閆智群,方芳,劉新,陳冬梅

(1.沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系 2006級,遼寧沈陽 110034;2.沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室)

水是我們賴以生存的自然資源,在人民生活水平不斷提高的今天,人們對身邊環(huán)境中水的衛(wèi)生條件的要求也在逐步提高。本實(shí)驗(yàn)采用了平板菌落計數(shù)法[1]、ATB生化鑒定法[2],對生活中經(jīng)常接觸的水中微生物進(jìn)行研究,探討水資源的衛(wèi)生條件。

1 材料與方法

1.1 材料 取 16種不同水樣：洗菜水,某醫(yī)院過濾飲水機(jī),湖水 1,湖水 2,隔夜白開水,飲水機(jī)冷水,飲水機(jī)熱水,衛(wèi)生間自來水,家庭衛(wèi)生間馬桶水箱水,家庭衛(wèi)生間馬桶水,某醫(yī)院腸道門診衛(wèi)生間自來水,某醫(yī)院檢驗(yàn)科污水專用自來水,某醫(yī)院去離子水,宏寶來礦泉水,衛(wèi)生間下水,衛(wèi)生間污水池水。

1.2 主要儀器 高壓蒸汽滅菌器 (日本 Hirayama HVE-50),SHH-3生化培養(yǎng)箱 (上海申安實(shí)驗(yàn)儀器廠),迅數(shù) (Shineso)自動菌落分析儀,BIOMERIEUX(生物梅里埃)ATB生化鑒定儀,O-lympus顯微鏡。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 根據(jù) 2007年 7月 1日起實(shí)行的《國家生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB 5749-2006,進(jìn)行微生物學(xué)檢查：總大腸菌群 (MPN/100 m l或CFU/100 ml)不得檢出,耐熱大腸菌群 (MPN/100m l或 CFU/100 ml)不得檢出,大腸埃希氏菌(MPN/100m l或 CFU/100 m l)不得檢出,菌落總數(shù) (CFU/m l)≤100。

1.3.1 菌落總數(shù) (CFU/m l,CFU表示菌落形成單位)檢測 用滅菌吸管吸取 lml水樣,注入滅菌培養(yǎng)皿中。每個樣本做四個平皿。分別傾注約15 ml己溶化并冷卻到 45℃左右的 EMB培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基 (各 2個),并立即在桌上作平面旋搖,使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。培養(yǎng)基凝固后,倒置于 37℃和 44℃溫箱中,培養(yǎng) 24 h,進(jìn)行菌落計數(shù)。通過菌落計數(shù)儀計數(shù)≥0.5 mm的菌落,記錄每個水樣的菌落平均值。

1.3.2 革蘭染色 對可疑菌落進(jìn)行革蘭染色,觀察并記錄細(xì)菌形態(tài)。

1.3.3 ATB生化鑒定 按說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

各類型標(biāo)本中菌落總數(shù) (CFU/ml)見表 1。

表 1 各類型樣本中菌落總數(shù) (CFU/m l)

飲用水中,隔夜白開水、飲水機(jī)冷熱水中均檢測出過量細(xì)菌,且均檢測出耐熱大腸菌群,均不符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

ATB生化鑒定結(jié)果：湖水中細(xì)菌主要是革蘭陰性桿菌,以假單胞菌屬占優(yōu)勢,革蘭陽性菌主要是芽孢桿菌,還有部分球菌。

3 討論

水是微生物存在與分布的天然良好環(huán)境,水中微生物的含量是評價水質(zhì)優(yōu)劣的重要指標(biāo)。水樣在一定條件下培養(yǎng)后通過觀察與計算所得 l ml水樣中所含有菌落的總數(shù),是自來水日常檢測的七項(xiàng)指標(biāo) (色度、濁度、細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、余氯、鐵、錳)之一。作為一個常用的微生物基礎(chǔ)指標(biāo),細(xì)菌總數(shù)有很強(qiáng)的指標(biāo)意義,它能定量地反映水中異樣細(xì)菌的數(shù)量,能非常直觀地反映水被細(xì)菌污染的程度。若在水樣中檢測出耐熱大腸菌群,則說明水樣受糞便污染。

本次實(shí)驗(yàn)中,飲用水中的隔夜白開水,本次使用的容器是,廣口帶蓋玻璃器皿,細(xì)菌數(shù)量多,造成該結(jié)果的原因可能為,容器敞口暴露在空氣中或口腔中細(xì)菌進(jìn)入容器中,因其在日常生活中使用頻繁,疾病傳播幾率較高,所以應(yīng)多注意器皿的清潔。飲水機(jī)水,根據(jù)數(shù)據(jù)顯示,冷熱兩種水樣耐熱大腸桿菌數(shù)量均明顯超標(biāo),可能的原因?yàn)?飲水機(jī)不間斷加熱,為耐熱細(xì)菌提供了適宜生長的溫度,飲水機(jī)作為日常生活中最常用飲水工具,應(yīng)注意定期清洗消毒,確保飲用水衛(wèi)生安全。宏寶來礦泉水,無細(xì)菌生長,符合飲用標(biāo)準(zhǔn)。過濾飲水機(jī)水,有少量細(xì)菌生長,符合 GB 5749-2006標(biāo)準(zhǔn)。

醫(yī)院用水中腸道門診衛(wèi)生間自來水,37℃下培養(yǎng)有少量大腸桿菌生長,疑為水龍頭接觸空氣中細(xì)菌造成,腸道疾病的傳播主要通過糞口途徑,患者及家屬在醫(yī)院活動過程中極易受到感染,所以應(yīng)定期消毒滅菌。檢驗(yàn)科污水專用自來水,以少量桿菌為主,極少部分耐熱大腸菌群,醫(yī)務(wù)人員接觸較頻繁,應(yīng)定期消毒滅菌,防止工作中的細(xì)菌感染。去離子水,無細(xì)菌生長。

生活用水樣本中的洗菜水,為十六個樣本中細(xì)菌數(shù)最多,多數(shù)為土壤中細(xì)菌。在日常生活中,對新鮮蔬菜的清洗的同時應(yīng)加熱除菌后再食用。衛(wèi)生間自來水,家庭衛(wèi)生間馬桶水箱水,衛(wèi)生間馬桶水,水中均有少量耐熱菌生長。衛(wèi)生間下水,以大腸桿菌為主,細(xì)菌數(shù)量較多,應(yīng)注意消毒滅菌,預(yù)防腸道疾病傳播。衛(wèi)生間污水池水,細(xì)菌數(shù)量較多,應(yīng)注意在清洗潔廁用具時消毒滅菌。湖水,細(xì)菌數(shù)量較多,細(xì)菌主要是革蘭陰性桿菌,以假單胞菌屬占優(yōu)勢,革蘭陽性菌主要是芽孢桿菌,還有部分球菌。湖水中的微生態(tài)環(huán)境復(fù)雜,受影響因素多,在日常生活中,在湖邊游玩應(yīng)特別注意手的清潔。

[1]蔣增輝,王幸艷.介紹幾種新的水中細(xì)菌總數(shù)檢測方法 [J],城市給排水,2005,19(2)：15-16.

[2]洪曉鵬.ATB細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀常見問題的對策及使用技巧 [J],華北煤炭醫(yī)學(xué)院報,2003,5(1)：44.