22±228.80##18h應(yīng)激給藥組 10 709.32±305.35**24h應(yīng)激組 10 917.84±478.92##24h應(yīng)激給藥組 10 542.36±296.71*

2.2 應(yīng)激不同時(shí)間對(duì)小鼠腎上腺組織醛固酮的影響及中藥調(diào)節(jié) 見表2。

表2 各組小鼠腎上腺組織醛固酮水平及中藥調(diào)節(jié)作用 （±S） mg/mL

表2 各組小鼠腎上腺組織醛固酮水平及中藥調(diào)節(jié)作用 （±S） mg/mL

注：與正常對(duì)照組相比，#P ＜0.05，##P ＜0.01；與對(duì)應(yīng)應(yīng)激組相比，*P ＜0.05，**P ＞0.05。

組別 n 組織醛固酮含量正常對(duì)照組 10 164.90±42.51正常對(duì)照給藥組 10 199.86±35.74 4h應(yīng)激組 10 199.40±29.87 4h應(yīng)激給藥組 10 167.87±57.94**8h應(yīng)激組 10 231.92±72.43#8h應(yīng)激給藥組 10 221.12±53.96**12h應(yīng)激組 10 426.94±84.41##12h應(yīng)激給藥組 10 350.26±73.26**18h應(yīng)激組 10 485.34±89.13##18h應(yīng)激給藥組 10 365.82±91.46**24h應(yīng)激組 10 594.17±113.99##24h應(yīng)激給藥組 10 420.59±79.62*

3 討論

心理應(yīng)激是機(jī)體通過(guò)認(rèn)識(shí)、評(píng)價(jià)而察覺到應(yīng)激原（Stressor）的威脅時(shí)引起的心理、生理機(jī)能改變的過(guò)程。情志內(nèi)傷是中醫(yī)病因?qū)W之一，心理應(yīng)激理論是西醫(yī)學(xué)的基本病理過(guò)程之一，兩種理論框架上具有一定的共通之處。由于神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)的變化，進(jìn)而影響到機(jī)體蛋白質(zhì)、糖、脂肪的代謝變化，以及心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)的病理變化[1]。應(yīng)激反應(yīng)是一種全身性的綜合反應(yīng)，它除了激活下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA軸）和交感神經(jīng)系統(tǒng)-腎上腺髓質(zhì)釋放糖皮質(zhì)激素和兒茶酚胺類物質(zhì)外，還引起多種其它激素、肽類物質(zhì)、細(xì)胞因子等神經(jīng)內(nèi)分泌介質(zhì)的分泌增多，從各個(gè)方面調(diào)整機(jī)體的適應(yīng)能力，以保持應(yīng)激狀態(tài)下內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[2]。

醛固酮（aldosterone，ALD）是腎上腺鹽皮質(zhì)激素的主要成分，是腎上腺皮質(zhì)球狀帶細(xì)胞合成分泌的一種甾體激素，是電解質(zhì)排泄的重要調(diào)節(jié)因子，在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定中起著重要作用。傳統(tǒng)理論認(rèn)為其由腎上腺皮質(zhì)束狀帶分泌，作用于腎臟集合管增加鈉水重吸收和鉀的排泄，主要受血管腎張素Ⅱ（AngⅡ）和血漿Na+、K+濃度調(diào)控。束狀帶分泌糖皮質(zhì)激素，網(wǎng)狀帶分泌性激素，兩帶主要受垂體分泌的促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）調(diào)控。ACTH不但促進(jìn)糖皮質(zhì)激素的合成與分泌，而且是維持束狀帶和網(wǎng)狀帶正常結(jié)構(gòu)的決定因素。ALD通過(guò)對(duì)血流動(dòng)力學(xué)的影響以及直接細(xì)胞作用兩種主要機(jī)制參與腎臟損傷。心理應(yīng)激后可引起水鹽代謝紊亂，應(yīng)激和應(yīng)激適應(yīng)的產(chǎn)生通過(guò)HPA軸的不同位點(diǎn)產(chǎn)生神經(jīng)內(nèi)分泌效應(yīng)，參與應(yīng)激反應(yīng)。在應(yīng)激反應(yīng)中，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)起到了重要作用。萬(wàn)瑜等[3]的研究顯示，腎素-血管緊張素系統(tǒng)與經(jīng)典的應(yīng)激激素反應(yīng)系統(tǒng) （下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)及交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)）之間存在密切關(guān)系。陳新等[4]發(fā)現(xiàn)，在心理應(yīng)激時(shí)，循環(huán)血中的血管緊張素Ⅱ及醛固酮水平可明顯升高。心理應(yīng)激刺激了下丘腦-腺垂體系統(tǒng)，釋放出更多的ACTH，ACTH對(duì)ALD的分泌有促進(jìn)作用。小站臺(tái)水環(huán)境作為應(yīng)激原使多種激素水平升高，如腎上腺素、去甲腎上腺素、促腎上腺皮質(zhì)激素、β-內(nèi)啡肽、β-促脂素、血管緊張素等。這些激素均為刺激ALD分泌的激素，應(yīng)激原持續(xù)存在，ALD等激素水平亦持續(xù)升高。ALD分泌調(diào)節(jié)比較復(fù)雜，它既受垂體ACTH的調(diào)控，又受血鈉、血鉀、細(xì)胞外容積的影響。在機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)下，血漿和腦脊液中AngⅡ含量增高，大量的AngⅡ促使ALD分泌增加，且直接收縮血管，使患者血管強(qiáng)烈收縮，水鈉潴留，進(jìn)一步加重血液動(dòng)力的障礙。如此反復(fù)，使血漿中ALD濃度持續(xù)上升。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎主納氣，最為首要的是調(diào)節(jié)氣機(jī)。從中醫(yī)學(xué)角度而言，不良情志刺激首先是影響了機(jī)體正常的氣機(jī)，進(jìn)而氣血津液及臟腑功能失調(diào)，陰陽(yáng)失衡，機(jī)體的正氣受到損害，這與現(xiàn)代應(yīng)激學(xué)說(shuō)的應(yīng)激原理有許多相似之處，而腎主氣的功能對(duì)機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)作用?？謶謶?yīng)激可致機(jī)體下丘腦-垂體-靶腺軸的損傷，而這又是中醫(yī)腎的功能基礎(chǔ)，這些器官的損傷必然導(dǎo)致“腎”的功能減退，這既證明了恐會(huì)傷腎，又初步表明了“恐傷腎”的病理機(jī)制，本研究亦為進(jìn)一步研究中醫(yī)學(xué)腎臟與慢性心理應(yīng)激的關(guān)系提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，對(duì)中醫(yī)“恐傷腎”理論的研究等都具有良好的理論價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，金匱腎氣丸抑制慢性心理應(yīng)激小鼠HPA軸的興奮性，可以有效地改善小鼠的心理應(yīng)激反應(yīng)。本方為一首治療腎虛證的方劑，其組方以及藥物的配伍特點(diǎn)為補(bǔ)陰藥與助陽(yáng)藥相互為用，以陰生陽(yáng)長(zhǎng)，陰陽(yáng)互根；其作用為溫補(bǔ)腎陽(yáng)，能調(diào)節(jié)腎的生理功能，腎主氣化，為生命之本，本方具有滋陰助陽(yáng)的作用，使腎陽(yáng)振奮，氣化復(fù)常。金匱腎氣丸通過(guò)補(bǔ)益腎氣、強(qiáng)壯精髓，能有效降低心理應(yīng)激小鼠血清ALD水平，起到了改善患病機(jī)體免疫功能狀態(tài)的治療效果。該藥的改善作用可能與其對(duì)各種神經(jīng)遞質(zhì)和激素的代謝調(diào)節(jié)有關(guān)，通過(guò)抑制腎上腺糖皮質(zhì)激素的合成可能是其作用機(jī)理之一。同時(shí)也說(shuō)明補(bǔ)腎法及其方藥具有良好的抗心理應(yīng)激損傷作用。

[1]金惠銘.病理生理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2009.136-138

[2]邵楓,林文娟,王瑋雯.心理應(yīng)激的免疫抑制作用及神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)的相關(guān)性[J].心理學(xué)報(bào),2001,33（1）：43-47

[3]萬(wàn)瑜,楊鋼,萬(wàn)曙霞,等.腎素-血管緊張素系統(tǒng)-應(yīng)激激素反應(yīng)系統(tǒng)[J].生理學(xué)報(bào),1996,48（6）：521-522

[4]陳新,趙英,何愛桃,等.心理應(yīng)激前后血液中部分血管活性物質(zhì)濃度的變化[J].中國(guó)行為醫(yī)學(xué)科學(xué),2003,12（2）：148-149